初步构建与评估递送柚皮素的RGD外泌体

目的:本研究旨在制备生物合成纳米载体递送柚皮素(naringenin,Ng),并研究其对乳腺癌的体外抑瘤效果。方法:使用精氨酸甘氨酸天冬氨酸前列腺素F2受体阴性调节因子绿色荧光蛋白(Arg-Gly-Asp-prostaglandin F2 receptor negative regulator-green fluorescent protein,RGD-P-G)质粒进行转染,构建分泌RGD-P-G外泌体(RGD-P-G-Exosomes,RGD-P-G-Exo)的293F细胞。通过超速离心收集293F细胞上清液中的RGD-P-G-Exo,加入Ng,并通过水浴超声促使RGD-P-G-Exo包封Ng,形成RGD-P-G-Exo@Ng。使用荧光显微镜对转染RGD-P-G的293F细胞进行鉴定。通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术、蛋白质免疫印迹等方法对RGD-P-G-Exo@Ng的形貌、粒径、标志物和绿色荧光蛋白(GFP)表达情况进行表征。采用紫外分光光度法评估包封率和载药量。通过细胞摄取实验评估纳米药物被吞噬摄取的效果。通过CCK-8法检测Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng对乳腺癌MDA-MB-231细胞的杀伤能力。结果:电镜结果显示RGD-P-G-Exo@Ng呈茶托状结构,纳米颗粒追踪分析技术显示RGD-P-G-Exo@Ng粒径主要分布在147.0 nm。蛋白免疫印迹结果表明RGD-P-G-Exo@Ng表达CD9、CD63等外泌体标志物和GFP,证明RGD-P-G-Exo的构建成功。RGD-P-G-Exo@Ng纳米药物的包封率为(28.1±0.6)%,载药量为(6.0±0.1)%。在高浓度下,Exo及RGD-P-G-Exo对MDA-MB-231细胞的存活率无显著影响,具有良好的生物相容性。在细胞摄取实验中,与Exo@Ng相比,RGD-P-G-Exo@Ng具有更强的细胞摄取效果(P<0.05)。药效实验中,Exo@Ng和RGD-P-G-Exo@Ng均表现出浓度依赖性的MDA-MB-231细胞毒性,其中RGD-P-G-Exo@Ng比相同浓度的Exo@Ng具有更强的细胞杀伤能力(P<0.05)。结论:本研究初步合成了一种用于靶向递送Ng的纳米药物,为开发生物纳米靶向肿瘤药物递送系统提供了新的策略。

B_(23)-Gly-B_(24)人胰岛素的分离纯化及性质研究

为了研究胰岛素B链羧端的自由度对于胰岛素与受体相互作用的影响。在人胰岛素B链羧端（转角区回折点B23与B24之间插入一个Gly。B23-Gly-B24人胰岛素原在大肠杆菌的表达产物占细胞总蛋白量的28％,B23-Gly-B24人胰岛素的受体活性分别是标准猪胰岛素的122％和人胰岛素的111％。说明以较高的受体结合活性获得了高纯度的B23-Gly-B24人胰岛素。

B_(19)-Gly-B_(20)人胰岛素的分离纯化及性质研究

目的研究胰岛素B链羧端的自由度对于胰岛素与受体相互作用的影响。方法在人胰岛素B链羧端 β转角区回折点B1 9与B2 0 之间插入一个Gly。结果B1 9 Gly B2 0 人胰岛素原的表达产物占细胞总蛋白量的 3 0 % ,B1 9 Gly B2 0 人胰岛素的受体活性是标准猪胰岛素的 12 1%。结论以较高的受体结合活性获得了高纯度的B1 9 Gly B2 0 人胰岛素。

β2-肾上腺素能受体基因Arg16/Gly多态性与新疆哈萨克族男性甘油三酯水平的关系

探讨β2-肾上腺素能受体（β2-adrenergic receptor,β2-AR）基因Arg16/Gly多态性与新疆哈萨克族男性血清甘油三酯（TG）水平的关系。采集新疆阿勒泰地区265例30岁-60岁之间哈萨克族男性牧民的遗传标本,采用聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性（PCR-RFLP）技术分析β2-AR基因Arg16/Gly多态性,观察各基因型和等位基因与TC水平的关系。（1）在扣除收缩压、舒张压、BMI和年龄等影响因素后,血清TG水平在β2-AR基因Arg16/Gly多态位点三种基因型间无统计学差异（P〉0.05）。（2）将人群按血清TG水平〈1.7mmol/L、（1.7-2.25）mmol/L、≥2.26mmol/L划分为正常组、边缘升高组及升高组3组,β2-AR基因Arg16/Gly多态位点三种基因型频率在TG正常、边缘升高及升高组3组中的分布无统计学差异（P（0.05）。β2-AR基因Arg16/Gly多态性与哈萨克族男性牧民的TG水平升高无关。

