人脂联素球型结构域原核表达重组质粒的构建及体外表达

目的通过分子克隆表达人脂联素基因球型结构域(gAd),为进一步研究提供实验基础。方法应用RT-PCR方法从人大网膜脂肪组织总RNA中扩增出gAd cDNA,克隆入载体pMD18-T、pET32a(+)中,形成重组质粒gAd-pET32a(+)。筛选出阳性克隆,通过限制性内切酶酶切、PCR和测序进行鉴定,并在体外进行小量表达。结果从脂肪组织总RNA中扩增得到412 bp片段gAd基因,其cDNA序列与GenBank人gAd基因序列相同,并在体外表达得到相对分子质量为34 000的重组蛋白。结论成功构建了gAd基因原核表达质粒并实现体外的小量表达。

球型脂联素对高糖环境NIT-1胰岛β细胞功能的影响

用β细胞株NIT—1来研究球型脂联素对高糖损伤β细胞分泌功能及相关基因表达的影响。结果显示球型脂联素可恢复部分β细胞功能相关基因的表达，抑制高糖诱导NAD（P）H氧化酶组分p47phox表达增加，但未能改善高糖诱导的胰岛素mRNA水平下降及胰岛素分泌缺陷。