针灸对去卵巢大鼠骨组织TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA表达及凋亡基因Fas的影响

目的:探讨针灸对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用机制和环节。方法:骨组织TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA采用原位杂交,凋亡基因Fas采用免疫组织化学检测。结果:模型组TGF-β_1、VEGF光度低于假手术组(P<0.05),针刺组、艾灸组、雌二醇组TGF-β_1、VEGF光度高于模型组(P<0.05);骨组织FAS蛋白光度,模型组高于假手术组(P<0.01),针刺组、艾灸组和雌二醇组低于模型组(P<0.05～0.01);成骨细胞内FAS蛋白阳性表达率模型组高于假手术组(P<0.01),雌二醇组低于模型组(P<0.01);破骨细胞内FAS蛋白阳性表达率针刺组、艾灸组和雌二醇组高于假手术组(P<0.05～0.01)。结论:针灸能有效调节破骨细胞内Fas基因的表达;能激活TGF-β_1、VEGF活性,使TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA表达增加。

针刺对快速老化模型鼠脑中衰老相关基因表达的调整作用

目的:探讨针刺调整作用在分子水平的反映。方法:以快速老化模型鼠(SAM)脑中衰老相关基因的表达为研究对象,应用由磁珠分离法纯化mRNA,SMA RT-PCR cDNA合成和AFLP-银染法结合形成的mRNA—AFLP分析技术,进行mRNA指纹检测,寻找衰老相关性差异表达的基因片段,并观察针刺对其表达水平的影响。结果:随机应用20对引物作选择性AFLP扩增,共发现42条带型较为清晰的SAMP、R两系组间差异表达带,其中,33条(约占78.6％)在P系相对于R系低表达,9条(约占21.4％)在P系相对于R系高表达。针刺SAMP10的不同腧穴,可使异常低表达的基因表达水平不同程度地上调,使异常高表达的基因表达水平不同程度地下调,其变化均趋同于正常老化的SAMR1。结论:针刺对衰老机体紊乱的分子网络能发挥整体调节作用,促使其恢复协调平衡,从而延缓衰老进程。

SAMP10鼠脑衰老相关基因HSP86、HSP84的表达及针刺影响的研究

目的探讨针刺延缓衰老的作用机制。方法采用快速老化小鼠SAMP10、SAMR1为模型,运用RT-PCR和地高辛标记的非放射性Northern blot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马HSP84、HSP86基因表达的变化。结果SAMP10对照组小鼠热休克蛋白HSP84、HSP86在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论SAMP10小鼠脑衰老与热休克蛋白HSP84、HSP86基因表达异常有关,针刺可以通过调节HSP84、HSP86基因表达增强细胞保护、抑制细胞凋亡、抵抗氧化应激,从而起到延缓衰老的作用。

电针对脊髓损伤早期bcl-2 mRNA及蛋白表达的影响

目的 :探讨电针治疗脊髓损伤的机制。方法 :成年雄性SD大鼠 ,随机分为模型 (MC)组、电针 (EA)治疗组、甲基强的松龙 (MP)组及假手术 (SO)组。采用改良的Allen s捶击法致大鼠T10 脊髓损伤 ,应用原位杂交和免疫组织化学方法及图像定量分析法观察脊髓损伤早期bcl 2mRNA和蛋白的表达。结果 :MC组脊髓损伤后 6hbcl 2mRNA表达有增高趋势 ,伤后 2 4h表达增高 ;伤后6hbcl 2蛋白表达未见明显变化 ,伤后 2 4h表达有增高趋势。EA组bcl 2mRNA及蛋白表达均高于模型组 ,与MP组相比差异无显著性意义。结论 :电针可上调bcl 2mRNA及蛋白的表达 ,从而抑制细胞凋亡 。

针刺对肥胖大鼠瘦素水平和瘦素受体基因表达的作用

目的 :探讨针刺减肥的细胞分子作用机制。方法 :采用RT PCR技术测定瘦素受体 (OB R)基因表达水平 ,放射免疫分析测定血清和下丘脑中瘦素 (Leptin)和胰岛素 (INS)的含量 ,观察针刺治疗前后肥胖大鼠体重、李氏 (Lee s)指数、体脂、血清和下丘脑中瘦素和INS的含量以及下丘脑OB R基因表达的变化。结果 :肥胖的大鼠体重、Lee s指数、体脂及血清瘦素和INS水平均显著高于正常大鼠 ,而下丘脑瘦素和INS水平及OB R基因表达水平均明显低于正常大鼠。针刺治疗取得良好减肥疗效的同时 ,肥胖大鼠血清瘦素和INS均明显回降 ,而下丘脑瘦素和INS水平以及OB R基因表达水平却明显升高。结论 :针刺对肥胖机体中枢和外周瘦素和INS水平的良性调整作用以及促进下丘脑OB R基因表达可能是针刺减肥的细胞分子重要机制。

