电针神庭、百会穴通过ARC/GluR2/NMDAR2B调节海马突触可塑性改善MCAO/R大鼠学习记忆的机制研究

目的观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉闭塞再灌注(MCAO/R)大鼠学习记忆功能改善的作用机制。方法线栓法制备MCAO/R大鼠模型。24只雄性SD大鼠随机分为模型组(n=6)、电针组(n=6)、非穴组(n=6)和假手术组(n=6)。电针组大鼠选取百会、神庭穴,非穴组选取双侧胁下非经非穴,共电针7 d。ZeaLonga评分法对各组大鼠进行神经功能缺损评分,新物体识别评估大鼠的学习记忆能力,小动物磁共振T2WI系列扫描梗死面积,HE染色观察缺血侧海马病理形态,波谱(1HMRS)比较各组海马区N-乙酰天冬氨酸(NAA)、肌酸(Cr)和谷氨酸(Glu)代谢物含量,Western blotting检测缺血侧海马ARC/GluR2/NMDAR2B的表达情况。结果干预7 d后,与模型组及非穴组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分显著降低(P<0.05),电针组大鼠新物体识别指数较模型及非穴组升高(P<0.05)。磁共振T2WI显示电针组的梗死面积较模型组、非穴组明显减小(P<0.05),波谱显示电针组较模型和非穴组海马区NAA/Cr比值明显增高(P<0.001),GLU/Cr降低(P<0.01)。Western blotting结果表明电针组大鼠缺血侧海马中NMDAR2B含量明显低于模型组和非穴组(P<0.01),ARC及GluR2含量高于模型及非穴组(P<0.05)。结论电针神庭、百会穴能够改善MCAO/R大鼠的神经缺损情况,提高学习记忆能力,降低缺血侧梗死面积,改善病理形态,提高神经元兴奋性,降低膜后谷氨酸累积,其机制可能与促进MCAO/R大鼠海马区ARC、GluR2,抑制NMDAR2B的表达,进而改善卒中后海马突触可塑性损伤有关。

电针内关、公孙穴对功能性消化不良大鼠海马GluR1、GluR2及内脏高敏性的影响

目的观察电针内关、公孙穴对FD大鼠海马GluR1、GluR2及内脏敏感性的影响,探讨其可能的作用机制及腧穴的特异性,为临床运用提供一定的实验依据。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、双穴组、非经非穴组和西药组5组,每组各10只;空白组正常饲养,模型组采用复合病因法造模,双穴组造模后行电针内关、公孙穴治疗,非经非穴组造模后行电针非经非穴治疗,西药组造模后灌服黛力新+莫沙比利治疗,各组每日治疗1次,共21天;治疗后采用结直肠扩张观察大鼠的内脏敏感性,HE染色观察海马神经元结构,Western Blot及IHC观察海马内GluR1、GluR2变化。结果与空白组相比,模型组大鼠内脏痛阈值明显降低,海马GluR1含量升高、GluR2蛋白含量下降(P<0.01);与模型组相比,双穴组和西药组内脏痛阈值明显增高,海马GluR1蛋白含量下调、GluR2蛋白含量增加(P<0.01,P<0.05),非经非穴组无差异(P>0.05);与非经非穴组对比,双穴组大鼠内脏痛阈值显著升高,显著降低海马GluR1、上调GluR2蛋白含量(P<0.01);与西药组对比,两组无显著性差异(P>0.05)。HE染色结果表明,空白组海马神经元细胞结构清晰,形态正常;与空白组相比,模型组海马可见个别神经元细胞变性,固缩,细胞间隙变大,胞体增大,空泡样性状明显;与模型组相比,双穴组及西药组海马神经元细胞结构较为清晰,趋于完整,细胞间隙变小,未见固化萎缩的神经元及空泡样性状改变;与非经非穴组相比,双穴组海马神经元细胞结构更为清晰,细胞间隙较小。结论电针内关、公孙穴能有效改善FD大鼠内脏敏感性,疗效较非经非穴更优,可能与存在腧穴特异性相关。其可下调大鼠海马内GluR1、上调GluR2蛋白含量,改善海马神经元细胞结构,这可能是其治疗FD的作用机制之一。

