目的:观察人食管鳞癌细胞(Eca-109)在RNAi抑制其环氧合酶2(COX-2)基因表达后生物学行为的变化。方法:采用DNA栽体细胞内表达siRNA技术,以含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER,针对人COX-2mRNA分别构建重组质粒peiRNA-C1、psiRNA...目的:观察人食管鳞癌细胞(Eca-109)在RNAi抑制其环氧合酶2(COX-2)基因表达后生物学行为的变化。方法:采用DNA栽体细胞内表达siRNA技术,以含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER,针对人COX-2mRNA分别构建重组质粒peiRNA-C1、psiRNA-C2,转染Eca-109细胞,对照组采用空白质粒pSUPER。ELISA测定培养液上清PGE2浓度,Real Time PCR检测细胞COX-2mRNA水平,流式细胞术分析细胞凋亡与周期分布,绘制细胞生长曲线。结果:在psiRNA-C1、psiRNA-C2转染Eta-109细胞24h后,细胞COX-2mRNA水平分别下降了17.9%、56.1%,培养液上清PGE2浓度分别下降了10.8%、54.9%;psiRNA-C2组细胞生长明显减缓,G0-G1期细胞比例增加(P〈0.01),G2-M期细胞减少(P〈0.05)、细胞凋亡率增加(P〈0.01)。结论:RNAi技术可显著抑制人食管鳞癌细胞COX-2基因表达,从而导致肿瘤细胞增殖减缓、凋亡增加。展开更多
文摘目的:观察人食管鳞癌细胞(Eca-109)在RNAi抑制其环氧合酶2(COX-2)基因表达后生物学行为的变化。方法:采用DNA栽体细胞内表达siRNA技术,以含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER,针对人COX-2mRNA分别构建重组质粒peiRNA-C1、psiRNA-C2,转染Eca-109细胞,对照组采用空白质粒pSUPER。ELISA测定培养液上清PGE2浓度,Real Time PCR检测细胞COX-2mRNA水平,流式细胞术分析细胞凋亡与周期分布,绘制细胞生长曲线。结果:在psiRNA-C1、psiRNA-C2转染Eta-109细胞24h后,细胞COX-2mRNA水平分别下降了17.9%、56.1%,培养液上清PGE2浓度分别下降了10.8%、54.9%;psiRNA-C2组细胞生长明显减缓,G0-G1期细胞比例增加(P〈0.01),G2-M期细胞减少(P〈0.05)、细胞凋亡率增加(P〈0.01)。结论:RNAi技术可显著抑制人食管鳞癌细胞COX-2基因表达,从而导致肿瘤细胞增殖减缓、凋亡增加。