敲除GLRX3基因对鼻咽癌细胞生物学的影响

目的建立稳定敲除GLRX3(glutaredoxin 3)基因的鼻咽癌细胞株,探索GLRX3基因在鼻咽癌细胞中的生物学功能。方法构建人GLRX3基因的shRNA逆转录病毒载体,将其转染入鼻咽癌细胞株HONE1中,筛选、建立稳定敲除GLRX3基因的HONE1细胞株。采用实时荧光定量PCR法验证筛选细胞中GLRX3基因的转录水平,通过克隆形成实验和划痕实验检测敲除GLRX3基因后鼻咽癌细胞克隆形成能力及迁移运动能力,评价敲除GLRX3基因后鼻咽癌细胞生物学行为的改变情况。结果成功构建的4个GLRX3 shRNA-pBINNS2质粒载体均可抑制GLRX3基因的转录表达。敲除GLRX3基因的HONE1细胞的克隆形成能力及迁移运动能力均降低。结论敲除GLRX3基因可抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为,GLRX3可能是鼻咽癌候选的癌基因。

利用CRISPR/Cas9技术构建GLRX3基因敲除的HEK293细胞系

为了构建GLRX3(Glutaredoxin 3)敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性。将携带Cas9及靶向hGLRX3-Exon5的sgRNA1的打靶载体转染HEK293,通过药物Puromycin和细胞克隆化筛选出稳定GLRX3基因敲除的HEK293细胞株,并通过测序确定GLRX3两个等位基因均发生移码突变。通过免疫印迹在蛋白表达水平确认了该基因的敲除。利用CRISPR/Cas9技术成功构建了GLRX3敲除的HEK293细胞株,其为探索GLRX3的功能和作用机制提供了有效的细胞模型。

胰高血糖素样多肽-1拮抗2型糖尿病胰岛细胞凋亡损伤（英文）

胰高血糖素样多肽-1(glucogen-like peptide-1,GLP-1)在胰岛素分泌过程中扮演重要角色,并在改善β细胞功能方面有着令人瞩目的效应,但有关其作用机制尚需更深入研究。本研究探讨GLP-1对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型胰岛细胞损伤的影响,观察GLP-1在T2DM大鼠胰岛细胞凋亡损伤机制中所发挥的作用。HE染色结果发现,糖尿病大鼠胰岛损伤。ELISA结果表明,糖尿病患者和糖尿病大鼠血清中GLP-1表达水平上调。放射免疫结果表明,GLP-1和谷氧还蛋白1(Grx1)促进HIT-T 15细胞分泌胰岛素,Cd抑制胰岛素的分泌。免疫组化结果表明,糖尿病大鼠GLP-1加药处理后,各组与糖尿病组相比,药物提高了Grx1和胰岛素表达水平,降低了胰高血糖素表达水平,同时降低了活性胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达。本研究结果提示,GLP-1在肥胖T2DM大鼠胰岛细胞凋亡中起保护作用,同时可调节胰岛素和胰高血糖素水平,其机制可能与Grx1相关。