五味子酮通过调节AKT/GSK3信号通路改善2型糖尿病大鼠血糖的研究

目的探讨五味子酮的降血糖作用及其可能的作用机制。方法构建2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,给予低、中、高剂量五味子酮灌胃处理后,评估其空腹血糖、K值与肝脏指数,并采用PAS染色检测肝组织的糖原含量。建立高糖(55 mmol·L^(-1))诱导的HepG2细胞模型,给予五味子酮或AKT抑制剂MK-2206干预后,分别采用NBDG法和比色法检测细胞的糖摄取和糖生成能力。采用Real-time PCR和Western blot法进一步检测T2DM大鼠肝组织和高糖诱导HepG2细胞中磷酸化AKT(p-AKT)和糖原合成酶(GSK3)的表达。结果与正常组相比,T2DM大鼠的空腹血糖和肝脏指数显著升高,胰岛素敏感性、糖原合成能力显著降低,高糖(55 mmol·L^(-1))诱导的HepG2细胞葡萄糖摄取显著减少、而生成显著增多。分子生物学实验结果显示,T2DM大鼠和高糖(55 mmol·L^(-1))诱导的HepG2细胞AKT的磷酸化水平显著下调,而GSK3的表达水平显著上调,给予五味子酮干预能够有效逆转上述改变,且该逆转作用可被AKT抑制剂MK-2206终止。结论五味子酮是一种潜在的降血糖药物,其降糖作用机制可能与调节AKT/GSK3信号通路有关。

山奈酚调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路促进人炎性乳腺癌SUM190细胞株凋亡的研究

目的:观察山奈酚通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)信号通路对人炎性乳腺癌SUM190细胞株凋亡的促进作用。方法:取对数期人炎性乳腺癌SUM190细胞株,随机分为4组,低、中、高剂量组分别加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L山奈酚20μL,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)。72h后用倒置显微镜观察细胞生长状态;对比干预24h、48h、72h后细胞增殖抑制率及干预72h后细胞凋亡率;对比干预72h后PI3K、AKT、GSK-3βmRNA相对表达量及磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白灰度值比值。结果:对照组细胞轮廓清晰、结构紧密,贴壁生长;3个剂量组细胞变圆浮起,细胞膜皱缩、细胞质颗粒增多,可见细胞碎片,其中中剂量组变化最为明显;细胞增殖抑制率比较,中剂量组最高,高剂量组其次,低剂量组最低,组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05),3个剂量组均随时间的延长显著升高(P<0.05);凋亡率比较,中剂量组最高,高剂量组其次,低剂量组更低,对照组最低,组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05);p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β比值比较,中剂量组最低,高剂量组其次,低剂量组更高,对照组最高,组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:山奈酚可促进人炎性乳腺癌SUM190细胞株凋亡,其中50μmol/L山奈酚促凋亡效果最佳,提示与下调PI3K、AKT、GSK-3β蛋白磷酸化水平、抑制PI3K/AKT/GSK-3β信号通路有关。

肺腺癌组织中GSK3β的表达及其临床意义

目的观察肺腺癌组织中糖原合成酶激酶(glycogen synthesis kinase,GSK)3βmRNA和蛋白的表达情况,并探讨其在肺腺癌发生发展中的意义。方法随机选取55例肺腺癌患者的癌组织标本作为实验组,相对应的癌旁正常组织标本作为对照组。用RT-PCR法检测两组中GSK3βmRNA相对表达量;用Western blot法检测两组中GSK3β蛋白的相对表达量。结果实验组GSK3βmRNA及GSK3β蛋白的相对表达量分别为(0.366±0.138)和(0.460±0.242),对照组分别为(0.485±0.137)和(0.689±0.183)。实验组GSK3βmRNA及GSK3β蛋白表达量均低于对照组(P<0.01)。肺腺癌Ⅰ~Ⅱ期患者GSK3βmRNA及蛋白相对表达量明显高于Ⅲ期患者(P<0.01)。结论相比癌旁正常组织,GSK3β在肺腺癌组织中表达下调,伴随临床分期上升,GSK3β表达下降。提示GSK3β对肺腺癌的发生发展有抑制作用,提高GSK3β的表达可能使肺腺癌的治疗获益。

