肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Sonichedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性。结果Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P<0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P<0.001。结论胃癌发生过程中的Sonichedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生。

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞生长的抑制作用

目的研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养H1703和A549细胞,加入不同浓度GANT61 72 h后MTS法检测药物对细胞生长的抑制率;Western blot法观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对Gli1和Gli2蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对侵袭能力的影响。结果 MTS显示GANT61作用于H1703和A549的IC50值分别是8.6μmol/L和8.2μmol/L,GANT61对H1703和A549细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性。Western blot显示GANT61可显著下调H1703和A549细胞Gli1和Gli2蛋白的表达。Transwell侵袭实验显示GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力均明显下降。结论GANT61可以明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,这表明Hedgehog通路的Gli1和Gli2在肺癌的发生和发展中起着重要作用,Gli有望成为新的抗肿瘤靶点。

Gli-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨Gli-1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测65例NSCLC组织及其癌旁组织中Gli-1蛋白的表达,并结合患者的临床资料进行分析。结果在NSCLC组织中Gli-1蛋白阳性表达率为76.92%(50/65),高于相应癌旁组织的20.00%(13/65),差异有统计学意义(P=0.000)。Gli-1蛋白阳性表达率与NSCLC患者的组织学分级、临床分期和年龄有显著的相关性(P<0.05)。结论 Gli-1可能在NSCLC的进展中起重要作用,其蛋白表达可以作为一项临床诊断的重要指标。

整联蛋白α5β1通过介导Gli1表达影响基底细胞癌的生长与放疗敏感性

目的探讨整联蛋白α5β1对基底细胞癌(BCC)生长和放疗敏感性的影响及分子机制。方法采用免疫组织化学染色检测皮肤BCC组织及正常皮肤组织中α5β1的表达差异。将A431细胞随机分为对照A组(细胞正常培养)、pLEX-MCS组(采用含pLEX-MCS的慢病毒转染细胞)、pLEX-α5β1组(采用含pLEX-α5β1的慢病毒转染细胞)、pLEX-α5β1+Gli家族锌指蛋白1(Gli1)抑制剂组(采用含pLEX-α5β1的慢病毒转染细胞,并添加100μmol/L Gli1抑制剂GANT61处理细胞)。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测细胞内α5β1与Gli1的表达情况;采用MTT法和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖能力;通过Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力。再将A431细胞随机分为对照B组(细胞正常培养)、4 Gy组(采用4 Gy X射线照射细胞)、pLEX-α5β1+4 Gy组(采用含pLEX-α5β1的慢病毒转染细胞,再用4 Gy X射线照射细胞),采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果α5β1在皮肤BCC组织中的阳性表达率高于正常皮肤组织(P<0.05)。与对照A组和pLEX-MCS组比较,pLEX-α5β1组细胞中α5β1和Gli1 mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞存活率升高,EdU阳性细胞率升高,迁移细胞数与侵袭细胞数均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与pLEX-α5β1组比较,pLEX-α5β1+Gli1抑制剂组细胞中Gli1 mRNA和蛋白表达水平均下降,细胞存活率降低,EdU阳性细胞率降低,迁移细胞数与侵袭细胞数也均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。在处理后培养24、48和72 h时,与对照B组比较,4 Gy组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);pLEX-α5β1+4 Gy组细胞增殖活性较4 Gy组明显升高(P<0.05)。4 Gy组细胞凋亡率较对照B组明显升高(P<0.05);pLEX-α5β1+4 Gy组细胞凋亡率较4 Gy组明显降低(P<0.05)。结论α5β1在BCC组织中高表达,能够促进BCC细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡,并降低细胞的放疗敏感性,该作用可能与调控Gli1表达有关。

