术前FOLFOX6方案联合腹腔镜胃癌根治术对进展期胃癌患者Lgr5、Oct4表达的影响

目的探讨术前FOLFOX6方案辅助化疗联合腹腔镜胃癌根治术对进展期胃癌患者Lgr5、Oct4表达的影响。方法选取2012年3月至2015年3月河南省中医院Ⅱ、Ⅲ期胃癌患者124例,采用随机数字表法分为对照组和实验组,各62例。对照组患者接受胃癌根治术治疗,实验组患者接受术前FOLFOX6方案辅助化疗联合腹腔镜胃癌根治术治疗。评估治疗后两组患者的近期有效率和不良反应发生率;比较手术前后两组患者胃黏膜组织中Lgr5和Oct4表达情况。结果实验组的治疗有效率高于对照组(P <0.05);两组患者在白细胞减少、肝肾功能损害、腹泻及肠梗阻这几种并发症的发生率上差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组患者Lgr5和Oct4表达均降低(P<0.05),但治疗后实验组Lgr5和Oct4表达低于对照组(P<0.05)。结论术前FOLFOX6方案辅助化疗联合腹腔镜胃癌根治术治疗进展期胃癌患者效果优异,治疗安全性好,可有效降低胃癌组织Lgr5和Oct4表达。

白细胞介素24基因抑制体内胶质瘤生长的机制研究

目的:探讨人白细胞介素24(interleukin-24,IL-24)基因抑制胶质瘤生长的作用机制。方法:建立人胶质瘤裸鼠动物模型,瘤内注射含有IL-24基因的重组腺病毒Ad5F35-IL24,观察肿瘤生长情况,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡率,Western印迹法检测肿瘤组织中IL-24、双链RNA激活的蛋白激酶(double-stranded RNA activated protein kinase,PKR)、p-PKR、p38-MAPK和p-p38-MAPK蛋白的表达情况。结果:Ad5F35-IL24重组腺病毒感染裸鼠胶质瘤组织后,IL-24蛋白呈现高表达,胶质瘤的生长受到明显抑制(P<0.01);TUNEL法检测发现肿瘤细胞凋亡率明显升高(P<0.05);Western印迹法检测发现Ad5F35-IL24感染后PKR和p38-MAPK的蛋白表达及其磷酸化均较对照组显著升高(P<0.01)。结论:IL-24具有抑制胶质瘤生长和诱导其细胞凋亡的作用,其机制与上调并激活PKR和p38-MAPK蛋白途径有关。

Snail mRNA与环氧化酶-2 mRNA在乳腺癌中的表达及临床意义

目的探讨Snail mRNA及环氧化酶-2(COX-2)mRNA在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法应用原位杂交技术测定30例乳腺单纯性增生、30例乳腺导管内癌和70例乳腺浸润性导管癌组织中Snail mRNA及COX-2mRNA的表达。结果①Snail mRNA及COX-2 mRNA在乳腺单纯性增生、乳腺导管内癌和乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率分别为23.3%、46.7%、81.4%和13.3%、63.3%、77.2%,组间差异有统计学意义(P<0.01);Snail mRNA及COX-2 mRNA在同组间表达差异无统计学意义(P>0.05)。②Snail mRNA及COX-2 mRNA表达均与乳腺浸润性导管癌淋巴结转移有关(P<0.05,P<0.01),与年龄、肿瘤大小和组织学分级无关(P>0.05)。③乳腺浸润性导管癌组织中Snail mRNA与COX-2mRNA表达呈显著正相关(r=0.53,P<0.01)。结论 Snail及COX-2在乳腺癌的发生、发展中起重要作用,检测二者的表达对判断乳腺癌的预后有重要价值。

鼻咽癌组织RASSF1A基因的表达

目的探讨RASSF1A基因在鼻咽癌发病过程中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术在4种鼻咽癌细胞株、32例鼻咽癌组织和16例正常鼻咽部组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604微卫星多态性位点的等位基因杂合性丢失状况。结果RASSF1A基因在4种鼻咽癌细胞株中低表达,32例鼻咽癌组织的RASSF1A基因表达显著低于16例正常鼻咽部组织(P=0.001);43.75%(14/32)的鼻咽癌组织在3p21.3 D3S4604位点发生了杂合性丢失。鼻咽癌RASSF1A基因表达与性别、年龄、颈部淋巴结转移、TNM临床分期、D3S4604位点杂合性丢失和血清EB病毒VCA/IgA抗体滴度无显著相关性,但伴远处转移的鼻咽癌组织的RASSF1A表达显著低于无远处转移的鼻咽癌(P=0.014)。结论RASSF1A基因的表达下调可能是鼻咽癌发病过程中的晚期事件,3p21区域可能还存在与鼻咽癌发生密切相关的抑瘤基因。

人鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中bcl-2、p53及c-erbB-2表达与EB病毒LMP1的关系

目的 研究 EB病毒 L MP1在人高分化鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中的作用及与 bcl- 2、p5 3及 c- erb B- 2蛋白表达的关系。方法 将表达 EB病毒 L MP1的人高分化鼻咽癌细胞及对照阴性细胞移植于裸鼠体内 ,然后将移植瘤细胞再移入裸鼠建立第二代移植瘤 ,如此传至第三代 ,分别观察移植瘤的成瘤和生长的变化 ,以免疫组化和图像分析技术检测移植瘤细胞 bcl- 2、p5 3及 c- erb B- 2蛋白表达。结果 表达 L MP1的鼻咽癌细胞原代移植成瘤率达 75 .0 %,比对照组显著增高 (P<0 .0 1)。平均潜伏期及体内倍增时间分别为 2 9.6± 7.7天和 2 .81± 0 .13天 ,比对照组明显缩短 (P<0 .0 1)。表达 L MP1的鼻咽癌细胞 (C1L)各代移植瘤的 bcl- 2蛋白表达阳性率显著低于对照组对应的各代细胞的表达 (P<0 .0 1) ;bcl- 2蛋白表达阳性率有显著下降趋势 ,对照组细胞 bcl- 2蛋白表达则呈峰值变化 ;各细胞系体内移植瘤细胞的 p5 3及 c- erb B- 2蛋白表达的变化趋势较为相似 ,即各细胞系不同代间 p5 3表达的阳性率有显著下降趋势 ,c- erb B- 2蛋白表达阳性率有显著上升趋势。表达 L MP1的鼻咽癌各代移植瘤细胞的 p5 3及 c- erb B- 2蛋白表达阳性率显著高于对照组对应的各代 (P<0 .0 1)。结论 L MP1使鼻咽癌细胞的生长能力增强 。

胆囊癌发病机制及外科治疗的研究进展

胆囊癌(GBC)在临床上常易被一些良性疾病所掩盖而发生意外胆囊癌(IGBC)。在病因方面,胆囊结石的长期刺激、>1 cm的胆囊息肉、胆囊腺瘤及胆囊腺肌症等与GBC的关系密切。在分子生物学机制家方面,长链非编码RNA、微小RNA、表面生长因子受体以及一些膜蛋白等均参与GBC的发生发展,有望为临床提供一定的参考价值。GBC的术中、术后的外科处理至关重要,关乎患者的生存期。在术中高度怀疑或已证实GBC的患者中,充分评估病情,应及早中转开腹,避免二次手术。术后病理检查发现的IGBC,应尽早行二次手术,以免肿瘤进展和扩散。

乳腺癌新辅助化疗中Survivin、Ki-67的表达及其意义

目的:研究Survivin、Ki-67在乳腺癌新辅助化疗前后的表达及其意义。方法:应用免疫组织化学法检测41例乳腺癌新辅助化疗前后标本中Survivin、Ki-67的表达。结果:新辅助化疗有效率为70.73%。化疗前后Survivin、Ki-67变化显著,分别由化疗前的63.41%和(47.30±19.71)%,降到化疗后的34.15%和(30.01±12.43)%(P<0.05)。新辅助化疗前后Survivin表达与Ki-67显著相关(P<0.05)。新辅助化疗后Survivin表达阳性者,化疗效果差(P<0.05);而Ki-67高表达者化疗有效率高于低表达者(P<0.05)。结论:Survivin、Ki-67可作为指导乳腺癌化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标。

