通络救脑注射液及其组分对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞GluR3表达及其功能的影响

目的:观察通络救脑注射液及其有效组分对拟缺血损伤脑微血管内皮细胞谷氨酸受体3(glutamate receptor 3,GluR3)表达及其功能的影响。方法:采用大鼠原代培养脑微血管内皮细胞,氧糖剥夺法制备拟缺血模型,分别用通络救脑注射液及其2组分栀子苷、三七总皂苷对细胞进行干预,采用PCR和免疫蛋白印迹法检测各组细胞中GluR3 mRNA及蛋白表达水平,并用免疫蛋白印迹法检测GluR3调节的下游分子基质金属蛋白酶诱导因子CD147、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达情况。结果:通络救脑注射液及其组分能够从基因到蛋白水平显著下调GluR3的表达,对CD147、MMP-9也有显著下调作用,且通络救脑注射液疗效优于2组分。结论:通络救脑注射液及其组分可调节拟缺血损伤脑微血管内皮细胞GluR3的表达及其功能,这可能是其在脑缺血性损伤中保护血脑屏障、减轻炎症反应的机制之一。通络救脑注射液效果优于2组分,显示了复方配伍发挥整合调节的疗效优势。

癫痫患者脑脊液中GluR3B抗体对大鼠少突胶质前体细胞活性的影响

目的:检测癫痫患者脑脊液中α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑受体(AMPAR) 3B亚单位抗体(GluR3B Ab)的水平和含GluR3B Ab的癫痫患者脑脊液(GluR3B Ab-CSF)对大鼠少突胶质前体细胞(OPCs)活性的影响。方法:抽取癫痫患者脑脊液,ELISA检测脑脊液中GluR3B Ab浓度;对新生1~3 d SD大鼠大脑皮质细胞行原代培养,培养7 d左右采用震荡分离法获得OPCs。用不同浓度的GluR3B Ab-CSF孵育OPCs,CCK-8法检测OPCs活性,TUNEL染色检测OPCs凋亡。结果:与对照组相比,癫痫患者脑脊液中GluR3B Ab水平显著增加(P <0. 05);在新生大鼠原代培养的OPCs中,较高浓度GluR3B Ab-CSF处理组OPCs的活性较对照组显著下降(P <0. 01),凋亡率增加(P <0. 01)。结论:含有较高浓度GluR3B Ab的癫痫患者脑脊液可诱导原代OPCs凋亡。

钩藤碱对甲基苯丙胺依赖斑马鱼大脑神经递质含量以及TH、NR2B和GluR2/3表达的影响

目的探讨钩藤碱对甲基苯丙胺诱导的斑马鱼条件性位置偏爱（CPP）的影响.方法天然偏爱测定（d1～3）合格的斑马鱼腹腔注射甲基苯丙胺（40mg·kg^-1,d4、6、8）或等体积鱼用生理盐水（d5、7）后,立即进行CPP训练;治疗组在每次给予甲基苯丙胺12h后,给予钩藤碱（50、100mg·kg^-1）和MK801治疗;于d9测试斑马鱼的CPP效应,测量斑马鱼脑中多巴胺、5-羟色胺、谷氨酸和γ-氨基丁酸含量以及酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）、N甲基D天冬氨酸受体亚型2B（N-methyl-D-aspartate receptor2B,NR2B）和α氨基羟甲基异恶唑丙酸受体亚型（glutamate receptor2/3,GluR2/3）蛋白表达.结果钩藤碱（100mg·kg^-1）治疗显著减少甲基苯丙胺依赖斑马鱼在伴药箱中的活动时间和运动距离（P 〈0.01）,下调大脑多巴胺、5-羟色胺、谷氨酸含量以及TH、NR2B和GluR2/3蛋白表达（P〈0.01）.结论钩藤碱抗斑马鱼甲基苯丙胺依赖的形成与抑制神经递质释放以及下调TH、NR2B和GluR2/3蛋白表达密切相关.

GluR2/3受体在不同年龄大鼠背侧蜗神经核的表达

目的研究α-氨基羟甲基恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid,AMPA)受体亚型GluR2/3(Glutamate recptor 2/3)在不同周龄大鼠蜗神经核的表达。方法用免疫组化方法检测GluR2/3亚型在不同年龄(1～16周)SD大鼠(Sprague-Dawlay rat)背侧蜗神经核中的表达,免疫电镜技术检测其在细胞内的定位。结果1周龄大鼠蜗神经核中无明显表达,2周时开始出现该受体的表达,3周时亦有极少量表达,4周时表达有明显增加,以后依次递增,至9周时表达最强,以后逐渐下降,并稳定于16周。各周龄受体均表达于包膜及胞浆中。电镜下(6周、10周)时见胶体金主要沉积于线粒体,部分可见于粗面内质网及胞浆。结论出生后GluR2/3在蜗神经核的含量随年龄变化而变化,这种改变可能与听觉发育及可塑性相关。

GluR2/3在不同周龄大鼠耳蜗核中的表达

目的检测α-氨基羟甲基恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionicacid,AMPA)受体亚型GluR2/3在不同周龄大鼠耳蜗核的表达及其与听性脑干反应(auditorybrainstemresponse,ABR)的关系,为听觉中枢发育的分子机制提供可能的实验依据。方法分别测定1、4、9、15周龄SD大鼠ABR反应阈;FITC标记免疫组织化学方法检测GluR2/3亚型在不同周龄SD大鼠耳蜗核中的表达。结果1周龄SD大鼠未引出明显的ABR波形,4周起能引出稳定的ABR波形,且4、9、15周龄SD大鼠ABR反应阈无显著性差异。GluR2/3在不同周龄大鼠蜗核神经元中均有表达。1周龄SD大鼠背侧蜗核(dorsalcochlearnucleus,DCN)中神经元表达较少,位于胞膜,较弱。4周龄时表达强,主要位于胞膜;9周龄时较弱,位于胞膜及胞浆;15周龄时可见于胞膜及核周胞质,但胞质较强,胞膜含量低。4周龄与1、9、15周龄胞膜相比,有显著性差异;1周龄与9、15周龄胞膜比较无显著性差异。结论出生后GluR2/3在耳蜗核的含量及分布部位均随年龄变化而变化,这种改变可能与耳蜗核的发育相关。