Smo蛋白及Gli-1蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Sonic hedgehog（Shh）信号通路中Smo蛋白及Gli-1蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测15例人正常子宫内膜、15例非典型增生子宫内膜及50例子宫内膜癌组织中Smo和Gli-1蛋白的表达情况。结果正常子宫内膜组织中，Smo和Gli-1蛋白不表达或轻度表达，非典型增生子宫内膜组织中Smo和Gli-1蛋白轻度表达，子宫内膜癌组织中Smo和Gli-1蛋白大多呈高表达，不同子宫内膜组织中Smo和Gli-1蛋白表达的差异均有统计学意义（P〈0．05）。相关性分析结果显示Smo和Gli-1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达呈正相关（r=0．624，P〈0．05）。结论Shh信号通路相关蛋白Smo和Gli-1的高表达与子宫内膜癌的发生密切相关，可能与Smo蛋白高表达并上调其下游的转录因子Gli-1蛋白的表达有关。

冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制

目的探讨冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组、戊酸雌二醇组、冬凌草甲素高剂量+环巴胺组,每组12只。X射线检测评估大鼠骨折愈合情况;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;三点弯曲实验检测股骨最大载荷和最大位移;双能X线骨密度扫描仪检测股骨骨密度;HE-阿尔新蓝染色检测骨痂组织病理变化;Western blot检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Shh、Gli1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组骨小梁结构紊乱,骨折线清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组和戊酸雌二醇组骨小梁排列较密集,骨折线模糊不清,血清中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与冬凌草甲素高剂量组比较,冬凌草甲素高剂量+环巴胺组骨小梁结构疏松,骨折线较清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过激活声波刺猬(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路促进骨质疏松大鼠骨折愈合。

Gli-1蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨Gli-1蛋白在胃癌组织中的表达情况及临床意义。方法应用免疫组化SP法检测65例胃癌组织及16例癌旁正常组织中Gli-1蛋白的表达,并结合患者的临床资料进行分析。结果在胃癌组织中Gli-1蛋白阳性表达率为64.5%(40/62),高于相应正常组织的0(0/16),差异有统计学意义(P=0.000)。Gli-1蛋白阳性表达率与胃癌患者的不同组织学分级、临床分期和淋巴结转移状态间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gli-1可能在胃癌的进展中起重要作用,其蛋白表达可以作为一项临床诊断的重要指标。

乳腺癌组织中Hedgehog相关蛋白的表达及其临床意义

目的探讨Hedgehog相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法从334例乳腺癌组织中制备组织块。免疫组织化学法检测六种Hedgehog信号蛋白(Shh、ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3)的表达。结果 Hedgehog信号蛋白表达与一些预后因素显著相关,包括淋巴结转移与Shh(P=0.001)、Gli-3(P<0.001)、Ptch(P=0.025)的相关性、分期与Shh和Ptch表达(P分别为0.007和0.037)的相关性,核分级与Smo(P=0.004)和Gli-3(P=0.026)的相关性,组织学分级与Smo(P=0.007)的相关性。Shh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-2和Gli-3表达在表型之间差异有统计学意义(P分别为<0.0001、<0.0001、0.004、0.039、0.031和0.003)。Gli-2表达与较差的整体生存结果相关(P=0.012)。结论 Hedgehog通路表达激活与乳腺癌的侵袭性相关,可能是乳腺癌的一个有效的治疗靶点。Gli-2可作为乳腺癌的一个预后指标。

乳腺癌组织Smo和Gli1蛋白表达的临床意义

目的探讨Hedgehog信号通路中Smo及Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法分别检测本院2009.02-2013.02期间79例乳腺癌、68例癌旁正常组织及42例乳腺纤维腺瘤组织中Smo和Gli1蛋白的表达,并分析两者的表达水平与乳腺癌临床病理特征的关系。结果 Smo和Gli1蛋白在乳腺癌组织中的阳性率分别为(73.4%、77.2%),与癌旁正常组织(21.4%、19.0%)及乳腺纤维腺瘤组织(20.6%、23.5%)比较,差异有统计学意义(P=0.023,P=0.045)。Smo和Gli1蛋白表达与患者临床病理分期(P=0.041,P=0.034)及是否腋窝淋巴结转移(P=0.003,P=0.006)有关,而与年龄(P=0.109,P=0.107)及病理类型无关(P=0.078,P=0.083);相关分析显示Smo和Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.527,P=0.038)。结论Hedgehog信号通路中Smo与Gli1蛋白的异常高表达可能在乳腺癌的发生和发展中起重要作用。

