LPL在U251细胞中的表达及核质穿梭对其增殖、生长的影响

目的:观察脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipas,LPL)在人胶质瘤U251细胞系中的表达及在leptomycin B(LMB)作用下对其增殖、生长的影响。方法:将经体外培养的U251细胞加入染色体区域稳定蛋白1(CRM1)抑制剂LMB后,分别于12 h和24 h观察细胞核与细胞质LPL表达情况,并利用MTT和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。结果:加入5、10 nmol/L的LMB孵育12 h和24 h后,细胞核内LPL的表达明显增加,且呈剂量依赖性变化,其中10 nmol/L的LMB孵育24 h,细胞核内LPL增高最明显;MTT显示,对照组和各实验组A值分别为(0.82±0.08)、(0.71±0.03)、(0.70±0.04)、(0.69±0.07)和(0.68±0.09),各实验组和对照组之间差异有统计学差异(P<0.05);流式细胞术检测显示各实验组与对照组U251细胞的凋亡率分别为2.81±0.33、4.17±0.24、5.25±0.31和6.80±0.42,各实验组与对照组间差异有统计学差异(P<0.05)。结论:LPL在U251细胞中的核质穿梭是依赖CRM1的,且LMB可以显著增加LPL在细胞核内的表达。随着LMB的浓度增加和孵育时间的延长,U251细胞的增殖和凋亡也受到显著的影响,提示核质穿梭可能对肿瘤的生长有一定的影响。

磁共振扩散加权成像在脑胶质瘤边缘带中的应用

目的应用扩散加权成像(DWI)探讨脑胶质瘤边缘带的ADC值变化特点,评价其对不同级别脑胶质瘤边缘带的应用价值。方法收集经手术病理切片确诊的脑胶质瘤患者40例,其中高级别(WHOⅢ-Ⅳ级)胶质瘤25例,低级别胶质瘤(WHOⅠ-Ⅱ级)15例,分别进行常规MR平扫、DWI检查及钆对比剂增强扫描。DWI梯度敏感因子b值分别取0 s/mm21、000 s/mm2,测量肿瘤实质、瘤周水肿区及水肿区周围正常脑白质区的ADC值及对侧相应正常脑白质的ADC值,并进行统计学分析。结果高级别胶质瘤实质区、瘤周水肿区及水肿周围正常脑白质区ADC值间差异无统计学意义;低级别胶质瘤肿瘤实质及水肿区ADC值差异有统计学意义(P<0.05),肿瘤实质区明显高于瘤周水肿区;高级别胶质瘤水肿周围正常脑白质区的ADC值明显高于对侧相应正常脑白质区,二者差异有统计学意义(P<0.05);低级别胶质瘤水肿周围正常脑白质区与对侧相应正常脑白质区的ADC值间差异无统计学意义。结论 MR扩散加权成像技术有助于推测胶质瘤肿瘤细胞的浸润范围,有助于手术方案的合理制定。

全反式维甲酸对U251细胞系增殖和MAPK信号通路的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对U251细胞系增殖和MAPK信号通路的影响。方法使用不同浓度的ATRA溶液对脑胶质瘤细胞U251进行孵育,检测ATRA对U251细胞增殖的影响,并通过qRT-PCR与Western blot方法检测MKPs与MAPK信号通路中各蛋白的变化。结果与对照组相比,ATRA可以有效的抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖,并且具有浓度依赖性。qRT-PCR结果显示,采用不同浓度ATRA孵育48h后,MKPs mRNA的表达发生改变,但是MKP-5变化情况与下调67LR表达时不同,说明2种方法对MAPK信号通路作用的主要区别是对MKP-5的调控。Western blot实验结果表明,ATRA孵育48h后,MAPK信号通路中各蛋白的磷酸化发生变化,说明ATRA通过控制MAPK信号通路中蛋白的磷酸化程度对U251细胞系进行调控。结论维甲酸通过与不同的维甲酸受体相结合,发挥其生理作用,对脑胶质瘤细胞U251进行调控。ATRA可通过降低磷酸化ERK1/2的表达来抑制肿瘤的增殖,且能调控3种蛋白的磷酸化,说明MAPK信号通路在肿瘤增殖过程中发挥重要作用。

GAS5作为miR-223-3p的ceRNA介导U87细胞的焦亡抑制脑胶质细胞的增殖,槲皮素可以增强GAS5的作用

本研究旨在探讨生长抑制特异性基因5(GAS5)作为miR-223-3p对脑胶质瘤生长的抑制作用及其可能机制。通过starbase工具预测GAS5与miR-223-3p结合情况,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定GAS5和miR-223-3p之间的结合关系。体外培养脑胶质细胞U87,分为对照组(control)、槲皮素组(quercetin)、GAS5抑制组(si-GAS5)和槲皮素+si-GAS5组(quercetin+si-GAS5)组,对比分析槲皮素对GAS5/miR-223-3p及焦亡蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD和GSDME)的影响,以及U87细胞增殖能力的影响。结果显示,Starbase工具预测GAS5与miR-223-3p结合,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定揭示了GAS5和miR-223-3p之间的直接结合。槲皮素促进GAS5的表达,抑制miR-223-3p和焦亡相关蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD和GSDME)的表达,抑制U87细胞的增殖和侵袭(P <0.05);下调GAS5, miR-223-3p和焦亡相关蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD和GSDME)的表达增多,促进RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(P<0.05);槲皮素可以逆转GAS5下调引起的miR-223-3p和焦亡相关蛋白(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD和GSDME)的表达增加,抑制U87细胞的增殖和侵袭(P <0.05)。槲皮素抑制脑胶质瘤细胞U87的增殖,可能是通过促进GAS5表达竞争性抑制miR-223-3p,抑制焦亡信号途径实现的。

周期基因1过表达可增强胶质瘤细胞放疗的敏感性

目的评价周期基因1（Per1）基因转染后过表达对胶质瘤细胞（C6）X射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将Per1基因转染至C6细胞，采用Westernblot检测Per1基因在c6细胞中的表达，并给予X射线单次照射后，检测细胞凋亡及细胞增殖。结果X射线照射后，与转染空载体质粒组（20．8％）及空白组（19．5％）比较，转染Per1基因c6细胞（41．3％）凋亡率增加（P〈0．01）；与转染空载体质粒组[（75．90±3．87）个]及空白组[（79．60±1．50）个]比较，其细胞克隆集落形成数明显减少[（51．20±6．08）个，P〈0．01]。结论节律基因Per1过表达使x射线照射的胶质瘤C6细胞凋亡增加，细胞增殖减弱，明显增强了放射对该细胞损伤的敏感性。