HIF-1、MGMT、CD133在人胶质母细胞瘤中表达的相关性研究

目的研究HIF-1、MGMT、CD133在人低级别胶质瘤及胶质母细胞瘤细胞中的表达差异及三者在胶质瘤母细胞瘤中表达的相关性。方法收集自2010年12月至2012年12月手术切除病理证实的胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)33例作为实验组,同期收集低级别胶质瘤25例(WHOI-II级)作为对照组,收集脑深部肿瘤皮层造瘘正常脑组织5例作为阴性对照组。检测不同组别组织中HIF-1、MGMT、CD133的表达,应用SPSS 13.0进行分析。相关统计分析采用Spearman等级相关分析。结果在正常脑组织中HIF-1、MGMT、CD133不表达,在低级别胶质瘤组和胶质母细胞瘤组中其阳性表达率差异具有统计学意义(P<0.05)。通过RT-PCR法分别测定HIF-1、MGMT、CD133在正常脑组织、低级别胶质瘤及胶质母细胞瘤中mRNA的相对定量表达,进行相关性分析,三者均存在正相关(HIF-1与MGMT r=0.91,P<0.05;HIF-1与CD133 r=0.85,P<0.05;MGMT与CD133 r=0.80,P<0.05)。结论 HIF-1、MGMT、CD133阳性表达率随肿瘤级别增高呈显著升高,在胶质母细胞瘤中其表达呈正相关,提示三者在胶质母细胞瘤的发生、发展过程中存在协同作用,为胶质母细胞瘤的治疗提供新的方向。

RNA干扰细胞黏附分子L1表达逆转胶质瘤U251细胞多药耐药

背景与目的:细胞黏附分子L1(cell adhesion molecule L1,L1CAM)是一种跨膜黏附蛋白,在神经系统发育及肿瘤发生中发挥重要作用。本研究运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制L1CAM表达,并探讨其对胶质瘤U251细胞多药耐药的逆转作用及相关分子机制。方法:将针对L1CAM的小干扰RNA(siL1)和阴性对照siRNA(siCon)转染人胶质瘤U251细胞。实验分3组:空白对照组(胶质瘤U251细胞)、阴性对照组(转染siCon的胶质瘤U251细胞)、实验组(转染siL1的胶质瘤U251细胞)。蛋白质印迹法(Western blotting)检测U251细胞中L1CAM、MRP1、DAKT及pERK1/2等蛋白表达。细胞增殖实验检测L1CAM对顺铂(cisplatin)和PI3K/AKT抑制剂LY294002抑制U251细胞增殖的影响。免疫荧光染色法检测抑制L1CAM表达对U251细胞系中AKT磷酸化情况的影响。结果:实验组L1CAM、DAKT、pERK1/2蛋白表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),但实验组多药耐药蛋白MRP1表达量以及Bcl-2α/Bax与阴性对照组和空白对照组相比无明显变化。实验组顺铂和LY294002对U251细胞增殖的抑制率高于阴性对照组和空白对照组,提示抑制L1CAM表达后细胞对顺铂和LY294002的敏感性增加。免疫荧光结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞内AKT磷酸化信号明显降低。结论:RNAi抑制L1CAM表达能增强顺铂和LY294002对U251细胞增殖的抑制作用,并可抑制PI3K/AKT和MAPK信号激活,一定程度上可逆转胶质瘤细胞的多药耐药性。