5-氟尿嘧啶对结肠癌大鼠增殖细胞核抗原表达及端粒酶活性的影响

目的探讨5-氟尿嘧啶(5-FU)对结肠癌大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)表达及端粒酶(hTRT)活性的影响。方法取无特殊病原菌级标准健康雄性裸大鼠36只,10周龄,体重200~230 g。配制结肠癌细胞LoVo单细胞悬液腹腔注射建立结肠癌大鼠模型。将建模成功的30只结肠癌大鼠随机平分为3组-模型组、5-氟尿嘧啶1组、5-氟尿嘧啶2组,模型组予以0.3 mL 0.9%氯化钠溶液灌胃治疗;5-氟尿嘧啶1组、5-氟尿嘧啶2组给予腹腔注射5-氟尿嘧啶,剂量分别为30、60 mg/kg,1次/d,1周3次,共应用4周。测定与记录3组大鼠治疗第2周与第4周的肿瘤体积。观察与记录3组大鼠治疗第4周的结肠癌转移情况,包括局部淋巴结转移、肝转移、肺转移、腹膜转移等。采用免疫组织化学法检测平均单个视野下PCNA阳性细胞、hTRT阳性细胞比率。蛋白质印迹法检测GLI家族锌指蛋白1(Gli1)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的相对表达水平。结果5-氟尿嘧啶1组、5-氟尿嘧啶2组治疗第2周与第4周的肿瘤体积均低于模型组(P<0.05),5-氟尿嘧啶2组低于5-氟尿嘧啶1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。5-氟尿嘧啶1组、5-氟尿嘧啶2组治疗第4周的结肠癌局部淋巴结转移、肝转移、肺转移、腹膜转移率均低于模型组(P<0.05),5-氟尿嘧啶2组低于5-氟尿嘧啶1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。5-氟尿嘧啶1组、5-氟尿嘧啶2组治疗第4周的PCNA、hTRT阳性细胞比率和Gli1、VEGF蛋白相对表达水平均低于模型组(P<0.05),5-氟尿嘧啶2组低于5-氟尿嘧啶1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论5-氟尿嘧啶在结肠癌大鼠的应用具有很好的抑瘤效果,也可降低周围组织转移率,可抑制Gli1、VEGF蛋白的表达,其作用机制与抑制PCNA表达及hTRT活性具有相关性。

环巴胺对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的研究环巴胺(cyclopamine)对人食管癌EC9706细胞生长抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法培养EC9706细胞,加入不同浓度环巴胺,作用不同时间,MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪、AO/EB双荧光染色观察药物作用于细胞后的细胞凋亡情况;Western blot观察不同浓度的药物作用于细胞后对Gli-1蛋白表达的影响。结果 MTT法显示,与空白对照组和DMSO对照组相比,环巴胺对EC9706细胞有明显的生长抑制作用,且环巴胺对EC9706细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;AO/EB双荧光染色显示,细胞体积缩小,皱缩变圆,边缘毛糙,形成不规则突起,细胞核凝集、固缩;环巴胺通过促进细胞凋亡而达到对细胞的生长抑制作用,其调亡率明显高于空白对照组及DMSO组,且呈剂量依赖性。Western blot显示,环巴胺可能是通过影响Gli-1蛋白的表达来调控细胞的生长。其表达率低于空白对照组及DMSO组,呈剂量依赖性。结论环巴胺对人食管癌细胞系EC9706的生长有明显抑制作用,提示食管鳞状细胞癌的发生和发展与Hedgehog信号转导通路的异常激活有关,且Gli-1对肿瘤的发生发展起重要作用,这对食管癌的诊断、治疗以及新药开发提供新的思路。