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DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义 被引量:7
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作者 赵衡 葛超 +1 位作者 李红 李锦军 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期428-432,共5页
目的:探讨DKK-1、DKK-2和人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用组织芯片联合免疫组织化学法检测DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在10例正常肝、12例肝硬化、57例肝细胞癌及癌旁肝组织中的表... 目的:探讨DKK-1、DKK-2和人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用组织芯片联合免疫组织化学法检测DKK-1、DKK-2和GPC3蛋白在10例正常肝、12例肝硬化、57例肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达差异,并分析其临床意义。结果:免疫组织化学检测结果发现,DKK-1和DKK-2在肝细胞癌组织中阳性染色率分别为59.65%(34/57)和57.89%(33/57);GPC3只在肝细胞癌组织中表达,其阳性染色率为47.37%(27/57),而在正常肝、肝硬化及癌旁肝组织中均呈阴性表达。DKK-1与DKK-2阳性表达之间存在密切相关性(χ2=0.570,P=0.000),DKK-2与GPC3阳性染色之间也存在相关性(χ2=0.272,P=0.041)。统计分析DKK-1、DKK-2及GPC3在肝细胞癌组织中阳性染色与肝癌患者性别、年龄、血清甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)水平、乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)、肿瘤大小、病理学分级、静脉浸润以及是否伴随肝硬化等的相关性,结果表明血清AFP水平与GPC3表达呈正相关(P=0.007),HBsAg与DKK-1表达呈正相关(P=0.037),DKK-1阳性染色与肝细胞癌组织分级存在相关性(P=0.014),与其他参数则无相关性。结论:GPC3在肝细胞癌组织的阳性染色率为47.37%,GPC3染色阴性的肝细胞癌组织中DKK-1和DKK-2双阳性染色率为40.00%,而GPC3(+)联合DKK-1(+)/DKK-2(+)/GPC3(-)可将肝细胞癌的免疫组织化学检出率提高至68.42%(39/57),降低肝癌免疫组织化学检测中的假阴性率。 展开更多
关键词 肝细胞 免疫组织化学 硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 蛋白质阵列分析 DKK glypican3
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联合检测AFP-L3%、GP73、GPC3在AFP低值原发性肝癌诊断中的价值 被引量:13
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作者 黄彩云 李世龙 +1 位作者 周秀艳 韩素桂 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第21期3465-3467,共3页
目的:本研究探讨血清甲胎蛋白异质体3百分含量(AFP-L3%)、高尔基蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)联合检测在AFP低值原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)诊断中的临床价值。方法:选取58例AFP低值原发性肝细胞癌患者(PHC... 目的:本研究探讨血清甲胎蛋白异质体3百分含量(AFP-L3%)、高尔基蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)联合检测在AFP低值原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)诊断中的临床价值。方法:选取58例AFP低值原发性肝细胞癌患者(PHC组)、62例良性肝病患者(良性肝病组)和55例体检健康者纳入本研究。采用微量离心柱法分离AFP-L3,电化学发光法检测AFP与AFP-L3,计算AFP-L3%。依据试剂盒推荐以AFP-L3%≥10%作为阳性界值。采用酶联免疫吸附法检测GP73、GPC3血清浓度,其诊断PHC的cut-off值由受试者工作特征曲线(recover operation characteristic,ROC)确定。