片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1和GluR2表达的影响

目的研究片仔癀对局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白表达的影响。方法健康成年♂SD大鼠40只,随机分为假手术组、模型对照组、片仔癀给药组,用线栓法建立局灶性脑缺血/再灌注大鼠模型(MCAO)。Zea-Longa标准评分法评价大鼠神经功能损伤;TTC染色法评价脑梗死体积变化;qPCR法和Western blot法分别检测大鼠缺血侧脑组织皮质中NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达。结果与MCAO组比较,片仔癀能明显改善大鼠的神经功能损伤,降低大鼠脑梗死体积,促进NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的表达。结论片仔癀可能通过抑制局灶性脑缺血/再灌注大鼠皮质NMDAR1、GluR2 mRNA及蛋白的下调而发挥脑保护作用。

三七总皂甙对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体GluR2表达的作用

目的:研究三七总皂甙对脑出血大鼠前脑兴奋性氨基酸受体AMPA受体亚基GluR2表达的作用。方法:用免疫组织化学法观察胶原酶诱导的脑出血大鼠前脑内GluR2在给药组和对照组的表达变化。结果:脑出血后大鼠前脑病灶内部GluR2表达呈阴性,海马很少表达,但病灶周围和同侧皮质神经元的表达增强。给药组在皮层、病灶周围阳性细胞增多,反应强度增强。结论:三七总皂甙对GluR2阳性表达有增强作用,从而发挥对受损神经元的保护作用。

氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马GluR2及nNOS表达的影响

目的：观察氯喹对戊四氮慢性致痫大鼠海马α-氨基羟甲基异恶唑丙酸（amino-3-hydroxy-5-methylisox-azole-4-propionic acid,AMPA）受体（GluR2）及神经型一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,nNOS）表达的影响,探讨氯喹在癫痫发生发展中的作用。方法：30只健康雄性SD大鼠,随机分为3组：对照组（10只）、戊四氮致痫组（10只）、氯喹干预组（10只）,观察大鼠行为表现和脑电图的改变。应用Western Blot检测大鼠海马GluR2含量的改变,免疫组化检测nNOS的变化。结果：对照组无癫痫发作,戊四氮致痫组癫痫发作严重（III~Ⅴ级）,氯喹干预组痫样发作与戊四氮致痫组相比较轻（Ⅰ~III级,P〈0.05）;戊四氮致痫组脑电记录呈频发高幅的痫样波,氯喹干预组痫样波幅低且缓;与对照组相比,癫痫组GluR2表达减弱（P〈0.05）,氯喹干预组与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）;nNOS在戊四氮致痫组表达强,以海马为著,与对照组比较差异有显著性（P〈0.05）,氯喹干预组与对照组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：氯喹可以通过调节GluR2的含量和抑制nNOS的表达,表明氯喹可能是预防和治疗癫痫的理想药物。

miR-124抑制GluR2参与甲基苯丙胺PC12细胞成瘾

目的探讨mi R-124表达在甲基苯丙胺成瘾PC12细胞模型中的变化及其可能参与的调控机制。方法培养PC12细胞,随机分为6组:(1)正常对照组;(2)甲基苯丙胺组;(3)agomir Negative Control组;(4)mi R-124 agomir组;(5)agomir Negative Control+甲基苯丙胺组;(6)mi R-124 agomir+甲基苯丙胺组。处理结束后,提取细胞总RNA和蛋白,Real-time PCR检测miR-124表达,Western blot检测谷氨酸受体2亚单位(ionotropic glutamate receptor AMPA alpha 2,GluR 2)蛋白表达。结果与正常对照组相比,甲基苯丙胺处理组PC12细胞中miR-124表达明显降低,GluR 2蛋白表达明显升高;与agomir Negative Control+甲基苯丙胺组相比,miR-124agomir+甲基苯丙胺组PC12细胞中miR-124表达明显升高,GluR 2蛋白表达明显降低。结论 miR-124可能通过抑制GluR 2参与了甲基苯丙胺诱导的PC12细胞成瘾。

GluR2Q在下丘脑乳头体上核内过度表达对于大鼠颞叶癫痫脑电的影响

目的 探讨下丘脑乳头体内兴奋性刺激对于颞叶癫痫脑电变化的影响。方法 利用 HVJ-脂质体转染法在下丘脑乳头体内转染兴奋性氨基酸受体亚基 Glu R2 Q,研究其对于海人酸 (kainic acid,KA)诱发的癫痫模型脑电变化的影响。结果 Glu R2 Q基因转染组大鼠癫痫连续性放电的开始时间明显早于 KA对照组 ,且持续时间较 KA对照组明显延长。结论 下丘脑内 Glu R2 Q基因转染能提高其兴奋性 。

