灵芝提取物对耻垢分枝杆菌GlmU基因表达的影响

目的研究灵芝水提取物、灵芝三萜对耻垢分枝杆菌(M.S-155)增殖曲线、GlmU基因表达、细胞壁结构的影响。方法将6×107 M.S-155接种用含有500μg/mL灵芝水提取物、灵芝三萜的LB培养基培养耻垢分枝杆菌作为实验组,6×107 M.S-155单独培养作为对照,取不同时间A600值绘制耻垢分枝杆菌增殖曲线,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹(Western blotting)检测GlmU蛋白表达情况,透射电子显微镜(TEM)观察细胞壁的形态变化。结果增殖曲线说明灵芝水提取物、灵芝三萜对耻垢分枝杆菌生长明显抑制,对应A600值组间有差异(P<0.05),而同等剂量的灵芝三萜抑菌能力更强;SDS-PAGE及Western blotting检测到相对分子质量51.5×103蛋白处蛋白实验组明显变暗(P<0.05);用TEM观察其对耻垢分枝杆菌细胞壁结构的影响,实验组M.S-155经灵芝三萜处理后的耻垢分枝杆菌的细胞壁明显膨胀、变形。结论灵芝水提取物、灵芝三萜对M.S-155有明显的抑制作用,而其作用位点很可能就是抑制了GlmU基因的体外表达,灵芝提取物不但能够抑制M.S-155增殖而且能够影响细胞壁功能,为进一步研究灵芝应用价值奠定了基础。

glmU基因单功能敲除对大肠杆菌生产氨基葡萄糖的影响

大肠杆菌中的glmU是葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶/葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶双功能基因。同源单交换方法敲除大肠杆菌中葡糖胺-1-磷酸乙酰转移酶单结构域基因glmU,即利用重叠PCR将葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶结构域内603bp序列与抗性基因ampR连接,经过末端单酶切(HindⅢ)后电转化至大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞中,经同源臂单交换,将抗性基因ampR整合至glmU基因内部,实现该结构域功能失活的同时,保留葡糖胺-1-磷酸尿苷酰转移酶功能域活性。通过发酵实验分析glmU单结构域缺失在大肠杆菌中对氨基葡萄糖生产的影响。结果表明,发酵20h后重组菌的氨基葡萄糖产量为1 049.6mg/L,为原始菌E.coliBL21氨基葡萄糖产量103.34mg/L的10.2倍。表明glmU是影响大肠杆菌产生氨基葡萄糖的关键基因,敲除glmU基因可增加氨基葡萄糖积累。