结果:PHC组AFPL3%(16.58%±5.12%)明显高于良性肝病组(9.16%±3.86%)和健康对照组(5.11%±2.03%,P<0.001);PHC组GP73浓度(167.83±69.56)ng/ml明显高于良性肝病组(59.43±28.37)ng/ml和健康对照组(10.39±4.22)ng/ml,P<0.001;PHC组GPC3浓度(116.52±48.21)μg/L明显高于良性肝病组(28.43±11.25)μg/L和健康对照组(3.25±1.46)μg/L,P<0.001。以AFP-L3%≥10%作为阳性界值诊断PHC,诊断灵敏度为82.76%,特异度为82.05%,诊断正确率为82.28%;依据ROC曲线,GP73诊断PHC的cut-off值为81.86 ng/ml,诊断灵敏度为77.59%,特异度为82.91%,诊断正确率为81.14%;依据ROC曲线,GPC3诊断PHC的cut-off浓度为35.43μg/L,诊断灵敏度为70.69%,特异度为77.78%,诊断正确率为75.43%;联合检测AFP-L3%、GP73、GPC3水平诊断PHC的灵敏度为87.93%,特异度为84.62%,诊断正确率为85.71%。结论:肿瘤标志物AFP-L3%、GP73、GPC3可作为早期诊断和鉴别诊断PHC的良好指标,联合检测可显著提高诊断正确率。 展开更多
关键词 原发性肝癌 甲胎蛋白异质体 高尔基体蛋白73 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3
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GPC3特异性HLA-A11限制的T淋巴细胞表位肽免疫活性检测 被引量:1
3
作者 孙斌 李雯 +8 位作者 计云霞 郭向华 杨晓珍 郝美君 李伟华 白飞云 王延军 郑加生 陈德喜 《北京医学》 CAS 2014年第9期752-755,共4页
目的设计合成人类白细胞抗原(HLA)-A11限制性T细胞识别的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)多肽,并检测其免疫原性和反应性。方法利用BIMAS和SYFPEITHI评分系统评价GPC3多肽与HLA-A11分子的结合能力,预测出相应的抗原谱,合成HLA-A1101限制性GPC... 目的设计合成人类白细胞抗原(HLA)-A11限制性T细胞识别的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)多肽,并检测其免疫原性和反应性。方法利用BIMAS和SYFPEITHI评分系统评价GPC3多肽与HLA-A11分子的结合能力,预测出相应的抗原谱,合成HLA-A1101限制性GPC3多肽库;流式细胞仪检测HCC患者HLA-A11分子的表达;多肽刺激外周血淋巴细胞,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测T细胞对GPC3多肽的反应性。结果流式细胞仪检测32例HCC患者,7例HLA-A11分子表达阳性(21.9%);ELISPOT检测发现17例(53.1%)HCC患者的T细胞应答阳性,7例(21.9%)HLA-A11表型检测阳性的HCC患者,T细胞应答结果成强阳性。HLA-A11限制性GPC3多肽应答率符合人群中相应基因位点的自然表达率。结论 GPC3多肽设计合理,具有良好的免疫原性和反应性。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 人类白细胞抗原 T淋巴细胞 表位肽
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血清GP73,GPC3,AFU,CA_(19-9)联合检测在原发性肝癌诊断中的价值 被引量:3
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作者 田明亮 《中外医疗》 2017年第25期43-45,共3页
目的探讨血清GP73,GPC3,AFU,CA19-9联合检测在原发性肝癌诊断中的价值。方法方便选取2016年1月—2017年1月包头医学院第一附属医院肿瘤外科收治的49例原发性肝癌(PHC)患者,50例肝炎肝硬化患者和50名健康体检者作为研究对象,检测各组受... 目的探讨血清GP73,GPC3,AFU,CA19-9联合检测在原发性肝癌诊断中的价值。方法方便选取2016年1月—2017年1月包头医学院第一附属医院肿瘤外科收治的49例原发性肝癌(PHC)患者,50例肝炎肝硬化患者和50名健康体检者作为研究对象,检测各组受试者血清中GP73,GPC3,AFU及CA19-9水平。结果 PHC组患者的GP73值(284.65±85.63)ng/m L,GPC3值(116.94±31.88)μg/L,AFU值(154.69±38.78)U/L及CA19-9值(76.31±30.53)U/m L与肝炎肝硬化组比较GP73值(90.12±48.07)ng/m L,GPC3值(50.63±19.72)μg/L,AFU值(70.86±21.72)U/L及CA19-9值(51.29±25.17)U/m L均显著升高(P<0.05);PHC组与正常对照组GP73值(58.66±20.39)ng/m L,GPC3值(8.95±3.36)μg/L,AFU值(29.64±7.55)U/L及CA19-9值(20.81±9.55)U/m L比较上述各指标显著升高(P<0.05);PHC组联合检测敏感度可高达93.88%,各指标单独检测敏感度在40%~60%左右,肝炎肝硬化组联合检测敏感度为38.00%,各指标单独检测敏感度在10%~20%左右,两组联合检测与各指标单独检测比较敏感度均有显著提升(P<0.05)。结论血清GP73,GPC3,AFU及CA19-9均为原发性肝癌的敏感指标,四者联合检测对PHC的早期诊断有重要意义。 展开更多