海仁酸致痫大鼠海马组织AMPA受体GluR2表达的变化

目的 为了研究AMPA受体在癫痫发生中的作用。方法 本研究用免疫组织化学方法观察了海仁酸致痫大鼠海马组织AMPA GluR2受体的表达变化。结果 在侧脑室注射海仁酸后 1h ,4h ,12h ,2 4h及 7d ,大鼠海马CA3区及齿状回GluR2的表达明显减弱 ,显微图像分析 :与对照组相比 ,KA 4h ,KA 12h ,KA 2 4h ,KA 7d组大鼠海马组织GluR2阳性神经元平均光密度值降低 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论 在癫痫发作过程中AMPA受体 GluR2亚单位表达改变可能与癫痫发作导致的神经元损伤有密切关系。

缺血缺氧模型小鼠少突胶质前体细胞GluR2磷酸化水平的变化

目的:研究缺血缺氧性脑损伤(HIBI)模型小鼠少突胶质前体细胞(OPCs)中磷酸化谷氨酸受体2[p-GluR2(S880)]表达变化。方法:利用右侧颈总动脉结扎并缺氧90 min方法建立C57BL/6新生小鼠HIBI模型,采用高架十字迷宫和旷场实验评估小鼠的焦虑样行为,通过免疫荧光方法检测HIBI模型小鼠脑组织中p-GluR2(S880)、少突胶质细胞标记物4(O4)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化,用Western Blot检测p-GluR2(S880)和MBP的表达水平。结果:与假手术组相比,HIBI术后90 d小鼠有显著的焦虑样行为(P<0.05);MBP蛋白表达在HIBI术后14及28 d组明显减少;p-GluR2(S880)蛋白表达在HIBI术后各个时间点表达上调(P<0.05),HIBI组小鼠脑组织中O4与p-GluR2(S880)共标的阳性细胞数目显著升高(P<0.05)。结论:OPCs中p-GluR2(S880)表达上调可能导致HIBI模型小鼠成髓鞘障碍。

突触后膜GluR2含量变化及脑继发性损害的实验研究

目的 探讨缺血损伤后神经元突触后膜谷氨酸α 氨基羟甲基异恶唑丙酸 (AMPA)受体第二亚单位 (GluR2 )的含量、受体离子通透功能变化及其在延迟性细胞死亡中的作用。方法 采用PI染色和双重免疫荧光技术定量观察神经元死亡和突触GluR2含量变化 ,以膜片钳技术检测自发兴奋性突触后电流(mEPSCs)的变化。结果 缺氧后神经元死亡数量明显增加 ;膜表面GluR2总量、含GluR2的突触数目以及突触部位GluR2含量都明显降低 (P <0 .0 5 ) ,膜表面GluR2含量下降以突触部位为主 ;缺乏GluR2的受体通道功能明显增强。结论 缺氧损伤可致突触后膜表面GluR2含量降低 ,形成缺乏GluR2的新的AMPA受体通道 ,介导了Ca2 + 的快速内流 。

GluR2缺失的AMPARs在突触可塑性机制中的研究进展

α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异唑-丙酸(AMPARs)是调节快速突触传递的兴奋性谷氨酸受体,是由GluR1、GluR2、GluR3和GluR4四种亚基选择性组装构成同源或异源四聚物。GluR2亚基对AMPARs的特性有重要影响,含GluR2亚基的AMPARs对Ca2+不通透,中枢神经系统中大多数AMPARs为此类;不含GluR2亚基的AMPARs对Ca2+有较好的通透性,这类AMPARs在限定的神经元或特定的生理或病理条件下表达。近年来的研究发现,GluR2缺失的AMPARs对突触功能、突触可塑性、神经局部环路传导等有特殊的作用。本文对GluR2缺失的AMPARs及其对突触功能和可塑性的作用作一综述。

缺血损伤后突触后膜GluR2含量变化及机制

目的 探讨缺血损伤后突触后膜谷氨酸受体 2 (glutamatereceptor 2 ,GluR2 )含量变化、机制及其在神经元延迟性死亡中的作用。方法 采用PI染色、比色分析和双重免疫荧光技术定量观察神经元死亡、膜表面及突触GluR2含量变化及途径。结果 缺血损伤神经元死亡数量明显增加 ;膜表面GluR2总量、含GluR2的突触数目以及突触部位GluR2含量都明显降低 (P <0 0 5 ) ,而胞内GluR2含量则显著增加 ,采用高渗糖预处理阻断内吞过程可显著抑制膜表面GluR2的降低过程。结论 缺氧损伤后膜GluR2内吞过程增强 ,导致了膜表面GluR2含量降低 ,缺乏GluR2的AMPA受体增加 ,进而介导了Ca2 + 的快速内流 ,引起神经元延迟性死亡。

