脑内Aβ沉积与AD模型大鼠学习记忆能力关系的研究

目的:探讨阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力与脑组织β淀粉样蛋白(amyloid β-pro-tein,Aβ)之间的关系。方法:选用雄性Wistar大鼠,腹腔注射D-半乳糖和AlCl3,连续90d,制备AD大鼠模型。给药结束后,通过Morris水迷宫观察模型大鼠学习记忆能力,免疫组化方法检测AD模型大鼠脑组织Aβ的表达。结果:AD模型大鼠空间学习记忆能力明显下降,脑组织Aβ表达水平均较对照组高(P<0.01)。结论:AD模型大鼠脑内炎症及脑组织Aβ表达水平升高是导致其学习记忆能力下降的重要原因。

LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的:观察脂多糖(LPS)致大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的作用。方法:LPS作用大鼠AMs后,用电泳迁移率改变分析法(EMSA)测NF-κB活性;用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基(p65)后,Western blotting检测p65表达变化;ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。结果:于LPS作用AMs后4h,NF-κB活性达到峰值,24h仍维持在高水平;作用后4h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基(p65)表达后,LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组(P<0.01)。结论:LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。

脓毒症单核巨噬细胞特异性结合肽的筛选

利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮"差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容.

巨噬细胞炎症蛋白-2和细胞凋亡在内毒素诱导急性肺损伤发病中的作用探讨

目的探讨巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)和细胞凋亡在小鼠内毒素诱导急性肺损伤发病机制中的作用。方法以脂多糖气管内注射建立小鼠急性肺损伤模型,进行肺组织病理、肺水含量、支气管肺泡灌洗液白细胞总数和中性粒细胞分类计数、TNF-α和MIP-2浓度检测,并作肺组织凋亡细胞计数。结果气管内注射LPS后,肺水含量、肺泡灌洗液白细胞总数和中性粒细胞分类计数、TNF-α和MIP-2浓度及肺组织凋亡细胞计数均明显升高,且随时间推移呈逐渐变化的趋势。结论MIP-2是炎症早期的促炎性细胞因子,其在早期短期急剧释放可趋化和激活中性粒细胞并诱导肺组织细胞凋亡,从而启动与维持炎症反应。

脑内炎症反应对大鼠黑质多巴胺能神经元长时程毒性作用的研究

目的观察黑质部位炎症反应对多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑内炎症反应在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用。方法健康SD雄性大鼠28只,随机分为生理盐水组和10μg、25μg、50μg脂多糖组。定位注射生理盐水或脂多糖入右侧脑室,术后24周观察大鼠行为学改变,免疫组织化学染色观察黑质部位小胶质细胞的激活情况及酪氨酸羟化酶阳性神经元的变化。结果1.大鼠行为学观察显示,10μg、25μg和50μg脂多糖组大鼠的平均运动速度与对照组相比,差异无统计学意义。2.OX-42免疫组织化学染色显示,10μg和25μg脂多糖组大鼠黑质部位小胶质细胞激活明显。50μg脂多糖组大鼠黑质部位小胶质细胞激活不明显。3.酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色显示,10μg和25μg脂多糖组大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元与对照组相比,胞体变小,突起减少甚至消失,染色变浅;50μg脂多糖组大鼠酪氨酸羟化酶阳性神经元形态与对照组相比没有明显改变。4.酪氨酸羟化酶阳性细胞计数显示,10μg和25μg脂多糖组大鼠与对照组比较,分别减少15.5%(P<0.01)和20.1%(P<0.01);50μg脂多糖组大鼠与对照组比较没有统计学差异。结论脑室注射脂多糖引发的脑内炎症可导致黑质多巴胺能神经元变性,这一过程呈慢性迟发性;同时,低剂量脂多糖激活小胶质细胞对黑质多巴胺能神经元的慢性毒性作用更为明显;该病理过程较好地模拟了帕金森病的发病特点。

NF-κB在牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞白介素6表达中的作用

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)诱导小鼠成骨细胞株MC3T3-El白介素6(IL-6)表达中的作用。方法:10 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞不同时间后,应用免疫荧光方法检测NF-κB核易位情况和BAY-117082对NF-κB核易位抑制情况,反转录聚合酶链反应(RT—PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BAY-117082对MC3T3-El细胞的IL-6基因和蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行多因素方差分析和Dunnett t检验。结果:在静息状态下,NF-κB定位在胞质中,10 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞30 min后即引起NF-κB快速的核易位;60 min后,大部分NF-κB重新定位在胞质里,10μmol/L BAY-117082预处理1 h可抑制P.e-LPS引起的NF-κB核易位,降低P.e-LPS诱导MC3T3-El细胞IL-6 mRNA表达水平和IL-6蛋白的分泌水平,其中,蛋白分泌水平从(774.983±6.585)ng/L降低至(377.384±14.620)ng/L(P<0.O1),而BAY-117082单独刺激组与空白对照组无显著差异。结论:P.e-LPS可诱导MC3T3-El细胞中NF-κB的核易位,P.e-LPS可通过激活NF-κB信号途径诱导MC3T3-El细胞产生IL-6。

