钩吻枝叶乙醇提取物的化学成分

从钩吻〔Gelsemium elegans(Gardn.et Champ.)Benth.〕枝叶乙醇提取物中共分离鉴定出6个化合物,分别为熊果酸、27-O-对-(E)-香豆酰基-乌索酸、27-O-对-(Z)-香豆酰基-乌索酸、16-表伏康树卡平碱、(Z)-阿枯米定碱、N(a)-去甲基嘌呤。其中,16-表伏康树卡平碱首次从钩吻中分离获得,其余5个化合物首次从钩吻属(Gelsemium Juss.)中分离获得。

钩吻总碱对肺腺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 以人肺腺癌细胞(A549、SPCA1)为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻总碱(TAG)研究其抗肿瘤作用。方法 采用加热回流、萃取等方法提取TAG,利用薄层色谱法鉴定TAG的提取,通过Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合不同浓度的TAG作用A549、SPCA1细胞的细胞融合度并观察A549、SPCA1细胞的形态,采用CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst33258染色、Rhodamine123染色检测细胞凋亡,碘化丙啶单染法检测细胞周期,Western blotting检测凋亡指标蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 经薄层色谱法鉴定成功提取TAG。Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合出TAG作用A549、SPCA1细胞的EC50值分别是99.2、82.0μg/mL,由此确定TAG作用A549、SPCA1细胞的低、中、高浓度依次为50、100、150μg/mL,且细胞拍照观察到随着药物浓度增加细胞融合度下降、细胞数目减少。CCK-8法和集落形成实验结果表明TAG抑制A549、SPCA1细胞增殖(P <0.05)。Hoechst 33258细胞核染色实验发现给药组细胞出现核碎裂;流式细胞术检测Rhodamine123探针发现给药组出现荧光信号强度增加,检测细胞周期发现TAG使A549、SPCA1细胞周期阻滞在G_2/M期;Western blot结果显示TAG诱导Bcl-2蛋白表达下调,Bax表达上调、Caspase-3蛋白切割活化增加,通过细胞染色实验、流式细胞术及Western blotting表明TAG促进A549、SPCA1细胞凋亡(P <0.05)。结论 TAG抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。

基于中红外光谱的含钩吻蜂蜜鉴别研究

为了探究一种快速、准确的含钩吻蜂蜜的检测方法,通过中红外(MIR)光谱仪采集了来自不同地区的216个无毒、含钩吻有毒的蜂蜜样品的MIR光谱图像,选取光谱图像的800~1800 cm^(-1)波段作为主要研究波段,应用主成分分析法并结合偏最小二乘回归(PLS-DA)算法建立有无钩吻鉴别模型,比较不同数据预处理方法的预测结果。仿真结果表明:经一阶导数预处理后建立的蜂蜜有无钩吻鉴别模型的鉴别效果最佳,鉴别准确率达到90.74%。

钩吻解剖结构及钩吻生物碱抑菌作用研究

对钩吻营养和繁殖器官进行解剖学方面研究,并对植物体内的生物碱的分布位置进行定位,此外,还探索了钩吻生物碱的抑菌活性,并对其抑菌机制进行分析研究。研究结果表明:钩吻结构符合一般双子叶植物的典型特征,叶为异面叶,茎圆形,表皮有气孔,髓中有淀粉粒沉积。组织化学染色研究显示,钩吻全株含有生物碱,生物碱类物质主要分布在叶的叶肉组织中,尤其栅栏组织含量较多,维管束中少或无;在茎中,生物碱类物质主要分布在茎的表皮、皮层细胞、韧皮薄壁细胞中,另外,在茎髓周围的薄壁细胞及髓射线细胞中也分布有生物碱类物质;在钩吻根状茎的木栓形成层、栓内层、皮层、韧皮部的薄壁细胞及射线细胞中均可观察到。通过滤纸片法、二倍微量稀释法测定钩吻生物碱的抑菌活性和最小抑菌浓度,结果显示,钩吻生物碱具有广谱抗菌性,对李斯特氏菌ATCC19115、金黄色葡萄球菌ATCC25923、金黄色葡萄球菌CMCC26003、大肠杆菌ATCC25922、大肠杆菌O157、铜绿假单胞菌ATCC27853、铜绿假单胞菌CMCC10104这7种供试菌都具有抑菌活性,且随着生物碱浓度的增加,抑菌效果也随之加强,其中对李斯特菌抑菌效果最明显。选择革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌ATCC25923和革兰氏阴性菌大肠杆菌O157,测定出它们的最小致死质量浓度(MBC)分别为500和750 g/L,利用透射电子显微镜观察钩吻生物碱在其最小抑菌浓度和最小致死浓度处理前后金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠杆菌O157菌体形态及内部结构的变化,结果发现2种菌体都发生了不同程度的改变,具体表现在菌体表面粗糙,出现凹陷,细胞膜和细胞壁发生破裂,内容物溢出甚至引发细胞裂解,发现在最小抑菌浓度下金黄色葡萄球菌形态发生改变,而大肠杆菌的细胞壁也出现分层现象,这表明生物碱破坏了菌体细胞壁的形成,因为细菌形状受到肽聚糖囊泡影响。在最小致死浓度下细胞死亡可能是由于壁的机械强度和渗透性的丧失并发生裂解所引起的。

