Genistin防治增生性玻璃体视网膜病变的研究

目的:研究Genistin对外伤性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的防治作用。方法:用自体富含血小板血浆玻璃体腔内注射制备兔外伤性PVR模型,并同时将二甲基亚砜、2μg或40μg genistin、1mg氟尿嘧啶各0.1 mL注入兔眼玻璃体内,在不同时间点用眼底镜检查眼底情况,进行PVR分级。第28天行40μg genistin组模型眼及正常眼ERG检查;同天将4组模型眼球取出制作病理标本,行光镜检查。结果:A组第10天出现视网膜脱离,PVR随着时间延长发展至更严重等级。40μg genistin和氟尿嘧啶组也发生PVR,但其严重程度低于对照组(P<0.05)。组织学检查40μggenistin组未发现明显视网膜形态改变,视网膜电图检查也未观察到显著功能变化。结论:Genistin玻璃体腔内注射是安全的,并能有效抑制兔外伤性PVR的发生发展。

Genistin对Aβ_(1-42)诱发的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨Genistin对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法将培养的PC12细胞分为:正常对照组、Aβ1-42处理组和Genistin预处理组。Aβ1-42处理组用Aβ1-42处理细胞,Genistin预处理组在用Aβ1-42处理前2h加入Genistin。使用细胞形态学方法、LDH法和MTT法观察Genistin的神经保护作用。结果单纯Aβ1-4210滋mol/L处理细胞24h,MTT吸光值减小,LDH释放量明显增加,与正常对组比较差异有显著性(P<0.01);细胞形态发生明显改变。用25mmol/LGenistin预处理PC12细胞2h,MTT吸光值与Aβ1-42处理相比明显增加,LDH释放量显著降低,与Aβ1-42处理组相比差异有显著性意义(P<0.01)。结论Genistin在体外抑制Aβ1鄄42对细胞的毒性作用。

葛藤花HPLC指纹图谱建立及3种成分含量测定

目的建立葛藤花HPLC指纹图谱,并测定染料木苷、鸢尾苷、染料木素的含量。方法分析采用AQ-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长260 nm。再进行聚类分析和主成分分析。结果10批药材指纹图谱中有17个共有峰,相似度大于0.970。3种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.9990),平均加样回收率100.50%~104.30%,RSD 1.93%~5.21%。各批药材聚为2类,3种主成分累积方差贡献率为84.822%。结论该方法稳定可靠,可用于葛藤花的质量控制。

酶法水解大豆异黄酮

利用Absidiasp R菌株 ,通过液体发酵 ,得到了一种高活性的大豆异黄酮糖苷水解酶 ,该酶水解糖苷型大豆异黄酮的最适底物浓度为 7 5mg/mL ;最适反应时间为 1 5h ;该酶在温度为 2 0～5 0℃、pH为 4 0～ 7 0范围内相对稳定 ,最适酶解反应温度为 40℃ ,最适pH值为 5 0 ;金属离子对该酶活力的影响不显著 ,其中Co2 +、Zn2 +对该酶有激活作用 ,Ag+、Cu2 +对该酶有抑制作用 ,Fe3+浓度<5 0mmol/L时 ,对该酶有促进作用 ,当离子浓度 >5 0mmol/L时 ,则有抑制作用。利用实验获得的最适酶解条件反应 ,可使染料木苷生成染料木素的转化率达到 1 0 0 %。

HPLC同时测定槐角丸中生药槐角的4种有效成分

目的:建立测定槐角丸中游离染料木苷、芸香苷、槲皮素和染料木素的反相高效液色谱测定法.方法:shim-pack Vp-ODS色谱柱(4.6mm×150mm,5 μm);MeOH-H2O-HAc(40:60:0.25)为流动相;检测波长为256 nm;柱温30℃.结果:染料木苷在0.059～0.352μg、芸香苷在0.435～2.610μg、槲皮素在0.020～0.121μg、染料木素在0.053～0.319μg线性关系良好,r分别为0.999 6,0.998 2,0.998 9,0.999 9,4组分平均回收率在98.7%～100.2%,RSD分别为1.21%,1.36%,0.47%,1.54%(n=5).结论:该方法同时测定4种有效成分,方便、准确、灵敏度高,重复性好,可适用于槐角丸质控.