头孢哌酮钠联合左氧氟沙星治疗对大鼠创伤弧菌脓毒症血中mCD14的影响

目的探讨头孢哌酮钠与乳酸左氧氟沙星联用对大鼠创伤弧菌(V ibrio vu ln ificus,VV)脓毒症外周血中膜性脂多糖(LPS)受体mCD14的影响。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔抗体对外周血细胞进行免疫染色,流式细胞仪测定各组FITC-CD14阳性细胞数及其荧光强度,同时观察各组染菌大鼠行为学改变情况。结果VV组FITC-CD14细胞阳性数在染菌6 h后明显升高(P<0.01),荧光强度增强;AA组在染菌6 h时,FITC-CD14细胞阳性数明显升高(P<0.01),但药物干预后FITC-CD14细胞阳性数开始减低,至染菌后12 h FITC-CD14细胞阳性细胞数为(10.967±3.135)%(P>0.05);与VV组相比,AA组在染菌后12 h和16 h的FITC-CD14细胞阳性细胞数明显减低(P<0.01)。VV组染菌4 h,大鼠出现呼吸急促,皮温升高,下肢肿胀,且症状进行性加重,染菌12 h后大鼠出现紫绀、间断抽搐等;AA组在药物干预后上述症状逐渐减轻至消失,未见抽搐,大鼠均存活。结论创伤弧菌脓毒症血中mCD14的表达水平随脓毒症的进展而升高,头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星时血中mCD14的表达水平明显减低且改善临床症状,有明显的治疗作用。

人参二醇组皂苷(PDS)抑制NOS和p38减轻LPS休克脑损伤

目的:探讨人参二醇组皂苷(PDS)对LPS诱导休克脑的保护机制。方法:将大鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+地塞米松组及LPS+人参二醇皂苷组。大鼠静脉注射LPS(4mg/kg)4h后,测定大脑皮质中NOS的活性、NO的含量及磷酸化p38蛋白的表达。结果:LPS组脑皮质中NOS活性、NO含量及p38的蛋白表达水平明显高于control组,而LPS+Dex组和LPS+PDS组脑皮质中NOS活性、NO含量及p38的蛋白表达水平明显低于LPS组。结论:PDS减轻LPS脑损伤与降低脑皮质中NOS活性、NO含量有关,可能涉及p38MAPKs信号转导通路。

银杏叶提取物对巨噬细胞呼吸爆发、炎性细胞因子和COX-2 mRNAs及蛋白表达的影响

目的探讨银杏叶提取物(EGb761)对小鼠巨噬细胞呼吸爆发及IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2mRNAs和蛋白表达的影响。方法以佛波酯刺激巨噬细胞产生呼吸爆发,用化学发光分析和电子顺磁共振检测呼吸爆发产生的活性氧;以脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2表达,用RT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2mRNAs表达,ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2蛋白表达。结果银杏叶提取物能清除巨噬细胞呼吸爆发产生的超氧阴离子自由基、下调LPS诱导巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2 mRNAs和蛋白表达。结论银杏叶提取物对巨噬细胞产生呼吸爆发和LPS诱导巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2 mRNAs和蛋白表达有明显的抑制作用。

2型糖尿病患者血清CA199与HbA1c的相关性研究

目的 探讨2型糖尿病（T2DM）患者血清中CA199水平和糖化血红蛋白（HbA1c）的相关性.方法 收集2012年1月～9月T2DM患者228例,同期选择健康体检者50例为对照组,采用化学发光法和高效液相色谱法分别检测研究对象血中CA199和HbA1c水平,并且根据HbA1c水平将T2DM患者分为血糖控制组（HbA1c＜7.0%）和血糖控制不佳组（HbA1c≥7.0%）,将T2DM患者CA199水平与对照组作比较.结果 T2DM患者中CA199水平显著高于对照组,两者比较差异有统计学意义（t=3.25,P＜0.01）,血糖控制不佳组的CA199阳性率（20.5%）明显高于血糖控制组（4.8%）,经比较差异有统计学意义（χ^2=43.33,P＜0.01）.CA199水平与HbA1c呈正相关（r=0.583,P＜0.01）.结论 T2DM患者血清CA199水平和HbA1c存在相关性,高血糖对CA199水平的表达可能有促进作用.