关键词 GP73 gpc3 AFU CA19-9 原发性肝癌
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靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞的构建与功能鉴定 被引量:3
5
作者 吴斯玮 敖翔 +6 位作者 郭韡 邢伟 安天琛 敖罗权 胡雪停 李战 徐祥 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期748-755,共8页
目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能。方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3... 目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能。方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3抗原的CAR分子基因并构建携带GPC3-CAR基因的慢病毒表达载体p CDH-GPC3-CAR,感染T细胞;采用Western blotting、流式细胞术、实时细胞监测和ELISA技术分别检测GPC3-CAR分子在CAR-T细胞的表达、慢病毒感染T细胞效率、GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤活性和特异性。结果:双酶切p CDH-GPC3-CAR重组慢病毒质粒可见分子质量和GPC3-CAR分子一致的基因片段,成功构建p CDH-GPC3-CAR慢病毒质粒。约54.38%的GPC3-T细胞表达GPC3-CAR分子,称为GPC3-CAR-T细胞。GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Huh-7比GPC3阴性的肝癌细胞SK-HEP-1具有更高效的杀伤能力[(78.96±4.76)%vs(6.87±3.15)%,P<0.01]。与GPC3阳性Huh-7肝癌细胞共培养的肝癌GPC3-CAR-T细胞分泌IFN-γ水平比Mock组高效[(21 371.4±1 808.3)vs(152.8±12.5)pg/ml,P<0.01],这可能是其高效杀伤肝癌细胞的机制之一。结论:靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞具有高效分泌IFN-γ细胞因子并特异高效杀伤GPC3阳性肝癌细胞的能力,为进一步推进GPC3-CAR-T临床前和临床研究奠定基础。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 嵌合抗原受体T细胞 免疫治疗 肝癌
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GPC3对AFP阴性乙型肝炎病毒相关肝细胞癌的诊断价值 被引量:8
6
作者 武永乐 李冰 +3 位作者 刘晖 李鹏 吕福东 丁惠国 《北京医学》 CAS 2013年第6期416-419,I0001,共5页
目的评价磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在血清甲胎蛋白(AFP)阴性乙型肝炎病毒(HBV)相关原发性肝细胞癌(hepatocellular carlinoma,HCC)中的诊断价值。方法应用免疫组织化学染色检测426例手术及179例肝穿刺活检的HBV相关HCC患者肝组织GPC3(... 目的评价磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)在血清甲胎蛋白(AFP)阴性乙型肝炎病毒(HBV)相关原发性肝细胞癌(hepatocellular carlinoma,HCC)中的诊断价值。方法应用免疫组织化学染色检测426例手术及179例肝穿刺活检的HBV相关HCC患者肝组织GPC3(GPC3L)的表达,并检测其血清AFP及血清GPC3(GPC3S)水平。结果 GPC3L可特异地表达于HCC细胞,而癌旁组织及肝硬化结节中无表达。手术切除的HCC组织中80.0%(341/426)为GPC3L阳性,且不同HCC分化程度之间GPC3阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。穿刺活检的HCC组织中74.9%(134/179)为GPC3L阳性。AFP≥400μg/L对诊断HCC的敏感度为25.4%。AFP阴性和AFP≥400μg/L的HCC患者GPC3L阳性率分别为77.4%(328/424)和81.2%(147/181)。GPC3L和AFP无相关性。在AFP<400μg/L组GPC3S为(12.63±1.63)μg/L,在AFP≥400μg/L组为(20.20±2.11)μg/L,明显高于对照组的(1.92±0.32)μg/L,P<0.01。以GPC3Scut-off值为3.5μg/L,其在全部患者、AFP≥400μg/L和AFP阴性的HCC患者中的敏感度及特异度分别为54.6%和75.0%、54.6%和80.0%、80.0%和76.0%。结论 GPC3L可作为鉴别诊断AFP阴性HCC与肝硬化良性结节标志物,血清AFP与GPC3S的联合检测可提高HCC的早期诊断率。 展开更多