人黑素瘤抗原MAGE-A4对p53转录活性的影响

目的:探讨人黑素瘤抗原-A(melanoma antigen-A,MAGE-A)对p53转录活性的影响。方法:选用p53缺失型人肺癌细胞系H1299,采用荧光素酶报告分析法、RT-PCR、Western印迹法、克隆形成实验和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling,TUNEL)等方法研究MAGE-A4对p53转录活性的影响。结果:荧光素酶报告分析结果显示,转染p53基因(25ng)可以使p21WAF1启动子介导的荧光素酶表达增加(P<0.01);共转染恒定量(25ng)的p53基因和不同量的MAGE-A4基因(100、200和400ng)后,p21WAF1启动子介导的荧光素酶表达均明显高于单独转染p53基因时的表达量(P<0.01)。RT-PCR和Western印迹法检测结果也显示,转染p53基因可以使p21WAF1mRNA和蛋白表达水平增加(P<0.01),共转染MAGE-A4基因和p53基因后,p21WAF1mRNA和蛋白表达水平均明显高于单独转染p53基因时的表达水平(P<0.01)。克隆形成实验及TUNEL染色结果显示,转染p53基因可以使H1299细胞克隆形成数减少及凋亡细胞数增加(P<0.01),共转染MAGE-A4基因和p53基因以后,H1299细胞克隆形成数与单独转染p53基因组相比减少,而凋亡细胞数与单独转染p53基因组比较增加(P<0.01)。结论:MAGE-A4可以增强p53的转录活性及功能发挥。

三肽化合物酪丝缬肽对人肝癌裸鼠移植瘤基因表达谱的影响

目的：观察小分子三肽化合物酪丝缬肽(tyroservatide,YSV)的抗肿瘤作用,分析YSV对肿瘤细胞基因表达情况的影响。方法：建立人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤模型,应用基因芯片技术分析YSV对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤肿瘤组织基因表达的影响,应用RT-PCR方法验证相关基因的表达情况。结果：给药剂量为320μg·kg^(-1)·d^(-1)时,YSV能显著抑制裸鼠人肝癌BEL-7402移植瘤的生长,抑瘤率为52.37%,与生理盐水组比较均有统计学意义(P＜0.05)。YSV组与生理盐水组比较有781个基因存在统计学差异,其中52个基因与抑瘤效果密切相关,37个促进肿瘤增殖的基因表达下调,15个抑制肿瘤增殖的基因表达上调。RT-PCR检测证实YSV能够明显抑制肿瘤细胞癌基因Akt与上调抑癌基因PTEN的表达。结论：YSV具有显著的抗肿瘤活性,可以抑制肿瘤增殖相关基因的表达,增强抑制肿瘤生长相关基因的表达水平,以恢复它们之间的平衡关系,达到抗肿瘤细胞效应。

TRAIL、bcl-2在卵巢癌组织中的表达及其相关性探讨

目的:探讨TRAIL和bcl-2在卵巢癌组织中的表达及相关性。方法:用免疫组化SP法检测10例正常卵巢,20例良性卵巢肿瘤,60例卵巢癌组织中TRAIL蛋白和bcl-2蛋白表达情况,并进行二者间相关性分析。结果:(1)正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤、卵巢癌中TRAIL蛋白的表达率分别为90.0%、80.0%、38.3%;bcl-2蛋白的表达率分别为0%、20.0%、55.0%。两者间比较:在正常卵巢,良性卵巢肿瘤中TRAIL蛋白、bcl-2蛋白的表达无差异(P>0.05);在良性、恶性卵巢肿瘤中TRAIL蛋白、bcl-2蛋白的表达有差异(P<0.05)。(2)在卵巢癌中TRAIL蛋白表达与组织学类型、病理分级无关(P>0.05),与临床分期期别密切相关(P<0.05);bcl-2蛋白的表达与组织学类型无关(P>0.05),与病理分级、临床分期期别密切相关(P<0.05)。(3)TRAIL蛋白表达和bcl-2蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。结论:TRAIL蛋白和bcl-2蛋白可能共同参与了卵巢癌的发生、发展过程。并且可能通过减少TRAIL蛋白表达,升高bcl-2蛋白表达,起到协同抑制肿瘤细胞凋亡作用,从而促进了卵巢癌的发生、发展。

二氯化钴对腺病毒基因表达的影响

目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响。方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2处理后,Western印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率。结果:适当浓度的CoCl2(0.4和0.08μg/mL)能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4μg/mLCoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制。0.4μg/mLCoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平;Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达。结论:CoCl2能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关。

长链非编码RNA UCA1与miRNA-99b在膀胱癌细胞株和膀胱癌组织表达的相关性分析

目的:验证LncRNA UCA1与miRNA-99b的相关性。方法:采用荧光定量PCR法检测UCA1和miRNA-99b在过表达和敲低表达UCA1的膀胱癌细胞、膀胱癌组织中的表达。结果:在敲低UCA1表达的膀胱癌细胞5637中,UCA1表达下调60%,而miRNA-99b的表达上调250%;在过表达UCA1的膀胱癌细胞UMUC2中,UCA1表达上调410%,而miRNA-99b的表达下调60%;UCA1在膀胱癌中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),而miRNA-99b在膀胱癌中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05);UCA1与miRNA-99b在膀胱癌组织中的表达呈负相关(R=-0.502,P<0.05)。结论:UCA1负向调节miRNA-99b的表达,但是它对miRNA-99b的调节在膀胱癌发生发展中的作用机制还需深入研究。