山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的 探讨山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）氧化应激损伤的影响。方法 采用支气管肺泡灌洗和细胞差速贴壁的方法分离犬鼠肺泡巨噬细胞，在20μg／mL脂多糖干预基础上，分别给予10^-9-10^-6mol／L山莨菪碱，测定AM培养上清液丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果 在20μg／mL脂多糖干预基础上，山莨菪碱使大鼠AM培养上清液MDA含量显著降低，SOD、LDH活性显著升高，并且具有浓度依赖性。结论 山莨菪碱对脂多糖诱导的AM脂质过氧化损伤具有一定保护作用，这可能是山莨菪碱防治内毒素引起的肺部炎症反应失控和急性肺损伤的机制之一。

糖基异硫氰酸酯的合成及其应用

作为一类重要的有机合成中间体,糖基异硫氰酸酯广泛地应用于具有生理活性化合物的制备。本文对糖基异硫氰酸酯的结构、制备方法,以及作为中间体在糖基硫脲、糖基杂环、胍基糖苷、糖基缀合物等重要化合物的合成中的应用作了较详尽阐述。在对这些研究现状进行分析的基础上,对该研究领域下一步的发展方向提出了我们的观点。

柴胡皂苷A对内毒素诱导子痫前期大鼠模型的影响

目的观察柴胡皂苷A(SSA)对内毒素(LPS)诱导子痫前期大鼠模型的影响。方法将受孕SD大鼠随机分为空白组、LPS组以及LPS+SSA组,每组11只。自受孕第5天开始,空白组给予尾静脉注射生理盐水,LPS组尾静脉注射LPS溶液,LPS+SSA组尾静脉注射LPS与SSA混合液,一直持续到第18天。然后尾套法测各组孕鼠血压,送检尿蛋白,测量孕鼠体质量及子鼠体质量。结果 LPS组孕鼠血压和尿蛋白量均明显高于空白组(P均<0.05),子鼠体质量明显低于空白组(P<0.05)。LPS+SSA组孕鼠血压和尿蛋白量均明显低于LPS组(P均<0.05),子鼠体质量明显高于LPS组(P<0.05),且各指标与空白组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 SSA能够抑制LPS诱导的孕鼠血压及尿蛋白升高,抑制子痫前期的发生。

糖尿病患者糖化血红蛋白与血糖及其各组分之间的临床意义

目的探讨糖尿病患者糖化血红蛋白与空腹血糖(FPG)及其各组分之间的关系及临床意义。方法分别使用D-10糖化血红蛋白分析仪和日立7170全自动生化分析仪对210例糖尿病患者进行糖化血红蛋白及FPG的检测。结果糖化血红蛋白可被检测出HbAla、HbAlb、HbAlc、LAlc/CHb-1及血红蛋白F(HbF)等不同组分。糖尿病患者糖化血红蛋白其主要成分是HbAlc,与FPG呈正相关,差异有统计学意义(r=0.865、P<0.005),HbAlc与糖化血红蛋白其他组分HbAla、HbAlb、LAlc/CHb-1、HbF也呈正相关,差异有统计学意义(P<0.005)。结论HbAlc及糖化血红蛋白其他各组分HbAla、HbAlb、LAlc/CHb-1、HbF对糖尿病患者病情监测及疗效评估有重要意义。

脂多糖诱导血管内皮细胞凝血途径相关因子基因表达变化

目的:观察脂多糖(LPS)对脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)表达组织因子(TF)、组织因子抑制物(TFPI)和凝血酶调节蛋白(TM)的影响。方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行实验。同时应用CCK-8测定细胞在不同浓度的LPS(1-100 mg/L)处理前后细胞活性;应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TM、TF和TFPImRNA水平。结果:浓度为10 mg/L的LPS对细胞活力与对照组相比没有显著差异。浓度为10 mg/L的LPS作用使HUVECs显著上调TF mRNA表达,6-24 h可以使细胞TFPI mR-NA表达下调,以后渐恢复正常表达,72 h达到正常对照组水平,同时下调TM mRNA表达。结论:LPS(10 mg/L)对HUVECs的活性不造成直接的影响,可显著上调HUVECs的TF mRNA转录,抑制TFPI mRNA的转录,而不改变TMmRNA的转录,这可能与LPS在感染过程中诱导血栓形成,血液凝固和D IC发生相关。

二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1α(IL-1β)浓度。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达。结果LPS1 mg/L)孵育细胞1、2、3、6 h,TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加(P＜0．01),呈时间依赖性。用DATS(0．1、0．5、2．5、5．0 mg/ L)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激3h,可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖性,其中TNF -α含量仍高于对照纽(P＜0．05),但IL-1β含量在2．5、5 mg/L DATS作用下可降至对照组水平。单独DATS对TNF-α及IL -1β的生成及其mRNA表达无明显影响(P＞0．05)。结论DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1βmR- NA表达而减少其蛋白生成,具有直接的抗炎效应,这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制。