胡蔓藤化学成分的研究

目的对胡蔓藤中的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20及制备液相色谱进行分离纯化，根据理化性质和光谱分析进行结构鉴定。结果分离鉴定了5个化合物。分别为滨蒿内酯（1）、二（2-乙基己基）邻苯二甲酸酯（2）、3β-羟基-27-（Z）-桂皮酰基-12-烯-28-羧基乌苏酸（3）、3β-羟基-27-（E）-桂皮酰基-12-烯-28-羧基乌苏酸（4）、钩藤酸E（5）。结论化合物1～5为首次从该属植物中分离得到。

钩吻素子体外诱导人结肠腺癌LoVo细胞凋亡的实验研究

目的探讨钩吻素子(Kou)体外能否诱导LoVo细胞凋亡。方法以Kou(50 μmol/L)作用于LoVo细胞,经光镜、电镜和荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并用流式细胞仪检测细胞增殖周期状态。结果通过光镜、电镜和荧光显微镜观察均证实Kou可诱导LoVo细胞凋亡,且凋亡百分率随Kou作用时间的延长而升高。经Kou作用后的肿瘤细胞,细胞周期状态发生明显变化,G0/G1期细胞从31.3%上升到42.3%,S期细胞从62.0%下降到38.7%。结论Kou可诱导LoVo细胞凋亡,且存在时间依赖关系,Kou可抑制细胞DNA的合成,阻止细胞由G1期向S期转化。

胡蔓藤中非生物碱类成分的分离与鉴定(Ⅲ)

目的研究胡蔓藤(Gelsemium elegans Benth.)中的化学成分。方法采用硅胶柱色谱和ODS柱色谱进行分离,Sephadex LH-20及制备液相进行纯化,根据理化性质和光谱分析进行结构鉴定。结果分离鉴定了8个化合物,分别为(+)-8-hydroxypinoresinol(1)、cleomiscosin C(2)、cleomiscosinA(3)、3,4-二羟基苯甲醛(3,4-dihydroxyphenyl aldehyde,4)、咖啡酸(caffeic acid,5)、1-O-咖啡酰基奎宁酸(1-O-caffeoylquinic acid,6)、4-O-咖啡酰基奎宁酸(4-O-caffeoylquinic acid,7)、1-O-咖啡酰基奎宁酸甲酯(1-O-caffeoylquinic acid methyl ester,8)。结论化合物1-8为首次从该属植物中分离得到。

钩吻对肉鸡免疫功能的影响

为探明钩吻对畜禽的促生长作用机理及安全性应用剂量,采用健康 1 日龄三黄鸡 80 羽,预饲一周后,随机分为 4 组,每组 20 羽,第 1 组为对照组,饲喂基础日粮,第 2,3,4 组为处理组,分别添加占基础日粮 1.5%,3%,6%的钩吻干粉.各组均采用相同的饲养管理方式.结果表明,在基础日粮中添加 1.5%,3%的钩吻干粉,肉鸡增重效果明显,其中以 1.5%效果更好(p<0.05),并能显著提高肉鸡的免疫器官指数、外周血 ANAE+淋巴细胞百分率、玫瑰花环形成率及新城疫病毒抗体效价,增强机体免疫功能.而在基础日粮中添加 6%的钩吻干粉,肉鸡生长缓慢,出现明显的中毒症状,并且能够降低免疫器官指数、外周血 ANAE+淋巴细胞百分率、玫瑰花环形成百分率以及新城疫病毒抗体效价,削弱了机体免疫功能,使其抵抗力下降.

