新基因pp3774的亚细胞定位以及在肝癌细胞系和组织中的表达谱研究

目的探讨新基因pp3774在肝癌细胞系、人肝癌及癌旁肝、肝硬化以及正常肝组织中的表达差异及其生物学功能。方法脂质体转染-荧光观察pp3774-GFP融合蛋白的亚细胞定位；合成新基因pp3774特异性多肽,制备兔源性多克隆抗体；用RT-PCR、蛋白印迹、免疫细胞化学及免疫组化方法检测pp3774基因在7个肝癌细胞系及214例肝细胞癌、18例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异。流式细胞术检测转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡率。结果 pp3774蛋白主要定位于细胞质(内质网为主)；RT-PCR检测结果表明pp3774 mRNA在肝癌细胞系BEL-7402、Huh-7、MHCC-97L,及HepG2中高表达,SMMC-7721、MHCC-LM3及人永生化肝细胞系L-02中度表达,而在Hep3B中低表达；肝癌及癌旁组织中pp3774mRNA的表达表现为癌旁高于癌(P<0．05)；免疫组化结果显示pp3774蛋白表达程度依次为正常肝≥肝硬化≥癌旁肝组织>肝癌。转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡发生率高于对照组约10％。结论 pp3774基因是一个具有抑制肝癌细胞生长功能的新基因。

新基因pp3774抑制NIH/3T3细胞生长机制初探

目的探讨新基因pp3774在NIH／3T3细胞生长调节中的可能机制。方法用pp3774-HA融合表达质粒通过脂质体法转染NIH／3T3细胞,G418筛选,建立稳定细胞系,并用RT-PCR检测pp3774在NIH／3T3细胞中mRNA的表达状况；利用Atlas cDNA array分析pp3774的异位表达对NIH／3T3细胞基因表达谱的影响；用RT-PCR方法验证Atlas cDNA array杂交结果。结果 pp3774超表达可以明显下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dpl等基因的表达,同时可上调P13K p85α、FGF7、MMP-2等基因的表达。上述基因表达的改变可能通过调控细胞周期实现pp3774对NIH／3T3细胞的生长抑制。结论新基因pp3774抑制NIH／3T3细胞生长可能与pp3774基因下调cyclin D1、cyclin E、转录因子Dpl的表达有关。