淡豆豉炮制前后异黄酮组分含量的比较

采用HPLC法对淡豆豉炮制前后大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量进行测定,以探讨淡豆豉炮制前后异黄酮组分含量的变化。结果表明:炮制对淡豆豉中异黄酮组分含量有明显影响,炮制后大豆苷、染料木苷含量降低,大豆苷元、染料木素含量升高。淡豆豉炮制后苷类成分含量降低,苷元类成分含量升高,提示淡豆豉的炮制存在由苷向苷元转化的过程。

高速逆流色谱法分离制备大豆异黄酮中的大豆苷和染料木苷

采用高速逆流色谱法分离纯化大豆异黄酮中的大豆苦和染料木昔。溶剂系统为乙酸乙酯一醋酸一水,体积比为5:1:10,上相为固定相,下相为流动相,逆流色谱仪转速为800r/mm,流速为1.5ml/min。所得大豆昔、染料木昔经高效液相色谱分析测定,纯度分别达到98.2%和99.2%(面积归一法)。

均匀设计与正交设计联用优选大叶千斤拔的微波辅助提取工艺研究

通过均匀设计与正交设计联用,优选大叶千斤拔中染料木素和染料木苷的微波辅助提取工艺。在微波功率700 W的条件下,以染料木素和染料木苷得率为考察指标,对解析剂比、微波时间、液料比、提取温度、提取时间5个因素进行均匀设计,并在此基础上选取因素水平范围进行正交实验。结果表明,最佳提取工艺条件为:微波功率700 W,提取温度80℃,解析剂水用量7∶1 m L/g,微波时间120 s,液料比35∶1 m L/g,提取时间50 min。该工艺条件下,染料木素和染料木苷得率为1.380 4 mg/g。微波辅助提取法具有省时高效、提取物品质好等优点。正交设计与均匀设计联用是优选提取工艺的好方法,具有实验次数少、药材用量小、优选工艺可靠等优点,特别适用于珍贵药材有效成分的提取工艺研究。

酸法水解大豆异黄酮的研究

采用酸法将糖苷型大豆异黄酮水解成其苷元形式。通过正交实验得到盐酸水解大豆异黄酮的最佳反应条件为 :盐酸浓度为6mol·L-1,酸解时间为3h;酸解温度50℃ ,盐酸体积与原料比为4∶1。利用本实验获得的最适酸解条件反应 。

大豆异黄酮含量与品质性状相关性分析

大豆异黄酮是大豆中的重要成分,具有广泛的营养价值和保健作用。利用高效液相色谱技术(HPLC)检测了黑龙江省野生和栽培大豆252份种质资源的总异黄酮、大豆苷、染料木苷含量,同时检测了蛋白质和脂肪含量,分析了大豆异黄酮与大豆主要品质性状的相关性。结果表明:不同类型大豆种质异黄酮含量存在明显差异;大豆总异黄酮含量与蛋白质含量呈极显著负相关,与蛋白质和脂肪总含量也呈极显著负相关,与脂肪含量呈不明显正相关。

反相高效液相制备色谱法分离淡豆豉中的大豆苷、黄豆苷、染料木苷

目的:建立一种快速、高效地从淡豆豉的乙醇提取物中分离3种大豆异黄酮苷的方法。方法:采用索氏提取除去脂溶性成分,再经1300型大孔吸附树脂初步分离纯化,分别用水、10%、20%、30%、40%、50%、70%、95%乙醇梯度洗脱,其中对40%乙醇洗脱流分采用反相高效液相色谱法制备,色谱条件:YWG C18柱(10.0 mm×200 mm,10μm),进样量750μl,乙腈-水-冰醋酸(25:75:1,V/V/V)为流动相,流速3.0 m l/m in,检测波长260 nm。结果:快速分离得到大豆苷、黄豆苷和染料木苷,经外标法检测,所得化合物纯度均达到99%以上。结论:该方法操作简便,可重复进样,适用于高纯度大豆异黄酮苷的制备。

