广东省脑膜炎奈瑟氏菌porA基因限制性片段长度多态性分型研究

目的 分析广东省在不同流行时期 ,特别是 80年代后期以来脑膜炎奈瑟氏菌 (Nm)的特点。方法 选择 35株A、B、C群流脑菌株 (196 6～ 2 0 0 0年 )进行porA基因聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)分型研究 ,采用PCR反应扩增porA基因 ,PCR产物纯化后经限制性内切酶MspI酶切 ;10 %聚丙烯酰胺凝胶 (PAGE)电泳分离酶切产物 ,银染显色。结果 35株被检菌株分为5种RFLP型 ,2 0株A群菌株 (病人 17株 ,带菌者 3株 )分 3型 ,谱型与我国代表谱型相同 (即a1、a2 、a3型 ) ;11株B群菌株分 5型 ,其中 6株病人菌株每两株 1型 ,分为 3型 (即b2 0 、b2 1、b2 1a2 型 ) ,其中b2 0 型与a3 型谱型相同 ;4株C群菌株有 3株与b2 1a2 菌型相同。结论 不同的血清群可有相同的RFLP谱型 ;A群Nm不同的流行周期有自己优势菌型 ,广东省 6 0年代与 80年代后期至今的代表菌型相同 ,为a3 型 ;B群RFLP谱型比A群变异程度大 ,同一时期分离到的菌株可有几种不同的RFLP谱型 ;

快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增技术的建立

目的建立快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,探讨其用于淋球菌感染早期诊断的可行性。方法利用Primer-ExplorerV3软件分别针对淋球菌porA及16S rRNA基因设计6条引物(2条内引物FIP、BIP,2条外引物F3、B3,2条环引物LF、LB),以淋球菌标准菌株基因组DNA为模板,进行LAMP扩增,同时,以外引物F3、B3为PCR引物,进行PCR扩增,并比较2种扩增方法的灵敏度和特异性。结果LAMP法与PCR法灵敏度相同,可检测到10个拷贝的目的基因;其针对淋球菌porA和16S rRNA基因的引物对脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌的DNA均不能扩增。结论已成功建立了检测淋球菌porA和16S rRNA基因的LAMP技术,为淋球菌的快速检测提供了新的手段,有望成为淋球菌常规检测的简便方法。

广东首株W135群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌的分子特征分析

目的分析广东首次从患者脑脊液分离到的W135群流行性脑脊髓膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis，N.meningitidis）的分子特征。方法复苏培养并用奈瑟菌生化鉴定系统（APINH）生化鉴定从患者脑脊液分离到的1株W135群N.meningitidis，以本地近年分离的1株C群和3株A群N.meningitidis为对照；通过DNA序列测定分析外膜蛋白编码基因（porA、porB）可变区型别；通过多位点序列分型（muhilocussequencetyping，MLST），采用SplitsTree在线软件分析进化关系，研究其分子特征。结果该W135群Mmeningitidis的porA可变区（VR）型别为P1．5，2，属主要致病型别之一；porB的可变区Ⅰ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ分别为1、1、1、17型，无可变区Ⅵ、Ⅷ；MLST等位基因谱为：2、123、4、3、8、4、6，序列型（sT）为2960，属sT—11／ET-37克隆系。4株对照菌株porA的VR型别均为P1．20，porB可变区Ⅳ为7型，无可变区Ⅶ；C群对照株属ST-4821克隆系，3株A群属ST-5克隆系。结论该W135群Mmeningitidis的分子特征与国外分离株相同，而与本地流行的A群及C群菌株不同。

2011年广州市脑膜炎奈瑟菌分离株的分子特征分析

目的对2011年广州市分离的6株脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,N.meningitidis)进行分子特征分析。方法提取菌株基因组DNA,通过DNA序列测定分析外膜蛋白(outer membranes proteins,OMPs)编码基因porA、fetA可变区型别;通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST),采用Splits Tree在线软件分析进化关系,研究其分子特征。结果 6株菌株的OMPs编码基因porA、fetA可变区型别均不相同;MLST分型显示其分属5个不同的序列型(Sequence Type,ST),其中2株B群菌株序列型为ST-5615,1株C群菌株序列型为ST-5542,1株血清不能分群菌株序列型为ST-2146,分离自健康带菌者和密切接触者的2株W135群菌株的序列型不同,其中密切接触者为高致病性的ST-11型,而健康带菌者为新发现的ST-9133型。结论广州市N.meningitidis的基因型具有多样性特点,本研究为完善我市N.meningitidis分型数据、研发新疫苗及免疫规划措施的制订提供参考。

两株W135群脑膜炎奈瑟菌的分子特征分析

目的对广东省中山市2007年-2012年间分离的两株W135群脑膜炎奈瑟菌进行病原分子特征分析,调查两者之间的关系,并探索其可能来源。方法使用16S rRNA基因分型、porA可变区分型及多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)对两株W135群脑膜炎奈瑟菌(ZS07株,ZS12株)进行分子生物学分析。结果两株W135群脑膜炎奈瑟菌分型结果一致,16S rRNA分型为Group 31,MLST型别为ST-11/ET-37(等位基因谱:2,3,4,3,8,4,6),porA测序分型测序为:P1.5,2。结论脑膜炎奈瑟菌ZS07株与ZS12株的亲缘关系高度同源,与我国近几年流行的脑膜炎奈瑟菌亲缘关系较远,与2000年麦加朝圣后由朝觐者引起全球流脑流行的W135群菌株关系密切。