胡蔓藤中非生物碱类化学成分的分离与鉴定

目的对胡蔓藤的非生物碱类化学成分进行研究。方法采用HPD-800大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱和ODS中压柱色谱进行分离,采用葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）及制备液相进行纯化,根据理化性质和光谱学数据鉴定结构。结果得到8个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇（β-sitosterol,1）、豆甾醇（stigmasterol,2）、胡萝卜苷（daucosterol,3）、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside,4）、熊果酸（ursolic acid,5）、没食子酸（gallic acid,6）、阿魏酸（ferulic acid,7）、原儿茶酸（protocatechuic acid,8）。结论化合物1~8均为首次从该属植物中分得。

大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱的研究

目的:研究用大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱中主要成分的方法和工艺条件。方法:采用不同型号的HPD系列大孔吸附树脂对钩吻总生物碱进行提取纯化,以高效液相色谱法检测钩吻总生物碱中主要成分的峰面积为指标,考察最佳工艺和参数条件。结果:HPD-500、HPD-600、HPD-800型大孔吸附树脂对钩吻总生物碱提取效果好,并得到HPD-800的最佳工艺和参数条件。结论:采用HPD-800型大孔吸附树脂及不同浓度乙醇洗脱的方法,可用于钩吻总生物碱的提取纯化。

钩吻中非生物碱不同组分体内、外抗肿瘤作用比较研究

目的:探讨钩吻非生物碱不同分离组分的体内、外抗肿瘤作用以及与毒性的关系。方法:采用四甲基偶氮唑盐法分析确定各组分对肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,通过对小鼠进行体内急性毒性实验、对H22瘤的抑制作用及对免疫指标的影响实验,综合评价钩吻非生物碱各组分的抗肿瘤作用。结果:钩吻非生物碱成分体外活性高于生物碱成分,钩吻非生物碱组分2对小鼠肝癌H22生长具有明显的抑制作用,胸腺指数明显高于未用药荷瘤组,其它各组分对肿瘤生长无明显影响,毒性大的组分未显示出抗肿瘤作用。结论:钩吻非生物碱具有一定的抗肿瘤作用,对免疫功能有增强作用,其体内、外抗肿瘤作用与毒性无明显相关性。

钩吻生物碱成分的薄层色谱研究

目的对钩吻根、茎、叶、花、果实生物碱进行薄层色谱研究。方法以钩吻碱甲和钩吻素子为对照,对不同产地钩吻的根、茎、叶、花、果实生物碱进行薄层色谱研究,考察了5种提取方法、4种展开系统、5种薄层板、3种检视方式以及不同温度和湿度对钩吻生物碱薄层色谱的影响。结果以方法 5提取,过PXC柱(阳离子交换树脂),以三氯甲烷-甲醇(9∶1)为展开系统,稀碘化铋钾试液-10%三氯化铁乙醇溶液(10∶1)混合溶液为显色剂,钩吻生物碱薄层色谱信息保留较多,分离较好,薄层效果最佳。结论该方法可作为鉴别钩吻的较专属鉴别方法。

均匀设计与正交设计在钩吻生物总碱提取工艺筛选研究中的应用

目的优选简便高效的钩吻生物总碱的提取工艺,考察不同提取条件下的提取率。方法分别用均匀设计和正交设计两种方法对钩吻生物总碱的提取工艺中溶剂种类、提取系统中固液比例和回流时间3个因素进行优选。结果两种方法的结果均为采用氯仿作为溶剂、固液比例为1.0∶7.5、回流时间3 h×3,所得总碱含量最高。结论正交设计与均匀设计试验所得结果相近,结论基本一致。

钩吻生物碱成分的研究进展

目的对钩吻中生物碱成分的研究进展进行综述,为钩吻生物碱成分的进一步研究奠定基础。方法查阅国内外相关文献47篇,从其中化学成分的理化常数、结构式、提取分离方法、药理作用、毒性以及开发前景等方面对钩吻生物碱类成分的研究进展进行综述。结果与结论钩吻中含有生物碱成分44种,主要为吲哚类生物碱;主要提取分离方法为硅胶柱层析和重结晶;钩吻生物碱具有免疫调节、抗肿瘤、镇痛镇静等药理活性;钩吻中的毒性成分也为生物碱类成分,这给广大研究人员带来了严峻的挑战与机遇。

马钱科钩吻生物碱Sempervirine的分离及其抗烟草花叶病毒的活性

为了解从马钱科钩吻(G.elegans)中分离出Yohimbane-type生物碱Sempervirine对烟草花叶病毒的抑制作用,以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,进行了TMV的抑制试验。结果表明:化合物浓度为50μg/mL时,采用活体半叶枯斑法筛选Sempervirine对TMV的侵染抑制率达52.6%;采用离体半叶枯斑法筛选对病毒增殖的抑制活性率为73.3%。试验结果可为今后Sempervirine抗TMV病毒抑制剂的研究开发提供参考。