黑龙江省野生和栽培大豆异黄酮与其组分相关性分析

利用高效液相色谱法(HPLC)检测了黑龙江省556份不同生态区以及不同类型大豆的异黄酮、大豆苷和染料木苷含量,其中野生大豆243份,栽培大豆313份。结果表明:野生大豆异黄酮含量高于栽培大豆,同时筛选出高异黄酮含量种质3份,低异黄酮含量种质2份。异黄酮、大豆苷和染料木苷含量三者间的相关分析表明,大豆异黄酮含量与大豆苷含量及染料木苷含量、大豆苷含量与染料木苷含量均呈极显著正相关。

高效液相色谱法测定食品中大豆异黄酮含量

建立食品中大豆异黄酮含量测定的高效液相色谱法。样品以甲醇 :水 (80 :2 0 )于 6 5°C水浴中振荡提取 ,氢氧化钠皂化 ,冰醋酸酸化 ,离心过滤后用液相色谱分析。色谱柱为HypsilBDSC18(5 μ ,4 .6× 2 5 0mm )柱 ,梯度洗脱 ,流动相A为水 :甲醇 :冰乙酸 (88:10 :2 ) ,流动相B为 2 %冰乙酸的甲醇溶液 ,流速 0 .4mL/min ,紫外检测波长 2 6 0nm ,柱温 32°C。各组分 (大豆甙 ,黄豆甙 ,染料木甙及其相应甙元大豆黄素 ,黄豆黄素 ,染料木素 )的峰面积与其相应浓度呈良好的线性相关 ,r >0 .9999。以豆奶粉和奶粉为基质 ,六种大豆异黄酮加标回收试验的平均回收率分别为 85 .1% - 138.1%和 6 7.8% - 95 .9% ,RSD分别在 5 .5 % - 17.8%和 1.8% - 9.5 %之间。采用建立的方法测定了黄豆、豆芽、蚕豆、腐竹、豆腐、豆浆、豆奶粉、奶粉等样品中大豆异黄酮含量 ,测定结果令人满意。

薄层扫描法测定槐角及槐角丸中的染料木苷和总染料木素

在硅胶G薄层色谱板上,采用双波长薄层扫描法建立了测定槐角、槐角丸中的染料木苷和总染料木素的分析方法。染料木苷和染料木素的薄层展开剂分别为V(三氯甲烷)∶V(甲醇)∶V(冰乙酸)=25∶7∶4和V(三氯甲烷)∶V(甲醇)∶V(冰乙酸)=15∶1∶0.1,染料木苷和染料木素分别在0.5～3.0μg和0.9～5.0μg范围内呈良好线性。该方法为中药槐角和中成药槐角丸的质量控制提供检测方法。

染料木苷和黄豆苷的纯化和分离

为了深入研究大豆提取物中主要成分染料木苷和黄豆苷单体的性质,本实验进行了二者的分离。首先用丙酮萃取和无水乙醇重结晶等方法纯化大豆异黄酮提取物,得到纯度较高的染料木苷和黄豆苷混合物。然后,利用Sephadex LH-20柱层析实现了染料木苷和黄豆苷的分离。

千斤拔药材的质量标准研究

目的：建立千斤拔药材的质量标准。方法：观察千斤拔药材性状和显微鉴别特征；采用薄层色谱法（TLC）对药材中染料木苷和染料木素进行定性鉴别；检查药材水分、总灰分和浸出物。采用高效液相色谱法（HPLC）测定药材中染料木苷和染料木素的含量：色谱柱为ThermoBETASILC18，流动相为乙腈-0.5％冰醋酸（梯度洗脱），流速为1.0ml/min，检测波长为261nm，柱温为25℃，进样量为10μl。结果：千斤拔和大叶千斤拔的性状和显微鉴别特征显著；染料木苷和染料木素的TLC斑点清晰，分离良好，阴性对照无干扰；药材水分为3.69％～8.37％，总灰分为1.72％～6.74％，浸出物为5.89％～19.65％。染料木苷和染料木素检测进样量线性范围分别为0.0129～2.5880、0.0046～0.9232μg（r均为0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜3.0％；加样回收率分别为99.63％～101.87％（RSD＝0.82％，n＝6）、97.19％～100.34％（RSD＝1.23％，n＝6）。结论：该标准可用于千斤拔药材的质量控制。

