冠心病合并2型糖尿病患者冠状动脉周围脂肪组织关键差异表达基因筛选及分析

目的分析冠心病(CAD)合并2型糖尿病(T2DM)患者冠状动脉周围脂肪组织(PCAT)中的差异表达基因,筛选CAD合并T2DM的关键差异表达基因,并进行验证。方法在GEO数据库官网选取芯片GSE64554、GSE120774、GSE16415、GSE71416信息,筛选在CAD、T2DM均呈差异表达的基因,进行功能注释和通路分析,获得CAD合并T2DM的关键差异表达基因。选择行心脏瓣膜置换术的患者、CAD患者和CAD合并T2DM患者各20例分别纳入对照组、CAD组和CAD+T2DM组,选择术中留取的PCAT,采用RT-qPCR法检测三组PCAT中的关键差异表达基因。结果共得到CAD、T2DM患者PCAT中均呈差异表达基因54个,根据功能注释得到3个关键基因即人Ⅱ类主要组织相容性复合体DRβ1(HLA-DRβ1)、肿瘤蛋白53(TP53)、CC趋化因子受体9(CCR9)。对照组、CAD组、CAD+T2DM组TP53基因相对表达量依次增高(P均<0.05)。CAD组和CAD+T2DM组CCR9表达高于对照组(P均<0.05)。CAD+T2DM组HLA-DRβ1表达高于对照组(P<0.05)。结论CAD合并T2DM患者PCAT中关键差异表达基因为HLA-DRβ1、TP53和CCR9,其中TP53基因在CAD合并T2DM患者PCAT中表达变化显著,可能有助于CAD合并T2DM的诊断。

兔CCR9基因的克隆与序列分析

设计1对克隆引物,从兔十二指肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明:克隆的兔CCR9基因长为624 bp,编码由208个氨基酸残基组成的CCR9前体蛋白,预测CCR9具有多个跨膜区。克隆的兔CCR9基因与绵羊、人的同源性分别为82.9%、82.7%;推导的兔CCR9氨基酸序列与绵羊、人的同源性分别为80.1%、82.2%,其结构特征与绵羊、人的相一致。