右旋葡萄糖对新生大鼠海马神经元AMPA受体亚基GluR2/3表达的影响

目的:观察右旋葡萄糖对新生大鼠海马神经元细胞谷氨酸离子型受体GluR2/3 mRNA表达的影响。方法:建立原代新生大鼠海马神经元细胞培养方法,培养至第9 d时,给予不同浓度右旋葡萄糖刺激。通过免疫荧光检测海马神经元细胞GluR2表达,通过RT-PCR检测GluR2、GluR3、GluR4 mRNA表达变化。结果:新生大鼠海马神经元细胞培养至第9 d时,可见GluR2呈阳性表达,右旋葡萄糖刺激后海马神经元细胞GluR2mRNA、GluR4mRNA表达明显下调(P<0.05);GluR3 mRNA表达明显上调(P<0.01)。结论:右旋葡萄糖刺激引起海马神经元细胞GluR受体下调,表现对海马神经元的损伤性影响,可能与糖尿病脑病的发生机理有关。

NR1和GluR2在成年大鼠海马结构的共表达

目的探讨NMDA受体NR1亚单位(NMDA/NR1)和AMPA受体GluR2亚单位(AMPA/GluR2)在正常成年大鼠海马结构的分布特征。方法在多聚甲醛固定的海马切片上,采用免疫荧光组织化学方法染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察NR1和GluR2在正常成年大鼠海马结构中的表达与分布。结果NR1和GluR2在正常成年大鼠海马结构广泛表达,并且两者免疫荧光染色阳性表达的分布基本一致,其中在CA1和CA3区的锥体细胞层以及齿状回门区的中间神经元表达最强;在CA1和CA3区的分子层以及齿状回的颗粒细胞层中也有明显的NR1和GluR2免疫荧光染色颗粒的分布;但在CA3区的分子层和齿状回的多形层NR1的表达阳性强于GluR2。阳性反应主要位于神经细胞的胞膜和突起。结论NMDA/NR1和AMPA/GluR2在海马结构中的分布特征基本一致,提示它们可能共同参与完成海马的某些重要功能。

大鼠吗啡条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏隔核中GluR1、GluR2阳性神经元的变化

目的:研究吗啡依赖期间大鼠前额叶皮质和伏隔核中GluR1、GluR2阳性神经元的变化。方法:采用免疫组织化学实验方法观察吗啡条件性位置偏爱模型大鼠前额叶皮质和伏隔核中GluR1和GluR2阳性神经元的形态及数目变化。结果:与空白对照组比较,吗啡模型组GluR1和GluR2的阳性神经元数均明显升高(P<0.01)。结论:大鼠条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏隔核中GluR1和GluR2的阳性神经元增多,提示AMPA受体GluR1和GluR2两个亚基参与了吗啡精神依赖的形成。

全脑缺血再灌模型大鼠皮层神经元GluR2表达的变化

目的:采用免疫组化技术,研究全脑缺血后再灌不同时点大鼠皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达的变化,探讨GluR2在缺血性神经元损伤中的作用。方法:将36只SD大鼠随机分为6组,即正常组、缺血再灌注后2h、12h、24h、48h、72h 5个时间点组。参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法制备全脑缺血大鼠模型,缺血再灌后的大鼠分别在存活2h、12h、24h、48h及72h后采用免疫组化法测定皮层神经元GluR2的表达量。结果:模型再灌5个时点之间SD大鼠皮层神经元GluR2表达量没有统计学差异(P>0.05),但与正常组相比,各组的的表达量明显降低(P<0.05)。结论:脑缺血再灌后皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达减少,介导胞外Ca2+内流,引起神经细胞死亡。

拉莫三嗪对大鼠脑出血后血肿周围兴奋性氨基酸受体亚基NR1和GluR2表达变化的影响

目的研究拉莫三嗪对大鼠脑出血血肿周围兴奋性氨基酸受体亚基NR1和GluR2的影响。方法用免疫组化法观察大鼠脑出血血肿周围NR1和GluR2在给药组和对照组的表达变化。结果NR1和GluR2在病灶周围均有不同程度的高表达,给药组NR1在病灶周围阳性细胞明显减少,反应强度减弱,而GluR2则表达增强。结论拉莫三嗪明显降低NR1在病灶周围的阳性表达,而增强GluR2的表达从而发挥对受损神经元的保护作用。