吸入麻醉药抗药物性惊厥的实验研究

目的 观察吸入麻醉药乙醚、安氟醚、异氟烷和七氟醚对小鼠药物性惊厥的影响。方法 给小鼠分别腹腔注射镇静剂量的乙醚、安氟醚、异氟烷或七氟醚 ,5min后注射 4种不同的致惊药物 ,对照组注射生理盐水 ,观察并记录各组惊厥发生的潜伏期、类型、发生率等。结果 乙醚、安氟醚、异氟烷能对抗一叶秋碱和荷包牡丹碱的致惊作用 ,安氟醚能对抗N -甲基 -D -天冬氨酸 (NMDA)的致惊作用 ,乙醚能对抗士的宁的致惊作用。结论 乙醚、安氟醚和异氟烷抗惊厥作用与GABAA 受体有关 ,安氟醚抗惊厥作用与NMDA受体有关 。

RGD和YIGSR衍生物的抗肿瘤侵袭、转移活性

目的 研究抗肿瘤转移肽Arg Gly Asp(RGD)和Tyr Ile Gly Srg Arg(YIGSR)的均叉、杂叉聚合肽的抗肿瘤侵袭、转移作用。方法 MTT法测定药物对PG和LA795细胞粘附Matrigel能力的影响 ;Transwell细胞培养小室测定药物对PG细胞侵袭重组基底膜能力的影响 ;观察药物对LA795小鼠肺腺癌细胞自发肺转移模型抗肿瘤转移的影响。结果 在 5 0～ 10 0 μg/ml浓度范围 ,RGD和YIGSR的杂叉肽WF12和YIGSR的均叉肽WF2 7的抗粘附作用强于RGD和YIGSR肽 ;以上二肽在 10 0 μg/ml浓度的抗肿瘤侵袭作用优于RGD和YIGSR肽 ;以上二肽 10 0 μg/只 ,静脉给药仅 5次可显著抑制移植LA795细胞肺转移小鼠的肺脏重量和肺转移结节数。结论 RGD与YIGSR的杂叉肽WF12和YIGSR的均叉肽WE2 7具有较强的抗肿瘤侵袭、转移活性。

HMGB-1和RAGE在重型颅脑外伤术后颅内感染患者脑脊液中的表达及意义

目的分析高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)与晚期糖基化终产物受体(RAGE)在重型颅脑外伤术后颅内感染患者脑脊液中的表达及临床意义。方法选取我院重症医学科2014年7月—2016年5月收治的重型颅脑外伤术后拟诊颅脑感染患者62例,根据是否发生术后颅内感染将患者分成颅内感染组46例与非颅内感染组16例。采用酶联免疫吸附法检测两组脑脊液中HMGB-1、RAGE的水平和降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、乳酸(LA)、腺苷脱氨酶(LDH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IL-15水平。结果颅内感染组脑脊液HMGB-1为(224.67±75.48)ng/ml,RAGE为(160.32±42.17)ng/ml,均明显高于非颅内感染组,差异均有统计学意义(P<0.01)。两组患者脑脊液PCT、CRP、LA、LDH、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-10、IL-15水平比较差异无统计学意义(P>0.05);颅内感染组患者IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α水平高于非颅内感染组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论重型颅脑外伤术后颅内感染患者脑脊液HMGB-1和RAGE表达水平升高,脑脊液HMGB-1和RAGE检测对术后颅内感染具有一定的诊断价值。

淫羊藿总黄酮抑制大鼠脊髓背角神经元甘氨酸激活的全细胞电流

目的研究淫羊藿总黄酮对急性分离的大鼠脊髓背角神经元甘氨酸激活的全细胞电流(IGly)的调控。方法在急性分离的大鼠脊髓背角神经元上,采用全细胞膜片钳方法,研究淫羊藿总黄酮对甘氨酸激活的全细胞电流的调控。结果淫羊藿总黄酮呈浓度依赖性地抑制IGly;淫羊藿总黄酮使甘氨酸的浓度-效应曲线平行右移;淫羊藿总黄酮没有改变甘氨酸受体的离子选择性。结论淫羊藿总黄酮对甘氨酸介导的反应产生抑制作用可能是由于降低了甘氨酸与其受体的亲和力。

KGD环七肽的分子设计及性质研究

通过化学合成方法合成线性长度七肽分子CKGDWDC,进而通过在(1,7)位形成二硫键构成共价闭合环状结构,最终形成KGD环七肽.结构计算结果显示,KGD环七肽中的KGD序列表现出功能构象,具有较强的抗血小板聚集活性,能够专一性识别与结合血小板膜上纤原受体,具有较强的抑制血栓形成的能力.KGD环七肽具有较强的实际应用价值和广阔的应用前景.