电针对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜肠三叶因子基因表达的影响

目的:探讨电针预处理对胃黏膜损伤大鼠胃黏膜组织肠三叶因子(intestinaltrefoilfactor,ITF)基因表达的影响及意义。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、胃经组、胆经组。空白组不做任何处理,而模型组仅捆缚7d后造模,胃经组、胆经组须先捆缚电针7d后再造模。造模采用水浸束缚法,水浸束缚10h,经相应处理后检测胃黏膜损伤指数(UI),同时取各组大鼠胃黏膜组织,采用RTPCR方法测胃黏膜组织肠三叶因子基因(ITFmRNA)表达。结果:①胃经组、胆经组与模型组的UI比较差异有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01),说明造模成功;②电针可提高胃黏膜组织ITFmRNA表达水平,胆经组较模型组ITFmRNA表达增高,胃经组较胆经组ITFmRNA表达非常显著升高(P<0.01)。结论:电针对胃黏膜组织特异性调整作用,与肠三叶因子基因表达差异有关。

针刺对快速老化小鼠SAMP10转录调节因子NF-E2、YB-1、LRG47的影响

目的:探讨针刺延缓衰老的机制。方法:采用快速老化小鼠(SAMP10)、正常老化小鼠(SAMR1)为模型,运用地高辛标记的非放射性Northernblot技术,观察8月龄SAMR1对照组、SAMP10对照组、SAMP10针刺组及SAMP10非穴位刺激组全脑、皮层和海马NF-E2、YB-1、LRG47基因表达的变化。结果:SAMP10对照组小鼠NF-E2、YB-1、LRG47在全脑、皮层、海马中的表达下调,针刺后表达上调并趋向于正常组。结论:SAMP10小鼠脑衰老与NF-E2、YB-1、LRG47基因表达异常有关,针刺可以通过调节NF-E2、YB-1、LRG47基因表达增强红细胞系统功能和细胞增殖,提高细胞抗菌免疫,从而起到延缓衰老的作用。

电针“内关"对急性心肌缺血大鼠心肌c-fos基因表达的影响

目的:探讨电针“内关”改善急性心肌缺血的机制。方法:将96只大鼠随机分为假手术组、心肌缺血模型组、心肌缺血模型加电针组,采用结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血实验模型,造模成功后,电针双侧“内关”。用生化方法检测血清心肌酶活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌中c-fos基因的表达。结果:心肌缺血模型组血清心肌酶活性和心肌c-fosmR—NA表达显著高于假手术组(P<0.05),电针后降低,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:电针“内关”改善急性心肌缺血的机制与下调心肌组织c—fosmRNA的表达有关。

针刺对多发梗塞性痴呆大鼠海马CuZnSOD mR-NA及蛋白表达的影响

目的探讨针刺治疗血管性痴呆的作用机理。方法通过栓子注入法制作多发梗塞性痴呆模型,随机分为模型组、针刺组和非穴组,并设正常组和假手术组。应用原位杂交和免疫组化的方法检测痴呆大鼠海马区CuZnSOD的基因表达情况,并分析针刺的干预作用。结果与正常组比较,模型组大鼠海马区CuZnSOD mRNA及蛋白表达下降(P<0·01);针刺组可明显增强其表达水平(P<0·01),与正常组及假手术组比较无显著性差异。结论针刺在转录和翻译水平上均可上调CuZnSOD的表达水平,从而增强抗氧化酶活性,以有效地清除自由基,改善痴呆大鼠的智能状态。

针刺心经干预急性心肌缺血大鼠心脏基因表达谱研究

目的:从基因水平揭示针刺心经干预心肌缺血的作用机制。方法:采用结扎冠状动脉前降支法复制大鼠急性心肌梗死模型。比较肺经组与模型组、心经组与模型组的心脏基因表达谱变化。结果:与模型组比较,肺经组中大于2倍的差异表达基因(包括EST)有20个下调和14个上调,主要是免疫和炎性反应相关基因,细胞信号和传递蛋白相关基因等;心经组中有70个下调和20个上调,主要是离子通道和运输蛋白相关基因,细胞凋亡和应激反应蛋白相关基因,代谢相关基因,细胞信号和传递蛋白相关基因,DNA结合、转录和转录因子类基因,免疫和炎性反应相关基因等。结论:心经组、肺经组中大于2倍的差异表达基因的数目和类型有较大差异,提示针刺心经干预心肌缺血作用有相对特异性。