TNF-α在慢性根尖周炎骨破坏中的机制探讨

目的探讨牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,P.e）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是否诱导成骨细胞产生肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及TNF-α是否通过核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）信号通路上调巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor,M-CSF）的产生。方法以不同浓度P.e-LPS （0~50 mg/L）刺激MC3T3-El细胞和以10 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间（0~24 h）后,采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TNF-α mRNA的表达;以不同浓度TNF-α（0~10 ng/L） 刺激MC3T3-El细胞后,采用RT-PCR和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测M-CSF mRNA和蛋白的表达;再以ELISA方法检测BAY 11-7082对TNF-α 刺激MC3T3-El细胞后M-CSF蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果不同质量浓度的P.e-LPS（0~50 mg/L）刺激MC3T3-El细胞后,TNF-α mRNA的表达具有剂量依赖性;10 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞6 h时,TNF-α mRNA 的表达量最大。随着作用时间的延长,TNF-α mRNA 的表达量逐渐下降;不同质量浓度TNF-α（0~10 ng/L）刺激MC3T3-El细胞后,M-CSF mRNA 和蛋白的表达具有剂量依赖性,蛋白表达量从（37±2） ng/L（空白对照组）增加到（301±8） ng/L（10 ng/L组）;10 mol/L BAY 11-7082预处理1 h可以降低TNF-α诱导成骨细胞M-CSF蛋白的表达水平,蛋白表达量从（253±14） ng/L（TNF-α组）下降到（154±2）ng/L（BAY＋TNF-α组）,而单独使用BAY 11-7082组与空白对照组相比差异无显著性。结论P.e-LPS诱导成骨细胞产生TNF-α,而TNF-α 上调M-CSF可能通过NF-κB信号通路,这意味着TNF-α可能在P.e-LPS致慢性根尖周炎骨破坏中对成骨细胞发挥自分泌作用。

糖尿病患者检测糖化血红蛋白和内皮素的临床意义

目的探讨糖化血红蛋白（HbA1c）和空腹血浆内皮素（ET-1）对糖尿病及其并发高血压患者的诊断价值。方法检测50例糖尿病患者和48例糖耐量正常者空腹血浆ET—1和HbA1c水平，以糖耐量正常者检测结果为对照组。结果糖尿病组HbA1c水平（7．642±1．302）％与对照组（5．477±0．526）％比较差异有统计学意义（t=10．703，P〈0．01）。糖尿病组空腹血浆ET-1水平（88．452±14．229）pg／ml显著高于对照组（43．492±10．383）pg／ml（t=17．806，P〈0．01）。结论糖尿病患者存在糖代谢紊乱和血管内皮损伤，通过HbA1c和空腹血浆ET-1的测定可以对糖尿病患者进行病程监测，并对并发高血压的患者早期发现、早期防治。

小鼠肝癌与肝正常细胞系ST3Gal和ST6Gal家族mRNA表达差异研究

探讨肝癌细胞系Hepa1-6与肝正常细胞系BNL CL.2唾液酸糖基转移酶ST3Gal和ST6Gal家族mRNA表达的差异以及与细胞膜唾液酸含量的关系,采用RT-PCR方法检测ST3Gal唾液酸转移酶家族6个成员以及ST6Gal唾液酸转移酶家族2个成员mRNA表达差异,用凝集素芯片检测细胞膜表面唾液酸表达情况,结果显示:与正常细胞系BNL CL.2相比,hepa1-6细胞内唾液酸转移酶ST3GalⅠ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ呈现高表达,ST3GalⅤ低表达,ST3GalⅡ、ST3GalⅢ表达无显著性差异,两细胞系内均为检测出ST6GalⅠ表达,ST6GalⅡ表达无显著差异;hepa1-6细胞膜α2-3和α2-6连接唾液酸含量均显著增加;提示ST3GalⅠ、ST3GalⅣ、ST3GalⅤ、ST3GalⅥ可能与肝癌发生过程相关,ST3GalⅠ、ST3GalⅣ、ST3GalⅥ可能与肝癌细胞膜α2-3唾液酸含量增加相关,ST6Gal家族对细胞膜α2-6连接唾液酸含量增加无贡献.

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MIP-1α的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白1α(macrophageinflammatoryprotein-1α,MIP-1α)m RNA和蛋白分泌的影响,以及姜黄素对此过程产生的抑制作用。方法:以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0~48 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测MIP-1αm RNA和蛋白的表达。以同样方法检测姜黄素对20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后MIP-1αm RNA和蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:在观察时间内(0~48 h),20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞后,MIP-1αm RNA的表达和蛋白的分泌具有时间依赖性。10 mol/L姜黄素预处理细胞1 h,可以降低P.e-LPS诱导的MIP-1αm RNA和蛋白的表达水平。结论:P.e-LPS可以诱导成骨细胞表达和分泌MIP-1α,姜黄素对此过程发挥明显的抑制作用。