不同生长期龙胆药材与土壤矿质元素动态变化及关联分析

目的对不同生长期龙胆药材与根际土壤矿质元素含量动态变化进行分析,阐明其矿质元素内在协调机制,为龙胆繁育及栽培提供理论基础,促进辽产道地药材龙胆产业化发展。方法运用电感耦合等离子体质谱法对不同生长期龙胆药材及根际土壤矿质元素进行含量测定,构建不同生长期龙胆药材及其根际土壤矿质元素指纹图谱,结合相关性分析、主成分分析(PCA)等多元统计方法,分析不同生长期龙胆药材与根际土壤矿质元素动态变化机制。结果不同生长期药材和根际土壤无机元素指纹谱变化规律趋于一致;Cu和Ca分别是区别不同年限龙胆药材和根际土壤的关键元素;龙胆药材对Fe、Mn、Ca、Cd元素的富集能力较强;龙胆药材和根际土壤之中存在Zn-Fe等多对相关性元素;并以矿质元素为参考,确定2、3年生龙胆药材矿质元素含量评分最佳的时期分别为生长旺盛期和幼苗期。综合单因素方差分析和正交偏最小二乘分析(OPLS-DA)结果,Fe、K分别为龙胆药材、根际土壤不同生长期间差异的关键元素;龙胆药材整个生长时期有害元素含量均低于限量值,药材安全性较好。结论不同生长期龙胆药材与土壤中矿质元素含量变化具有规律性,可根据各元素之间的协抗关系及其生长期的特异性指导龙胆药材规范化生产,依据不同矿质元素指纹图谱区分龙胆年限。

龙胆不同栽培土壤微生物群落结构及其驱动因子

以黑土、沙土和沙壤土为研究对象,采用农化分析技术测定土壤化学因子,利用16S rRNA和ITS技术开展根际土壤细菌和真菌基因组测序研究,以期探讨龙胆不同栽培土壤微生物群落结构及多样性特征。结果表明:3种土壤的养分除了TP以外均存在明显差异(P<0.05),其中,黑土养分含量最高,沙壤土次之。黑土中酸杆菌门、绿弯菌门和担子菌门占优势,在沙壤土中,放线菌门、疣微菌门和被孢霉门占优势,而变形菌门、芽单胞菌门和子囊菌门在沙土中占优势。Shannon和Chao1指数表明黑土微生物群落多样性和丰富度略高于沙壤土,但二者显著高于沙土(P<0.05)。PLS-PM分析表明,土壤有机碳(SOC)与土壤细菌群落结构呈极显著正相关(P<0.01),而土壤速效养分(NH_(4)^(+)-N、NO_(3)^(-)N,AP和AK)与细菌多样性具有极显著负相关关系(P<0.01)。可以看出,SOC和速效养分影响了根际细菌群落结构和多样性,黑土和沙壤土比较适合栽培龙胆。

超高效液相色谱法测定龙胆药材中的獐芽菜苦苷和龙胆苦苷

目的建立超高效液相色谱（UPLC）法测定龙胆药材中活性成分的方法。方法采用L9（34）正交表安排实验,确定最佳提取条件。色谱柱：Shimadzu C18（3.0 mm×75 mm,1.7μm）;流动相：乙腈-0.1%磷酸（V∶V=5.5∶94.5）,流速0.80 ml/min;检测波长235,270 nm;柱温为40℃。结果獐芽菜苦苷、龙胆苦苷分别在0.154 8～1.858 0 mg/ml,0.322～5.152mg/ml范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为102.09%,RSD=1.68%（n=6）;103.80%,RSD=1.11%（n=6）。结论采用UPLC法控制龙胆质量,操作简单,结果准确,方法可行。

龙胆的化学成分研究

目的对龙胆的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱进行分离 ,通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构。结果从乙酸乙酯层分离得到 6个化合物 ,分别为 :山奈酚(kaempferol,Ⅰ )、L 芝麻脂素 (L sesamin ,Ⅱ )、水杨酸 (salicylicacid ,Ⅲ )、阿魏酸 (ferulicacid ,Ⅳ )、齐墩果酸 (oleanolicacid ,V)、pranferin(Ⅵ )。其中化合物Ⅵ为本属中首次发现。

龙胆药材提取工艺的正交实验设计法优选

目的建立龙胆最佳提取工艺,为龙胆的种植和质量研究奠定基础。方法采用L9(34)正交表安排实验,确定最佳提取条件。色谱柱为Shimadzu C18(3.0 mm×75 mm,1.7μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸(V∶V=5.5∶94.5),流速0.80ml/min;检测波长235,270 nm;柱温为40℃。结果影响因素最大的是提取溶剂,其次是提取方法,最小的是提取时间。结论各因素较优的水平组合为A1B1C1,即甲醇超声提取30 min。