关键词 肝细胞癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 鉴别诊断 甲胎蛋白 乙型肝炎病毒
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磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因对肝癌细胞SK-Hep-1黏附和侵袭的影响 被引量:3
7
作者 王冰 林山 王烈 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第5期474-477,483,共5页
目的:肝细胞癌中高表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因(glypican-3,GPC3),而在非肿瘤肝组织、肝细胞腺瘤、胆管癌、肝内胆管细胞癌、胆囊癌等细胞中低表达甚至不表达;本研究利用携带GPC3重组真核表达载体,探讨GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增... 目的:肝细胞癌中高表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因(glypican-3,GPC3),而在非肿瘤肝组织、肝细胞腺瘤、胆管癌、肝内胆管细胞癌、胆囊癌等细胞中低表达甚至不表达;本研究利用携带GPC3重组真核表达载体,探讨GPC3基因对SK-Hep-1肝癌细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3通过脂质体方法转染人肝癌细胞SK-Hep-1。RT-PCR检测GPC3-SK-Hep-1细胞中GPC3mRNA的表达;MTT法检测SK-Hep-1细胞的增殖并计算黏附率;Transwell小室实验检测SK-Hep-1肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力。结果:pEGFP-N2-GPC3成功转染SK-Hep-1细胞,转染后GPC3-Hep-1细胞明显表达GPC3mRNA。GPC3转染能显著抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖(P<0.01);GPC3转染细胞的黏附能力较对照细胞显著下降[(10.21±0.62)%vs(15.51±0.95)%,P<0.01];GPC3转染细胞的迁徙和侵袭能力较对照细胞明显增强[(131.7±7.44)vs(69.6±5.25),P<0.01;(220±12.8)vs(130±8.2),P<0.01]。结论:GPC3基因显著抑制肝癌细胞的增殖和黏附能力,但显著增强后者的迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 SK-Hep-1肝癌细胞 侵袭 黏附 增殖
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磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在原发性肝癌中的表达及临床意义 被引量:5
8
作者 范公忍 蔺会云 +3 位作者 李琳 姜胜莹 任永强 曹建彪 《北京医学》 CAS 2013年第6期423-426,I0002,共5页
目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)在原发性肝癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测45例手术切除的原发性肝癌及癌旁组织中GPC3的表达水平,比较原发性肝癌不同临床病理特征中GPC3的表达差异,分析GPC3表达与临床... 目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)在原发性肝癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化法检测45例手术切除的原发性肝癌及癌旁组织中GPC3的表达水平,比较原发性肝癌不同临床病理特征中GPC3的表达差异,分析GPC3表达与临床和病理因素的相关性。结果肝癌组织GPC3表达评分[(10.3±2.5)分]显著高于癌旁组织[(3.2±0.8)分],差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄组间GPC3蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05),而不同临床分期、肿瘤直径及有无转移患者比较,差异有统计学意义,GPC3在临床分期晚、肿瘤直径大、分化程度低及远处有转移的患者肝癌组织中表达强度增高(P<0.05)。logistic回归分析显示,PHC患者肝癌组织中GPC3表达与临床分期、肿瘤直径、分化程度及远处有转移等因素紧切相关(OR=0.623~0.960,P<0.05)。结论 GPC3蛋白在肝癌组织中呈高表达状态,对于其病情的诊断及预后评估具有重要价值。 展开更多