信号转导及转录激活因子3在肿瘤发生发展中的作用

组成型激活的信号转导及转录激活因子3(STAT3)在肿瘤组织中高表达,可能参与肿瘤的发生、转移及耐药。研究发现P53、制瘤素(OSM)、Piwi、Ras同源物Ⅰ(ARHⅠ)、BRCA1、血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、生存素(survivin)等基因在肿瘤组织中异常表达时,伴随着STAT3的磷酸化升高,进一步研究证明P53、Piwi、制瘤素、ARHⅠ、BRCA1、VEGF、HIF-1α、生存素等基因可能直接或间接影响STAT3而影响肿瘤的发生、发展。此外,STAT3对肿瘤细胞及宿主免疫起着重要的调节作用。STAT3活化从肿瘤细胞传播到肿瘤相关的免疫细胞导致免疫抑制,为肿瘤的发生提供有利的环境。本文就STAT3在肿瘤形成中的作用进行综述,以便为肿瘤的治疗提供新的靶点。

HIF-1α在食管上皮细胞中的诱导表达及对光动力疗法的影响

目的:探讨食管上皮Het1A细胞经诱导表达HIF1α后对光动力学效应的影响。方法:HIF1α的稳定高表达采用氯化钴(CoCl2)化学诱导法,并应用光敏剂5ALA处理细胞,光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)光照射采用波长>600nm的红光光源,细胞存活活性以MTS法测定,应用Westernblot测定HIF1α蛋白质水平,RNA干扰采用脂质体转染法,并利用TdT流式细胞法测定细胞凋亡率。结果:Het1A细胞经100μmol/L的CoCl2孵育4h后可诱导HIF1α蛋白的高表达;PDT后高表达HIF1α的细胞具有较高的细胞存活活性,且细胞凋亡率由未诱导时的16%降低至4%;不同浓度CoCl2诱导的HIF1α蛋白质水平与PDT后细胞存活活性相一致;siRNA转染阻断HIF1α的诱导表达,细胞又恢复了对PDT的应答能力。结论:HIF1α在Het1A细胞中的高表达使PDT效果下降;HIF1α部分通过抑制PDT引起的细胞凋亡而抵御PDT效应。提示HIF1α可作为治疗靶基因,降低肿瘤组织HIF1α表达水平可能有助于改善PDT临床疗效。

Snail蛋白在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的观察Snail蛋白在骨肉瘤中的表达,探讨其在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法采用免疫组化SP法检测骨肉瘤组织42例、骨软骨瘤10例中Snail蛋白的表达。结果①Snail蛋白在骨肉瘤中表达高于骨软骨瘤组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.01);②Snail蛋白在骨肉瘤组织中的表达与软组织浸润、Enneking分期、肺转移密切相关(P<0.01),而与性别、年龄、肿瘤部位、Dahlin类型无关(P>0.05);③骨肉瘤中Snail蛋白阳性患者累积生存率明显低于阴性患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Snail蛋白在骨肉瘤组织中的高表达提示其对骨肉瘤的发生、发展和浸润、转移起重要作用并预示预后不良。

泛素样蛋白D调控乳腺癌干细胞对乳腺癌生物学行为的影响

目的探讨泛素样蛋白D(UBD)对乳腺癌生物学行为的影响。方法应用免疫组织化学染色法对乳腺癌组织行UBD染色并分析其表达情况;应用实时荧光定量法检测乳腺癌细胞中UBD在基因水平的表达变化;运用细胞划痕实验、Transwell实验探索UBD对乳腺癌细胞侵袭转移、化疗耐药等恶性生物学行为的影响;行Spheroid成球实验、实时荧光定量检测UBD分子过表达下对乳腺癌细胞干性表型的调控情况。结果组织学检测发现UBD在乳腺癌组织中高表达,细胞学检测发现UBD促进乳腺癌细胞侵袭转移和化疗耐药性,并促进乳腺癌细胞干性细胞群的富集及自我更新等恶性生物学过程;且UBD过表达促进了乳腺癌细胞干性相关基因CD133、CD90、Nanog、Bmi-1、ABCG2、KLF-4、Oct-4的表达(P<0.05)。结论首次发现乳腺癌组织高表达UBD分子,UBD参与乳腺癌细胞侵袭转移、化疗抵抗等恶性生物学行为,有望成为乳腺癌潜在的临床诊疗标志物。