糖原合成酶激酶-3β在瑞芬太尼诱发痛觉过敏大鼠脊髓背角含GluR1和GluR2亚基AMPA受体表达和转运中的作用

目的 评价糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）在瑞芬太尼诱发痛觉过敏大鼠脊髓背角含GluR1和GluR2亚基AMPA受体表达和转运中的作用.方法 雄性SD大鼠24只,体重240 ～ 260 g,2～3月龄,采用随机数字表法,将其分为3组（n=8）：对照组（C组）、瑞芬太尼组（R组）和瑞芬太尼＋GSK-3β抑制剂TDZD-8组（R＋T组）.R组和R＋T组静脉输注瑞芬太尼1.0μg·kg-1·min-1 1 h,TDZD-8组输注瑞芬太尼前静脉注射DZD-8 1 mg/kg.分别于瑞芬太尼输注前、输注停止后2、6、24和48 h时测定热缩足反应潜伏期（TWL）和机械缩足反应阈（MWT）.最后一次行为学测试后处死大鼠,取脊髓背角L4-6节段,采用Western blot法测定膜蛋白及总蛋白AMPA受体GluR1和GluR2亚基表达,并计算膜蛋白二者表达的比值（GluR1/GluR2）.结果 与C组比较,R组MWT降低,TWL缩短,总蛋白及膜蛋白GluR1表达上调,总蛋白及膜蛋白GluR2表达下调,膜蛋白GluR1/GluR2升高（P＜0.05或0.01）;与R组比较,R＋T组MWT升高,TWL延长,总蛋白及膜蛋白GluR1表达下调,总蛋白及膜蛋白GluR2表达上调,膜蛋白GluR1/GluR2比值降低（P＜0.05或0.01）.结论 GSK-3β介导了瑞芬太尼诱发痛觉过敏大鼠脊髓背角含GluR1亚基AMPA受体的表达上调和插入及含GluR2亚基AMPA受体的表达下调和内化.

电针预处理促进缺血再灌注后GSK-3β磷酸化诱导脑缺血耐受效应

目的:探索糖原合成激酶3β(GSK-3β)在电针预处理诱导的脑缺血再灌损伤保护中的作用。方法:60只雄性SD大鼠随机分成5组(n=12):假手术(Sham)、大脑中动脉栓塞组(MCAO)、电针预处理组(EA)、电针预处理加LY294002组(EA+LY)、电针预处理加溶剂组(vehicle);通过梗死面积及Garcia评分评价脑损伤程度,通过Western Blot检测GSK-3β活性。结果:与MCAO组相比,EA组梗死容积减少,Garcia评分改善(P<0.05);与vehicle组相比,EA+LY组梗死容积增加,Garcia评分降低(P<0.05);与MCAO组相比再灌注后2小时EA组GSK-3β磷酸化水平升高(P<0.05);与EA组相比EA+LY组GSK-3β磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:电针预处理通过促进缺血再灌注后GSK-3β的磷酸化发挥脑保护作用。

糖原合成酶激酶-3β在瑞芬太尼诱发大鼠脊髓背角神经元NMDA受体微小兴奋性突触后膜电流中的作用

目的探讨糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）在瑞芬太尼诱发大鼠脊髓背角神经元NMDA受体微小兴奋性突触后膜电流（mEPSCs）中的作用。方法取出生14～18d的Wistar大鼠24只，体重50～60g，制备腰段脊髓切片，取切片144张，采用随机数字表法，将其分为4组（n=36）：对照组（C组）：置人人工脑脊液中培养；甘氨酸组（G组）：置入含甘氨酸（浓度0．24μmol／L）的人工脑脊液中孵育；瑞芬太尼组（R组）：置人含瑞芬太尼（浓度为4nmol／L）的人工脑脊液中孵育；瑞芬太尼＋GSK-3β抑制剂TDZD-8组（RT组）：置入含瑞芬太尼和TDZD-8（浓度分别为4nmol／L和10gmol／L）的人工脑脊液中孵育。各组孵育60min后应用全细胞膜片钳技术记录脊髓背角神经元NMDA受体mEPSCs的幅值和频率。结果与C组比较，R组mEPSCs的幅值和频率升高（P〈0．01），G组和RT组差异无统计学意义（P〉0．05）；与R组比较，RT组mEPSCs幅值和频率降低（P〈0．01）。结论脊髓背角神经元GSK-30参与了瑞芬太尼增强NMDA受体mEPSCs的作用，提示其可能参与了瑞芬太尼诱发的痛觉过敏。