双模板大豆异黄酮类特异性分子印迹聚合物微球的制备及性能研究

为探寻大豆异黄酮类物质的富集分离的新方法和新思路,选用染料木苷和大豆苷含量总和为89.2%的大豆异黄酮为模板,采用沉淀聚合法,以4-乙烯基吡啶(4-VP)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,成功制备了分子印迹聚合物微球,并对微球进行了吸附静态学、吸附动力学、类特异选择性和结构表征研究。通过紫外光谱法研究了模板分子与功能单体的相互作用,结果显示4-VP和模板分子作用强烈,模板分子和4-VP最佳摩尔质量比为1:6。静态吸附实验表明印迹聚合物(MIP)与非印迹聚合物(NIP)相比,MIP对模板分子具有明显的特异性吸附。吸附动力学实验表明聚合物微球在5h内对模板分子达到饱和吸附。类特异选择性实验表明MIP对多种大豆异黄酮类单体组分具有明显的类特异性吸附,特异吸附量高。此印迹聚合物微球有望在大豆苷异黄酮富集、分离、检测方面得到广泛的研究和应用。

染料木苷纯度标准物质定值及不确定度评估

目的建立纯度标准物质的2种定值方法并对染料木苷的纯度定值和不确定度进行评估。方法采用液相色谱质谱法和核磁氢谱法对原料进行定性确证。质量平衡法中主要采用液相色谱-面积归一化法对原料的主成分进行定量分析,然后采用微量水分测定仪测定原料中的水分,采用顶空气相色谱法测定挥发性杂质,采用电感耦合等离子质谱法测定金属元素杂质。定量核磁法采用一级纯度标准物质苯甲酸为内标,经过方法优化,通过不同位移上氢峰的面积比进行纯度定值。结果 2个方法定值结果均为99.72%,质量平衡法的不确定度评估为0.19%,定量核磁法的不确定度评估为0.09%。结论建立的2种染料木苷纯度标准物质的定值方法准确、可靠,不确定度评估合理,适合大豆异黄酮类纯度标准物质的准确定值。

高效液相色谱法测定大豆异黄酮粉中大豆苷和染料木苷的含量

目的 探讨高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)测定大豆苷和染料木苷的含量.方法 十八烷基键合硅胶柱,流动相为甲醇-水-乙酸(40∶60∶1.2),检测波长254 nm.结果 大豆苷在0.008～0.4 μg内,染料木苷在0.0068～0.34 μg内,峰面积与浓度线性关系良好(大豆苷r=0.998 6;染料木苷r=0.999 9).结论 该方法简便快捷,重复性好,可作为质量控制指标之一.

大叶千斤拔的微波预处理-超声波提取工艺及其抑菌活性研究

对大叶千斤拔的微波预处理-超声波提取工艺及其抑菌活性进行研究。以染料木素得率和染料木苷得率为考察指标,通过单因素实验与正交实验优选大叶千斤拔中染料木苷和染料木素的最佳提取工艺,并对微波预处理-超声波提取法、超声波提取法和热水浸提法进行了对比研究,同时研究大叶千斤拔提取液和染料木素的抑菌活性。最佳提取工艺条件为:微波功率700 W,超声波功率200 W,解析剂比7∶1(m L/g),微波时间180 s,乙醇为提取溶剂,乙醇体积分数90%,液料比35∶1(m L/g),提取温度80℃,提取时间15 min。该工艺条件下,染料木苷得率为0.9047 mg/g,染料木素得率为0.4834 mg/g,总得率为1.3881 mg/g,优于超声波提取法和热水浸提法。在实验范围内染料木素和大叶千斤拔提取液对3种常见菌的抑制作用大小均为金黄色葡萄球菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌,但染料木素对大肠杆菌无明显抑制作用。微波预处理-超声波提取法具有省时高效的特点,特别适用于大叶千斤拔染料木苷和染料木素的提取,大叶千斤拔提取液具有良好的抑菌活性,可作为天然的食品防腐剂。