sRAGE在自发性早产孕妇血清中的表达水平及其对早产的预测价值

目的观察可溶性晚期糖基化终产物（sRAGE）在胎膜完整的自发性早产孕妇、未足月胎膜早破孕妇以及相同孕周的正常产检孕妇血清中的水平变化，探讨其对早产妊娠结局的预测价值。方法选取在徐州医科大学附属医院产科诊治的胎膜完整自发性早产孕妇（A组）32例，未足月胎膜早破孕妇（B组）36例，相同孕周正常产检孕妇（C组）36例。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血清中sRAGE水平，探讨其与妊娠结局的相关性，并进一步分析比较各组血清sRAGE水平与临床常用炎症指标的相关性。结果①3组孕妇血清sRAGE水平差异有统计学意义（P〈0．05）。B组孕妇血清sRAGE水平低于A、C组（P〈0．05）；A组孕妇血清sRAGE水平高于C组（P〈0．05）。②A组孕妇血清中sRAGE与分娩孕周和新生儿出生体重呈正相关（P〈0．05），B组孕妇血清中sRAGE与终止妊娠时间和新生儿出生体重呈正相关（P〈0．01）。③B组孕妇血清中sRAGE水平与中性粒细胞百分比呈负相关（r=-0．513，P〈0．01）。结论sRAGE可以作为预测自发性早产发生的一个因素，高浓度的sRAGE一定程度上可反映良好的妊娠结局。

Neurokinin 1受体对脊髓后角疼痛传递和调控作用的研究进展

脊髓后角在伤害性刺激传递中起着重要的作用,将初级传入含有的疼痛信息传递到大脑。伤害性疼痛的初级传入主要终止于Ⅰ层和Ⅱ层,其中一些初级传入包含P物质。许多Ⅰ层的投射神经元发出纤维到大脑的不同区域,包括延髓腹外侧区,导水管周围灰质,丘脑。Neurokinin 1受体(NK1R)在脊髓后角的许多神经元表达,这些神经元接受含有P物质的初级传入。80%的Ⅰ层投射神经元表达NK1R阳性。在Ⅲ层和Ⅳ层,同样存在着NK1R阳性神经元,它们不但发出纤维投射到延髓腹外侧区,而且发出纤维调控Ⅰ层的投射神经元。脊髓后角的NK1R阳性神经元既受到局部抑制性神经元的调控,又受到下行调控系统的控制。

含RGD受体结合位点口蹄疫病毒Asia1/JS/China/2005株的拯救及初步鉴定

【目的】构建含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)受体结合位点口蹄疫病毒(FMDV)Asia1/JS/China/2005株的全长感染性cDNA克隆。【方法】采用定点突变方法,构建Asia1型FMDV含有预期突变的全长cDNA克隆pFMDV-RGD。pFMDV-RGD重组质粒经NotI线化后,与表达T7 RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,进行FMDV-RGD病毒拯救。【结果】序列测定结果表明成功构建了FMDV含有RGD受体位点的Asia1/JS/China/2005全长cDNA克隆。共转染试验获得拯救病毒,对拯救的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析,表明成功拯救了含有RGD受体结合位点的Asia1/JS/China/2005株FMDV。【结论】该试验为进一步研究含有RGD和RDD受体结合位点2个拯救病毒生物学特性的差异奠定了基础。

酶联免疫吸附试验测定儿童体内抗青霉素类IgG抗体

目的：建立一个测定青霉素类反应性ＩｇＧ的酶联免疫吸附方法（ＥＬＩＳＡ）并用该方法观察儿童血清中的特异性抗体．方法：采用免疫印迹、ＥＬＩＳＡ、半抗原抑制试验．结果：青霉素类和牛血清白蛋白结合成复合物，该复合物能作为ＥＬＩＳＡ中的包被抗原（１００ｍｇ·Ｌ－１）．样品稀释倍数和吸光度间有良好的相关性，相关系数０９９１８．运用ＥＬＩＳＡ在１３例临床可疑青霉素过敏的患儿中检测出４例青霉素抗体，１例青霉素和氨苄西林抗体，３例青霉素、氨苄西林、哌拉西林抗体．结论：成功的建立了一个ＥＬＩＳＡ方法，针对青霉素的ＩｇＧ应答在儿童具有异质性．ＩｇＧ抗体不但能识别青霉素分子本身，还能识别降解产物以及来自复合物的新抗原决定族．青霉素、氨苄西林、哌拉西林间有免疫交叉反应．