α-咔啉类GSK-3β抑制剂的合成、活性评价和分子对接研究

糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是神经退化性疾病如早老性痴呆、II型糖尿病、癌症等多种重复杂性疾病的药物靶标,α-咔啉类化合物具有多种生物活性.以GSK-3β为作用靶点,利用Graebe-Ullmann反应合成了α-咔啉,并采用Buchwald-Hartwig偶联反应合成了9个4位取代的α-咔啉胺类衍生物.体外的GSK-3β激酶酶抑制活性测试表明其中4个化合物具有一定的抑制活性,其中化合物3c的IC50值达到了5.1μmol L-1.同时采用了分子对接方法分别研究了化合物2,3c与大分子蛋白的作用模式,初步探讨了影响抑制活性的原因,为进一步的研究提供了依据.

EGCG对阿尔采末病的保护作用研究进展

表没食子儿茶素没食子酸酯(epigaloctechin-3-gallit,EGCG)是一种高效的抗氧化剂。其通过恢复大脑内烟碱型胆碱能受体缺损及数量;降低C-Abl蛋白水平,一种非受体型酪氨酸激酶的核转移蛋白,阻碍β-亚型糖原合成激酶3(β-isoforms of glycogen synthase kinase 3,GSK-3β)活化,减轻阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease,AD)进程;抗氧化作用;改善线粒体功能失常;雌激素样等作用途径。起到下调淀淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)表达,加强清除Aβ作用,减轻对神经细胞的毒性,保护AD神经元功能。

PI3K/GSK-3在LPA诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨PI3K/GSK-3通路在溶血磷脂酸(LPA)诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法培养PC12细胞,CCK8测定不同水平LPA处理下PC12细胞的细胞活力,Tunel法测定不同水平LPA处理下PC12细胞的细胞凋亡,测定PI3K、GSK-3抑制剂预处理对LPA诱导的PC12细胞活力和细胞凋亡的影响;Western Blot测定不同水平LPA处理下PC12细胞裂解液的凋亡蛋白酶Caspase 3水平,测定PI3K、GSK-3抑制剂预处理对LPA介导的PC12细胞裂解液Caspase 3水平变化的影响。结果 LPA剂量依赖导致PC12细胞活力下降,PI3K、GSK3α抑制剂能够减轻LPA介导的PC12细胞活力下降,GSK3β抑制剂能够促进LPA介导的PC12细胞活性损失;LPA以剂量依赖的方式诱导PC12细胞凋亡,PI3K、GSK3α抑制剂可减轻LPA介导的PC12细胞凋亡,GSK3β抑制剂可促进LPA介导的PC12细胞凋亡;LPA以剂量依赖的方式增加PC12细胞Caspase 3表达,PI3K、GSK3α抑制剂可抑制LPA介导的PC12细胞Caspase 3表达增加,GSK3β抑制剂可促进LPA介导的PC12细胞Caspase 3表达增加。结论 LPA/PI3K/GSK-3通路在神经细胞死亡的病理生理过程中起重要作用,干预LPA/PI3K/GSK-3通路将是一种潜在的创伤后治疗措施。

黄芪多糖抑制HepG2细胞增殖及可能机制研究

目的研究黄芪多糖对HepG2细胞增殖的作用及可能机制。方法用不同浓度(100、200和400μg/ml)的黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)处理HepG2细胞,采用MTT法检测细胞增殖,采用Western blot检测细胞内糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)的表达。结果 APS100组、APS200组及APS400组HepG2细胞第1~7 d吸光度和GSK3β蛋白质表达均显著低于对照组(P<0.05);APS100组和APS400组HepG2细胞D1~D7吸光度和GSK3β蛋白质表达差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于APS200组(P<0.05)。结论黄芪多糖可显著抑制HepG2细胞增殖,其机制可能与抑制糖原合成酶激酶3β表达有关,其中200μg/ml抑制作用最强。