龙胆药材中3种功效成分含量的同时测定

目的建立快速测定龙胆药材中马钱酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量测定方法。方法色谱柱:Kinetex C18(4.6mm×100 mm,2.6μm),Phenomen;流动相:乙腈-0.4%磷酸(5.0:95.0),流速:1.0 ml·min-1;检测波长:240 nm;柱温为40℃。结果马钱酸在0.404 8～3.238 4 mg·ml-1范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.60%,RSD=1.39%(n=6);结论建立的方法可以控制龙胆质量,操作简单,结果准确,方法可行。

龙胆总裂环环烯醚萜苷质量标准研究

目的:建立总裂环环烯醚萜苷(龙胆)的质量标准。方法:采用TLC(薄层色谱)法对提取物中的龙胆进行了定性鉴别;用紫外分光光度法测定了有效部位总裂环环烯醚萜苷的含量;用高效液相色谱法测定了龙胆苦苷的含量。结果:在TLC图谱中可检出龙胆的特征斑点;龙胆苦苷在7.187～35.94μgm/l间线性关系良好,r=0.9992,平均回收率为96.8%,RSD=1.06%(紫外分光光度法);龙胆苦苷在0.8488μg～4.244μg间线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为97.3%,RSD=0.7%(高效液相色谱法)。结论:所建立的方法可行、重现性好,能有效地控制提取物中龙胆总裂环环烯醚萜苷的质量。

龙胆化学成分及药理作用研究进展

综述了龙胆化学成分及药理作用研究进展,为龙胆的进一步研究、利用和开发提供理论基础。

中药龙胆主要病害及其防治

龙胆病害是影响龙胆产量和品质的重要原因,已成为制约龙胆药材生产的关键。本文就龙胆主要病害的病原菌、发生特点、病害症状、病害影响及防治方法等方面进行了综述,为更好的防治龙胆病害,提高龙胆的产量和品质提供参考。

不同采收期和加工方法对龙胆药材含量的影响

目的确定龙胆药材合理的采收期和加工条件,科学指导生产。方法采用Shimadzu C18色谱柱;流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（5.5∶94.5）,流速：0.8mL.min^-1;检测波长：235、270nm;柱温：40℃。结果8-10月,根中的獐牙菜苦苷和龙胆苦苷,基本上同步上升,也同步下降,8月后逐渐降低,9月时含量最低,10月以后含量逐步升高。结论通过考察不同时间龙胆药材的含量,确定了最佳采收期和加工条件。

盐胁迫对龙胆种子萌发初生、次生代谢产物的影响

以龙胆种子为实验材料,采用培养皿纱布法研究盐分胁迫对粗糙龙胆种子萌发期间初生、次生代谢产物含量的影响。结果表明,龙胆种子可轻度耐盐,丙酮酸与龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量呈显著负相关关系,当盐分浓度达到54mmol/L时,不利于龙胆种子中次生代谢产物龙胆苦苷、獐牙菜苷的成分积累。

近红外漫反射光谱法同时测定龙胆中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的含量

目的:建立近红外光谱快速测定龙胆药材功效成分的方法。方法:在10 000～4 000 cm-1光谱范围内扫描样品,以交叉验证均方根误差(RMSECV)和决定系数(R2)为指标,通过筛选,确定了用于建模的最优近红外波段和光谱预处理方法。采用偏最小二乘法建立NIR与HPLC信息间的关系。结果:龙胆苦苷与獐牙菜苦苷近红外预测值与真实值的R2分别为0.9534,0.8135,RMSECV为0.184,0.0177,裂环烯醚萜苷总量的决定系数和校正均方差为0.9435,0.211。结论:该模型可直接对样品进行快速准确的检测,具有非破坏性、无污染等优点,可以应用于龙胆药材的定量测定。

中草药龙胆中微量元素的形态分析

采用传统煎煮法对丽水当地中草药龙胆中钙、锌、铁、铜、锰、铅、镉和铬等8种元素进行提取,并用微孔滤膜分离提取液中可溶态与悬浮态;利用大孔吸附树脂分离可溶态中有机态与无机态;采用正辛醇/水分配体系模拟水煎液中这8种微量元素在人体胃肠中分配情况,再用火焰原子吸收光谱法(FAAS)测定了各种形态中的8种元素。研究结果显示:龙胆中8种元素的提取率在34.25%～74.53%,浸留比在49.58%～371.1%,悬浮态颗粒吸附率在6.5%～29.8%,该法对各元素的加标回收率在91.3%～108.5%;相对标准偏差小于3.5%;锌、铁、铜、锰在正辛醇/水分配体系中溶出性受酸碱性影响大些。