基质金属蛋白酶-9在晚期直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在晚期直肠癌组织中的表达状况及其与分化程度、肿瘤转移及患者预后的关系。方法应用免疫组化和计算机图像分析技术,对晚期直肠癌34例癌组织活检标本进行MMP-9表达和反应强度定量检测。结果 MMP-9阳性率为67.6%(23/34),阳性物质主要分布于癌组织细胞质。MMP-9阳性率与癌组织分化类型无关(P>0.05),与肝和(或)肺转移状况及患者预后密切相关(P<0.05)。低分化腺癌MMP-9阳性细胞平均积分光密度(OD)值显著高于中分化腺癌和高分化腺癌(P<0.05),有肝和(或)肺转移者显著高于无转移者(P<0.05),1年内死亡者显著高于生存者(P<0.05)。结论测定MMP-9对于判断直肠癌恶性程度、预测生物学行为和评估患者预后具有重要意义。

5-氟尿嘧啶对大肠癌Fas蛋白表达的调控作用

目的 :探讨 5 -氟尿嘧啶 (5 - Fu)对大肠癌细胞 Fas蛋白表达水平的调控作用。方法 :采用流式细胞术检测了培养的 9株细胞 (6株为人大肠癌细胞 ) Fas蛋白的表达情况 ,并观察了 5 - Fu(2 6 0 mol/ L )处理后大肠癌细胞 Fas蛋白表达水平的变化。结果 :在检测的 6株人大肠癌细胞中 ,有 5株肿瘤细胞表面表达 Fas蛋白 ;用临床浓度的 5 - Fu处理后 ,HCT- 116和 Wi Dr的Fas蛋白的表达水平显著上调。 结论 :5 - Fu可上调肿瘤细胞 Fas表达水平 ,由此可能增加其对 Fas介导的机体免疫监视作用的敏感性。

肾癌患者血清miRNA-378的表达及其临床意义

目的探讨肾癌患者血清miRNA-378的表达及其临床意义。方法选择明确诊断原发性肾癌患者33例(肾癌组)、肾脏良性肿瘤患者15例(肾良性肿瘤组)以及同期进行健康体检的患者20例(健康对照组),采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-q PCR)检测肾癌组术前、术后6个月及另两组血清miRNA-378的表达水平,并分析miRNA-378的表达与肾癌临床病理参数的相关性。结果三组血清miRNA-378表达水平比较差异有统计学意义,肾癌组(术前)、肾脏良性肿瘤组miRNA-378表达均高于健康对照组,肾癌组(术前)高于肾脏良性肿瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05);肾癌组术前miRNA-378表达水平高于术后,差异有统计学意义(P<0.01)。miRNA-378的表达水平在临床分期、手术方式、分化程度方面的差异均有统计学意义(P<0.01),在性别、年龄等方面的差异无统计学意义(P>0.05)。miRNA-378诊断肾癌的敏感度为75.8%,特异度为90.0%,ROC曲线下面积(AUC)0.88,95%置信区间为0.766,0.955。结论 miRNA-378可能有助于肾癌的诊断和术后疗效的预测。

肿瘤坏死因子和干扰素对大肠癌Fas配体表达的调控作用

目的 :探讨不同细胞因子对大肠癌细胞 Fas配体 (Fas L )表达水平的调控作用。方法 :采用 Western印迹法测定了两种细胞因子 (1× 10 6 U / L TNF-α或 IFN-γ)处理后大肠癌细胞 Fas L表达水平的变化。结果 :所检测的 6株大肠癌细胞全部表达 Fas L蛋白 ;TNF-α和 IFN-γ处理 DL D- 1细胞 10 h,显著上调其 Fas L蛋白的表达水平 ;TNF-α和 IFN-γ以及 PMA +离子霉素 (ionomycin)处理 SW6 2 0细胞 10 h,也显著上调 SW6 2 0细胞的 Fas L蛋白表达水平。 TNF-α和 PMA +离子霉素处理SW6 2 0细胞 48h进一步增加 SW6 2 0的 Fas L 蛋白表达 ,IFN- γ处理 SM6 2 0则表达增加不明显。结论 :TNF- α和 IFN- γ等细胞因子具有上调某些大肠癌细胞 Fas L