外周血单个核的细胞中糖皮质激素受体亚型与突发性聋预后的相关性

目的探讨外周血单个核的细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)亚型与突发性聋(sudden sensorineural hearing loss,SSNHL)预后的相关性以及糖皮质激素(glucocorticoid,GC)治疗对GR亚型表达的影响。方法选择27例应用GC治疗的SSNHL患者,根据听力预后分为有效组(PTA改善≥15dB)15例和无效组(PTA改善<15dB)12例,6例听力正常的鼻中隔偏曲志愿者为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,QRT-PCR)检测各组对象外周血单个核细胞中的GRαmRNA、GRβmRNA和SRp30cmRNA的表达水平,并随访3个月以上。分析GRαmRNA、GRβmR-NA、SRp30cmRNA表达量和GRαmRNA/GRβmRNA比值在有效组、无效组和对照组间的差异以及SSNHL患者GC治疗前后的差异。结果 27例SSNHL患者中采用鼓室灌注GC治疗20例,静脉滴注GC治疗7例,治疗后有效15例,无效12例。有效组、无效组和对照组间PBMCs中GRαmRNA、GRβmRNA、SRp30cmRNA表达量和GRαmRNA/GRβmRNA比值比较差异无统计学意义。鼓室灌注GC治疗前后均留取血标本15例,其中有效8例,无效7例,有效组GC灌注后PBMCs中GRαmRNA和GRβmRNA表达量均较灌注前下降(ZGRα=-2.380,PGRα=0.017;ZGRβ=-2.521,PGRβ=0.012),而无效组GC灌注前后两者的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论本组SSNHL患者治疗前PBMCs中GRαmRNA、GRβmRNA、SRp30cmRNA表达量和GRαmRNA/GRβmRNA比值均与SSNHL的听力预后无相关性,尚不能用来预测SSNHL患者对GC的敏感性和听力预后;但鼓室灌注GC治疗后GRαmRNA和GRβmRNA表达量下调可能提示有较好的听力预后。

原发性肾病综合征患者激素敏感性与糖皮质激素受体亚型的关系研究

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患者对糖皮质激素(以下简称激素)敏感性与其外周血单个核细胞(PBMC)内激素受体(GR)亚型表达的关系。方法应用流式细胞术(FCM)检测正常对照组(10例)和PNS组(28例,其中激素敏感组10例、激素依赖组10例、激素抵抗组8例)外周血PBMC内α与β亚型表达水平的变化。结果与正常对照组相比,PNS患者3组中GRα的表达水平均降低,差异有显著性(P<0.05);GRβ在激素抵抗组中表达明显增高,差异有显著性(P<0.01),而在激素敏感组、激素依赖组中表达无明显差异(P>0.05)。结论PNS患者糖皮质激素受体GRα、GRβ表达水平的变化,导致GRα与GRβ比例失调,使组织细胞对激素的敏感性降低,因此,导致PNS患者对糖皮质激素治疗反应不同,PNS出现激素抵抗可能与GRβ表达水平增高有关。

原发性肾病综合征患者足细胞中糖皮质激素受体α和β的表达与激素敏感性的相关分析

目的探讨原发性肾病综合征患者足细胞中糖皮质激素受体(GR)α和β的表达与激素敏感性的相关性。方法 62例原发性肾病综合征患者进行常规肾活检,应用电镜观察足细胞形态,免疫组化检测足细胞计数的标志物WT-1和足细胞中糖皮质激素受体(GR)α及β的表达,同时选取因肾癌行肾切除的10例患者的肾脏病理切片作为对照组。足量激素治疗4周后,根据蛋白尿减少的程度分为激素敏感组(n=30)和激素不敏感组(n=32),分析糖皮质激素受体(GR)α及β的表达与激素敏感性的相关性。结果激素不敏感组单个肾小球足细胞计数较激素敏感组显著减少(P<0.05),且电镜下足细胞损伤较重。激素不敏感组的GRα阳性的足细胞计数和足细胞上GRα/β比例较激素敏感组显著降低,GRβ阳性的足细胞计数较激素敏感组显著增加(P<0.05)。GRα、GRβ阳性的足细胞计数及GRα/β比例的ROC曲线下面积分别为0.549、0.612和0.741,在GRα/βROC曲线上选择兼顾敏感性和特异性的最佳cutoff值为4.8。结论原发性肾病综合征患者足细胞损伤程度有助于预测激素的敏感性,足细胞中GRα/β比例低于4.8提示激素不敏感。