东北栽培龙胆HPLC指纹图谱的研究

目的:采用高效液相色谱法对栽培龙胆药材进行指纹图谱的研究,为栽培龙胆药材质量控制提供实验依据。方法:实验采用Kromasil C8柱(4.6mm×150mm,5μm),以甲醇-乙腈-磷酸溶液为流动相进行洗脱,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长240nm。结果:建立栽培龙胆药材指纹图谱,特征共有峰有6个。结论:该方法操作简单,精密度、稳定性和重复性良好,有助于栽培龙胆的质量控制。

龙胆药材中龙胆多糖的提取工艺研究

在单因素试验的基础上,应用响应面法对回流法提取龙胆多糖的工艺条件进行优化。最佳工艺参数为:提取温度为100℃、料液比为1∶27.86(g∶m L)、提取时间3.70h,药材粒径0.245mm。在此条件下,水溶性龙胆多糖的提取率达到11.08%,与响应面预测值基本吻合。该法操作简便、成本低,为工业龙胆多糖的大量生产提供了一定的理论依据。

龙胆种质资源RAPD评价

目的应用RAPD标记对60份龙胆种质资源遗传多样性进行分析评价,为龙胆种质资源评价与资源库构建提供理论依据。方法应用RAPD对龙胆基因组DNA进行扩增,扩增产物在1.3%琼脂糖凝胶电泳后,在NTSYS-pc软件系统下进行统计分析。结果22条引物共得到147条扩增条带,其中96.6%的片断具有多态性。平均每个引物可获得6.6个DNA片断。各种质间的遗传相似系数(GS)范围为0.235 3￣0.821 4,平均值为0.599 2。聚类分析表明:利用RAPD标记将60份供试材料全部分开,根据GS平均值将所有材料分为12类,其中有6份材料分别单独聚为1类,有34份材料聚为1类,其余20份材料分别聚为5类。结论所有材料间的GS值都小于0.83,相似度较低,60份种质间的遗传差异较大,个体间具有较高的遗传多样性水平;RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。

播种期、种植方式、施肥量对龙胆产量和质量的影响

研究表明:播种期、种植方式、施肥量对龙胆产量和质量具有重要影响·在沈阳地区龙胆以5月5日为最佳播种期;行距20cm,株距9cm;定植2年生苗为合理的种植方式;龙胆以施基肥为主,较对照增产13·95%;三种化学肥料试验中,施磷肥产量最高,较对照增产13·5%·

正交设计优选龙胆中龙胆苦苷的提取工艺

目的优选龙胆中龙胆苦苷的最佳提取工艺。方法采用高效液相色谱法测定龙胆中龙胆苦苷的含量,以乙醇浓度、提取时间、料液比为考察因素,以龙胆苦苷提取率为考察指标,采用L9(34)正交设计优选最佳提取工艺条件。结果最佳提取工艺为提取溶剂70%乙醇,提取时间1.5 h,料液比1∶60。结论本法工艺简单、经济、提取率高,可为中药龙胆的开发利用提供参考。

不同种植密度和基肥对龙胆某些农艺性状的影响

通过对龙胆草种植密度及基肥的试验研究,分析二者对龙胆草地上部和地下部农艺性状的影响。结果表明,不同种植密度对龙胆草地上部性状株高、叶长和叶宽影响不大,各处理之间差异不显著,茎粗以20株/行处理最好,与15株/行之间差异达到显著水平。根部各性状随着种植密度的增加而增加,尤其对根长、根重和小区产量的影响达到显著水平,龙胆种植密度以25株/行和20株/行处理比较好,可促进植株生长,并能提高其产量;复合肥基肥试验中,除100g/m2处理外,各处理地上部株高、茎粗、叶长和叶宽值均高于对照,对植株生长起到促进作用;地下部各性状,除100g/m2处理外,各处理根长、根粗、须根数、根重和小区产量值均高于或显著高于对照,综合分析龙胆植株各生长性状和产量性状以75g/m2处理最好。

不同光照强度对龙胆农艺性状的影响

在100%自然光照(裸地栽培)、50%自然光照、25%自然光照3种光照条件下,研究不同光照强度对龙胆草地上部和地下部农艺性状的影响。结果表明,不同光照对龙胆草地上部性状株高和叶宽的影响不大,各处理之间差异不显著;叶长以50%自然光照处理最好,与100%和25%自然光照处理之间差异显著;茎粗以100%和50%自然光照处理较好,分别与25%自然光照处理之间差异达到显著水平。根部性状中不同处理对根长、根粗、分根数和根重的影响不同,根长和根重以100%和50%自然光照处理较好,分别与25%自然光照处理之间差异达到显著水平;根粗和须根数各处理之间差异不显著;小区产量以50%自然光照处理最好,与其它两处理100%和50%自然光照处理之间差异显著,综合分析龙胆植株各生长性状和产量性状以50%自然光照处理最好,可促进龙胆植株生长,并能提高其产量。