银杏雄株GinNdly全长基因的分离克隆

以银杏栽培品种大佛手(Ginkgo biloba L.cv.Dafushou)雄株为材料,用四月中旬幼嫩的叶片基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得银杏雄株LEAFY(LFY)同源基因GinNdly全长基因。结果分析表明,该全长基因含1493个核苷酸。与文献报道的银杏雌株GinNdly基因相比,碱基数少了三个,对应地氨基酸少一个,核苷酸同源性为99.7％,氨基酸同源性为99.3％。该基因的克隆为在分子水平上研究银杏开花调控机理奠定了良好的基础。

银杏GinNdly基因的植物表达载体构建

未知功能的植物基因一般需要通过转基因植物来研究和验证。银杏(GinkgobilobaL.)是一种童期很长的古老植物。LEAFY基因是一个花分生组织特征基因,调控着植物开花的时间。用植物双元表达载体质粒pCAMBI-A1301构建了开花基因LEAFY的银杏同源基因GinNdly的反义与正义植物表达载体。因pCAMBIA1301质粒的多克隆位点处没有启动子和终止子,将pBI121的35S启动子和nos终止子引入该质粒。通过PCR检测和酶切验证,证明质粒构建正确,为研究银杏花分生组织特征基因GinNdly奠定了基础。

银杏LEAFY同源基因的时空表达

以银杏雄株、雌株成年树和还未开过花的幼树的根、茎、叶,雌株幼果和不同时期的雄花芽、雌花芽为材料,利用同位素标记,制备Ginlfy 和GinNdly 两个特异探针,进行 Northern分子杂交,研究银杏 LFY 同源基因Ginlfy、GinNdly 在银杏不同器官,花芽不同生长发育时期的时空表达情况。结果显示,无论是幼树,还是成年的雌株、雄株,Ginlfy 基因在各个器官,如根、茎、叶、雌花芽、雄花芽、幼果以及雌花芽、雄花芽的不同发育时期都有表达,属组成型表达,而GinNdly 基因只在叶和不同时期的雄花芽、雌花芽中表达,其他器官都不表达,属特异性表达。银杏双拷贝 LFY 同源基因中的GinNdly 基因可能与开花关系更为密切。