钩吻素子注射液的一般药理学研究

目的观察钩吻素子注射液对实验动物精神神经、呼吸及心血管系统的影响。方法用光电计数仪测定钩吻素子注射液对小鼠自发活动的影响,用CYS-0.5型压力换能器测定犬股动脉血压,用TB-611型张力换能器记录犬呼吸曲线,针型电极刺入四肢皮下测二导联心电图。上述指标通过MPA2000多功能信号处理器输入到计算机,由计算机自动采样并处理。实验共观察了小鼠一般行为、15 min内自发活动次数,犬的心率、心电电压最大值、最小值及平均值,犬的平均动脉压、呼吸频率及呼吸深度等9项指标,其中后7项指标观察了给药前及给药后10、20、30、60、90及120 min共6个时间点的变化。结果钩吻素子注射液中、高剂量可显著减少实验小鼠的自发活动次数;对实验犬的呼吸系统及平均动脉压、心电电压最大值、最小值及平均值均无影响。钩吻素子注射液低剂量对犬的心率无影响,但中、高剂量给药前后犬的心率有显著性差异。结论钩吻素子注射液对实验小鼠有一定的镇静作用;而除了对实验动物心率有一定影响外,对呼吸及心血管系统无影响。

酸性染料比色法测定断肠草总生物碱的含量

建立了断肠草总生物碱含量的酸性染料比色测定法,并考察了各种因素对测定结果的影响。以溴甲酚绿作为测试用酸性染料,在总生物碱与其形成稳定络合物时间范围内,利用比色法测定了断肠草总生物碱的含量。此方法快速简便、准确易行。

钩吻总碱的抗炎作用研究

钩吻总碱对角叉菜胶性和蛋清性大鼠足爪肿胀及棉球肉芽肿增生均有明显抑制作用,对幼年大鼠的胸腺及肾上腺重量无明显影响,对大鼠血浆皮质醇含量也无明显影响。钩吻总碱能使大鼠炎性组织释放的PGE的量明显降低。

钩吻碱类提取物对小鼠脾细胞增殖反应的影响

钩吻碱类提取物在浓度大于１．２５μｇ／ｍｌ以上时对混合淋巴细胞培养反应（ＭＬＲ）均有不同程度的抑制作用，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）的最低抑制浓度为２．５μｇ／ｍｌ，抑制率为１８．３％。单独采用Ｃ５７ＢＬ／６ｊ小鼠脾细胞进行实验，促有丝分裂剂为细菌脂多糟（ＬＰＳ５μｇ／ｍｌ），在钩吻碱类提取物浓度为４０μｇ／ｍｌ才出现抑制作用（Ｐ＜０．０５），抑制率为１８％，改用刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ２μｇ／ｍｌ）刺激，钩吻碱类提取物最低抑制浓度为２０μｇ／ｍｌ，抑制率为１２．４％（Ｐ＜０．０５）．脾细胞先经ＣｏｎＡ活化．后用白细胞介素２（５ｕ／ｍｌ）维持培养，此时钩吻碱类提取物的最低抑制浓度为４０μｇ／ｍｌ．抑制率为１７．１％（Ｐ＜０．０５）。

钩吻生物碱化合物体外抗消化系统肿瘤的活性

目的探讨钩吻生物碱化合物抗消化系统肿瘤的活性,并初步探索其构效关系。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT法)比色法,观察钩吻生物碱化合物对人肝肿瘤细胞HepG2、人胃癌细胞MGC80-3、人食管癌细胞TE-11和人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用。结果钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己和1-甲氧基钩吻碱对SW480细胞和MGC80-3细胞增殖具有显著的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对SW480细胞半数抑制浓度(IC50)分别为0.45±0.10,0.76±0.28,0.52±0.22和1.41±0.06mmol.L-1。对MGC80-3细胞IC50分别为0.82±0.19,1.20±0.33,1.14±0.23和1.22±0.11mmol.L-1。钩吻素子、钩吻素甲和钩吻素己对TE-11细胞和HepG2细胞的增殖也有一定的抑制作用,作用呈剂量依赖性,对TE-11细胞半数抑制浓度(IC50)分别为0.74±0.05,1.94±0.30和1.73±0.35mmol.L-1。对细胞HepG2的IC50分别为1.26±0.32,1.82±0.35和1.79±0.54mmol.L-1。结论钩吻生物碱化合物具有抗消化系统肿瘤活性,并存在一定的构效关系。