AMPA受体亚单位GluR2在大鼠局灶性脑缺血不同时期表达及其机制研究

目的通过研究大鼠局灶性脑缺血不同时期缺血中心区与半暗带α-氨基羟甲基异恶唑丙酸(AMPA)受体亚单位GluR2蛋白表达,并同时观察凋亡指数,以进一步阐述GluR2在缺血性脑卒中的作用机制。方法采用免疫组化和Tunnel染色分别检测大脑中动脉梗塞(MCAO)2h再灌后1h、1d、3d、7d、15d、30d大鼠GluR2蛋白和凋亡细胞的表达。结果再灌1h,缺血侧中心区(ischemiacoreIC)与缺血半暗带区(ischemiapenumbra,IP)GluR2蛋白表达与对照组无差异。在缺血中心区,再灌后1dGluR2蛋白表达开始减少(F=1.104,P<0.05),3d表达达到最低(F=3.252,P<0.01),7、15d表达回升(F=1.878,P<0.01;F=1.185,P<0.05),30d基本上与对照组相同。在缺血半暗带,GluR2蛋白表达在再灌后1、3、7d与健侧无明显差异,但在15d可见表达明显增强(F=27.166,P<0.01),在30d表达呈更强(F=28.515,P<0.01),且阳性细胞数目也稍有所增多。在缺血中心区,再灌1h即检测到表达非常弱但数目较多的凋亡细胞,再灌1d后更为明显,3d和7d凋亡细胞在数量上和表达程度上达到高峰,15d凋亡细胞减少,1个月后只见中心区少许凋亡细胞。在半暗带区,MCAO再灌后3d,7d和15d仅见少许TUNNEL阳性细胞。结论再灌后细胞凋亡出现时间先于GluR2蛋白表达下调时间提示GluR2不是早期凋亡的启动因子。再灌后1￣30d,GluR2蛋白表达变化与凋亡阳性细胞几乎平行,提示GluR2虽不启动早期凋亡,但可能导致神经元进一步凋亡,或参与迟发性神经元死亡。缺血侧半暗带区GluR2蛋白在再灌后15￣30d表达明显增强,且数目也稍有增多,提示GluR2与突触的可塑性有关。

AMPA受体及其GluR2亚基在大鼠初级视皮层可塑性中的作用研究

目的观察闪光刺激对大鼠初级视皮层诱发电位的影响,探讨AMPA受体及其GluR2亚基在大鼠初级视皮层可塑性中的作用。方法 24只成年SD大鼠随机分为3组:A组(空白对照组:不接受闪光刺激)、B组(光刺激组:接受紫光闪光刺激)、C组(阻断剂组:接受紫光闪光刺激并注射AMPA受体阻断剂)。各组大鼠麻醉、固定后分别在初级视皮层(V1区)植入记录电极,在额叶植入参考电极,在V1区(与记录电极同侧)植入微细玻璃微电极做微量注射,B组和C组手术恢复后连续5 d每天于固定时间行紫光闪光刺激1 h,之后行微量注射生理盐水和AMPA受体阻断剂后,在相同闪光刺激条件下,给予一串高频刺激,记录高频刺激前后初级视皮层(V1区)的视觉诱发电位,分析两组视觉诱发电位的幅值和潜伏期的变化;western blot检测各组大鼠强直性闪光刺激前后初级视皮层GluR2蛋白含量的变化。结果 B组和C组在接受强直性闪光刺激后诱发电位幅值较之前明显升高,且潜伏期变短(均P<0.01),在强直性闪光刺激后,C组幅值显著高于B组、潜伏期显著短于B组(均P<0.01);在强直性闪光刺激之前,B组和C组的幅值和潜伏期均差异无显著性。western blot结果显示,B组大鼠GluR2含量在强直性闪光刺激前显著高于强直性闪光刺激后,但显著低于A组(均P<0.05),C组GluR2含量与B组在强直性闪光刺激前后均差异无显著性。结论强直性闪光刺激能使大鼠初级视皮层视觉诱发电位呈现LTP样反应,AMPA及其GluR2亚基参与了闪光刺激致大鼠初级视皮层的可塑性变化。

AMPA受体GluR2亚基研究进展

GluR2亚基由于其mRNA Q/R位点编辑,使得它在AMPA受体中的相对含量决定了AMPA受体的钙离子不通透性。在多种神经性损伤或退行性疾病中,神经元GluR2表达下调,Ca2+内流增加。但是目前关于GluR2下调机制,GluR2在神经元死亡或耐受中的作用及机制尚未完全阐明。本文就AMPA受体GluR2亚基调控及其与神经元损伤关系的研究进展作一综述。