针刺对实验性脑出血大鼠不同脑区及心肌内皮素mRNA表达的影响

目的:探讨针刺治疗脑心综合征的作用机制。方法:将实验性大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组、针刺组、针刺对照组,针刺组取“内关”“水沟”“人迎”,针刺对照组取“神门”“膻中”。采用组织原位杂交技术检测其中枢心血管特定调节区域及心肌内皮素(ET)mRNA表达的动态变化,并对阳性反应物进行图像定量分析。结果:实验性脑出血可迅速诱导ET基因在脑出血周围区、下丘脑、脑干、海马、心肌的异常表达。脑出血6h即可见ET mRNA表达上调,到24h达高峰,72h时段虽略有减少,但仍高于正常水平。同时心肌的ET表达增多。针刺可阻断由脑出血诱导的ET基因表达的增加。结论:针刺通过阻断脑出血诱导的ET基因表达的增加,起到对脑出血造成的神经元及心肌损伤的保护作用。

针刺单穴对快速老化模型鼠衰老相关基因表达的影响

目的:探讨针刺单穴水沟、内关、太冲、肾俞、后三里对快速老化模型鼠(SAM)P10品系脑中衰老相关性基因片段表达水平的影响。方法:应用由磁珠分离法纯化信使核糖核酸(mR-NA),5’末端模板转换机制进行逆转录—多聚酶链式反应(SMART-PCR)合成互补脱氧核糖核酸(cDNA)和扩增片段长度多态性分析(AFLP)—银染法结合形成的mRNA—AFLP分析技术。展示各组mRNA之间的差异。结果:随机应用20对引物作选择性AFLP扩增,共发现42条带型清晰的SAM P、R两系组间差异表达带。其中,各有34、26、26、8和17条差示带的表达分别受针刺水沟、内关、太冲、肾俞、后三里穴的显著调节而趋同于R系。结论:针刺不同单穴能不同程度地影响衰老相关性基因片段的表达,从而发挥不同程度的抗衰老作用。

针刺对大鼠脑组织神经生物学基因表达的研究

目的采用基因芯片技术,分析探讨针刺预处理抗脑缺血再灌注损伤作用的分子机制。方法取雄性Wistar大鼠6只,3只为正常对照组,另3只为针刺预处理组。针刺组先行“肾俞”“百会”针刺预处理,出针后0.5h断头取脑。基因芯片技术进行基因表达差异分析。结果针刺预处理后0.5h,大鼠脑组织表达变化大于2倍的基因共265个,20个基因表达差异具有显著性意义(P<0.05)。其中8个基因表达上调,12个基因表达下调;涉及神经元信号传递类(离子通道、递质、受体、第二信使)基因11个,涉及转录调控类基因5个,涉及代谢酶类基因2个,涉及热休克反应类基因1个,涉及细胞骨架类基因1个。结论一些针刺诱导的基因表达产物在针刺预处理抗脑缺血再灌注损伤过程中发挥了重要作用;针刺预处理后神经细胞功能状态的改变可能是其随后发挥抗脑缺血再灌注损伤作用的重要基础。

三种差异表达基因克隆方法的比较

为了能快速、有效、准确地克隆出有意义的基因 ,本文就常用的三种基因克隆方法 ,即差异显示PCR、抑制性消减杂交、PAP -PCR ,从其原理、应用、优越性、主要缺陷等几方面进行了简要概述。这些方法为中医、针刺治疗各种疾病过程中有关的基因差异表达 ,以及有关基因分子克隆提供有效的分子生物学工具。

从经络的液晶体液模型到针刺的基因位点调控

在体液环境中 ,酶元的激活 ,即对酶分子链上各活性基团相对位置的调整之精度是纳米数量级的。如此之精度在液相环境内只有通过液晶排序才能实现。针刺影响内分泌的实质是“脏腑之气 (内分泌 )由先天之精气 (基因 )化生”。当前人类基因组计划中最大的难题就是对基因组功能的检测 ,面对天文数字的碱基对之排列组合 ,借助针灸等可影响内分泌的中医手段 ,可人为地引发各基因组合进入活动状态 ,将可能加快揭示生命之谜的进程。

低频电针对海洛因觅药行为及相关脑区FosB蛋白表达的影响

目的:观察低频电针对海洛因觅药行为和FosB蛋白在相关脑区表达的影响,探讨电针作用机制。方法:用累进固定比率程序建立大鼠海洛因复吸模型,动物随机分3组:“三阴交”留针对照组、低频弱电针组和低频强电针组。用条件性线索和小剂量海洛因引燃诱导海洛因觅药行为;运用免疫组化技术观察FosB蛋白表达。结果:与治疗前比较,留针对照组和弱电针组均能减少海洛因戒断大鼠条件性线索诱导的觅药行为,弱电针组处理后小剂量海洛因引燃诱导的觅药行为也较对照组明显减少,同时,弱电针组处理后伏隔核、腹侧苍白球、基底外侧杏仁核等脑区FosB蛋白的表达明显减少。而强电针组对觅药行为虽有一定抑制作用,但无统计学意义,海洛因引燃后活动度较对照组和弱电针组增高。结论:低频电针低强度刺激能治疗海洛因觅药行为,这种作用可能与调节伏隔核、基底外侧杏仁核等脑区的神经适应有关。