特发性血小板减少性紫癜患者激素敏感性与糖皮质激素受体亚型的关系研究

目的探究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者对糖皮质激素敏感性与其外周血单个核细胞内激素受体亚型表达的关系。方法采用实时定量RT-PCR和免疫组化技术检测不同激素敏感性ITP患者(包括糖皮质激素抵抗和敏感病人)外周血单个核细胞内α和β亚型糖皮质激素受体(GRα和GRβ)mRNA和蛋白表达,并将检测结果与正常对照组进行比较。结果糖皮质激素抵抗组患者外周血单个核细胞GRβmRNA表达量和GRβ蛋白表达阳性的单个核细胞比率明显高于激素敏感组及正常对照组(P<0.01),而GRαmRNA和蛋白表达水平,各组之间无显著差异。结论ITP患者糖皮质激素敏感性与其GRβ表达水平密切相关。

糖皮质激素受体α同型ELISA定量检测方法的建立

目的建立一种灵敏的定量检测人外周血单个核细胞（PBMC）细胞浆和细胞核内糖皮质激素受体α同型（GRα）的生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验（ABS-ELISA）方法。方法分别提取人PBMC细胞浆和细胞核总蛋白，用GRα纯品或总蛋白浓度相等的细胞提取液包被酶标板，加入针对GRα的特异性兔抗人多克隆抗体（一抗）和山羊抗兔IgG（二抗），应用生物素-亲和素系统（ABS）进行放大，采用多因素棋盘滴定方法确定最佳实验条件，用GRα纯品建立ELISA标准曲线，定量检测GRα的含量。结果该研究确定应用0．1mol／L碳酸盐缓冲液（pH9．6）包被GRα纯品或细胞提取液，一抗浓度500ng／100μL，二抗浓度400ng／100μL，使用ABS放大系统，以TMB作为辣根过氧化物酶（HRP）的底物，于450nm处检测吸光度值。该ABS-ELISA方法灵敏度为1μg／L，工作浓度范围1～100μg／L，批内变异系数（CD为5．0％～6．9％，批间CV为7．1％～9．6％，不同操作者批内和批间的CV分别为4．7％和6．2％，均在实验允许范围内，可重复性良好。另外，该法无明显交叉反应，有一定特异性。结论该研究建立了一种特异性高、可重复性好、敏感、快速、简便的定量测定PBMC细胞浆和细胞核内GRα的新方法，对进一步探讨自身免疫病的激素疗效与患者GR的关系等方面具重要价值。

糖皮质激素对淋巴细胞受体表达的影响

目的观察糖皮质激素(GH)对淋巴细胞受体(GR)及亚型表达的影响。方法将10-5mol/L地塞米松(Dx)在淋巴细胞株Raji和Jurkat上作用3d,采用Westernblot方法检测GR在蛋白质水平上的变化,采用Realtime方法检测GR及其亚型在mRNA水平上的变化。结果应用Dx24h,总蛋白中GR表达明显减少,但在核蛋白中GR表达明显增多;在mRNA水平上hGRα亚型在用药前后无显著变化(P>0.05),hGRβ亚型量极微,几乎不能检测。结论GH影响GR的表达,GR活化后由细胞浆转入细胞核;hGRβ亚型的作用有待进一步研究。

重症肌无力患者外周血单个核细胞糖皮质激素受体α同型与激素疗效的关系

目的 观察重症肌无力（MG）患者外周血单个核细胞（PBMC）糖皮质激素受体α同型（hGRα）含量或核转位率与激素疗效的关系。方法 收集MG患者51例、其他神经免疫性疾病（ONID）患者16例及健康对照者11名，分别提取外周血单个核细胞（PBMC）细胞核和细胞质蛋白质，采用生物素-亲和素-酶联免疫吸附试验（ABS-ELISA）定量测定经体外地塞米松（DEX）作用前、后PBMC细胞质和细胞核内hGRα含量，并计算hGRα核转位率。应用临床相对记分法评价激素疗效。结果 未经DEX处理时MG和ONID组PBMC细胞质hGRa含量均低于健康对照组（P〈0．05），经DEX处理后MG组其hGRa含量明显低于健康对照组（P〈0．01）。MG患者的性别、年龄、伴发胸腺疾病情况和hGRa含量以及hGRa核转位率间均无明显相关（P〉0．05）。Osserman分型Ⅳ型MG患者hGRa核转位率低于其他分型者（P〈0．05）。病程≥2年的MG患者hGRa核转位率明显低于病程≤6个月和病程6个月～2年的MG患者（均P〈0．01）。MG患者PBMC的细胞核内hGRa含量和hGRa核转位率与激素治疗2周（n=51，r=0．913，r=0．907，P〈0．05）和4周（n=47，r=0．929，r=0．911，P〈0．05）的临床相对评分间均呈正相关。结论 经DEX作用后PBMC细胞核内hGRa含量和激素诱导的hGRa核转位率与MG患者对激素的敏感性问呈正相关，两者可作为预测激素疗效的实验室指标。