关键词 肝细胞癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 基因表达
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血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3及高尔基体蛋白-73异常表达对肝癌的诊断价值 被引量:3
9
作者 曹风华 汪顺才 +6 位作者 马洁 朱梦琪 马久明 周华 虞腊青 陈明泉 经继生 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期393-397,共5页
目的 :探究肝组织及外周血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(phosphatidylinositol proteinglycan 3,GPC3)及高尔基体糖蛋白-73(Golgi protein 73,GP73)高表达对肝癌的诊断价值。方法 :用ELISA法检测39例肝癌患者及31例肝硬化患者外周血GPC3... 目的 :探究肝组织及外周血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(phosphatidylinositol proteinglycan 3,GPC3)及高尔基体糖蛋白-73(Golgi protein 73,GP73)高表达对肝癌的诊断价值。方法 :用ELISA法检测39例肝癌患者及31例肝硬化患者外周血GPC3及GP73浓度,RT-PCR法检测两组患者肝组织中GPC3 m RNA及GP73 m RNA表达水平,比较研究肝癌及肝硬化患者外周血、肝组织中GPC3及GP73的表达差异,分层分析此两种蛋白表达与肝癌不同临床分期、病理分级的相关性。结果:肝癌组外周血GPC3、GP73浓度分别为(16.81±0.56)μg/L、(115.92±7.01)ng/ml,肝硬化组外周血GPC3、GP73浓度分别为(7.41±0.25)μg/L、(64.63±3.07)ng/ml,肝癌组外周血GPC3、GP73浓度均显著高于肝硬化组(P〈0.001)。GPC3值为9.3μg/L时诊断肝癌的灵敏度和特异度分别为89.74%和96.77%,阳性预测值97.20%,阴性预测值88.20%;GP73截断值为77.68 ng/ml时,其诊断肝癌的灵敏度92.31%,特异度83.87%,阳性预测值87.80%,阴性预测值89.70%。肝癌组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为8.91±3.70、68.41±32.86,肝硬化组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为3.04±0.58、2.32±0.25,肝癌组GPC3 m RNA、GP73 m RNA表达均高于肝硬化组(P均〈0.05)。上述结果可知肝癌患者癌组织GPC3、GP73 m RNA表达水平与外周血相应蛋白浓度一致。肝癌患者中外周血GP73、GPC3蛋白浓度及组织m RNA表达水平与年龄、性别、肿瘤大小及肝癌临床分期间无统计学意义;而肝癌患者GPC3表达与病理分级间存在统计学差异,病理分级为3级的肝癌患者GPC3表达水平低于1-2级患者。结论:GP73、GPC3在肝癌患者中表达明显增高,且灵敏度高于AFP,而特异度与其相当,有望成为一种新的、较好早期诊断HCC的血清标志物;另外,GPC3表达对肝癌细胞的分化程度有一定的指示作用。 展开更多
关键词 血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3) 高尔基体糖蛋白-73(GP73) 肿瘤标志物 肝癌
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靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3治疗肝细胞癌的临床应用前景 被引量:3
10
作者 李程 张惠文 容鹏飞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期153-160,共8页
磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)是一种锚附着在细胞膜表面的癌胚蛋白质,在肝细胞癌中过表达。GPC3可以作为肝细胞癌的生物标志物,肝癌病人的血清GPC3水平对于预后评估存在重要价值。此外,肝癌细胞中GPC3具有免疫反应性,可以作... 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)是一种锚附着在细胞膜表面的癌胚蛋白质,在肝细胞癌中过表达。GPC3可以作为肝细胞癌的生物标志物,肝癌病人的血清GPC3水平对于预后评估存在重要价值。此外,肝癌细胞中GPC3具有免疫反应性,可以作为治疗靶点,有关靶向GPC3治疗肝细胞癌的临床试验已经展开。本文简述了GPC3的结构及其在肝细胞癌发生发展中的作用,回顾了靶向GPC3治疗肝细胞癌的临床研究结果,并总结了GPC3相关临床应用的最新进展:新的抗GPC3抗体正在研发,它们与其它靶向药物联用的临床试验正在展开;有关GPC3靶向的TRAB、GPC3疫苗和GPC3基于嵌合抗原受体(CAR)-T疗法的研究正在进行。我们认为,靶向GPC3治疗肝细胞癌的方案具有广阔的临床应用前景,期待更多的研究聚焦于此,为靶向GPC3疗法提供更充分的科学依据。 展开更多
关键词 肝细胞癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 靶向治疗 T细胞重定向抗体 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法
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GPC3在卵巢透明细胞腺癌中的表达及临床意义 被引量:1
11
作者 李雪洁 李红霞 +3 位作者 李霄 宋国新 张炜明 张智弘 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期631-637,共7页
目的 :探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)在卵巢透明细胞腺癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组织化学方法分别检测83例卵巢癌组织(透明细胞腺癌45例、浆液性癌20例、黏液性癌18例)、20例浆液性囊腺瘤及20例正常卵巢... 目的 :探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)在卵巢透明细胞腺癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组织化学方法分别检测83例卵巢癌组织(透明细胞腺癌45例、浆液性癌20例、黏液性癌18例)、20例浆液性囊腺瘤及20例正常卵巢组织中GPC3蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测38例卵巢癌组织(透明细胞腺癌20例、浆液性癌10例、黏液性癌8例)、5例浆液性囊腺瘤和5例正常卵巢组织中m RNA的表达情况,并分析GPC3与卵巢透明细胞腺癌临床病理学参数及预后的相关性。结果:1卵巢透明细胞腺癌中GPC3蛋白阳性表达率和m RNA表达量(82.2%;1.326 1±0.493 6)均明显高于浆液性癌(20%;0.426 5±0.029 4)、黏液性癌(5%;0.265 2±0.103 9)、浆液性囊腺瘤(0%;0.141 3±0.011 3)、正常卵巢组织(0%;0.291 4±0.048 1),差异有统计学意义(P均〈0.01);2GPC3蛋白阳性表达率及GPC3 m RNA表达量与卵巢透明细胞腺癌的临床分期有相关性,Ⅲ-Ⅳ期患者中的表达(100%;1.808 1±0.265 7)显著高于Ⅰ-Ⅱ期患者(71.4%;1.045 8±0.403 6)(P值〈0.01);3卵巢透明细胞腺癌铂类药物耐药患者GPC3蛋白阳性表达率及m RNA表达量(100%;1.808 1±0.265 7)均高于铂类药物敏感型患者(70.3%;0.991 8±0.330 3)(P〈0.05);4GPC3蛋白阳性表达率与卵巢透明细胞腺癌患者的预后相关,预后差的患者中阳性率及表达量高,差异有统计学意义(P〈0.05),Kaplan-Meier单因素生存分析亦显示GPC3蛋白为影响预后的因素(P=0.048);5卵巢透明细胞腺癌中GPC3蛋白阳性表达率和m RNA表达量与患者的淋巴结转移和远处器官转移无相关性(P〉0.05)。结论 :GPC3在病理鉴别诊断中有重要意义,GPC3与卵巢透明细胞腺癌患者的临床分期和铂类耐药相关,提示其可能在卵巢透明细胞腺癌的发生发展起重要作用,有望成为卵巢透明细胞腺癌的预后指标和潜在治疗靶标。 展开更多
关键词 卵巢透明细胞腺癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 免疫组织化学 实时荧光定量PCR 预后分析
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GPC3在人胃癌中的表达及促瘤机制初探 被引量:1
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作者 吕龙 陈功 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第5期620-623,共4页
目的:研究GPC3基因在人胃癌中的表达,并结合wnt-β-catenin的表达研究其相关性,进一步研究GPC3的促瘤效应及其机制。方法:荧光定量PCR及免疫组织化学检测GPC3及wnt-β-catenin通路在人胃癌中的激活情况,胃癌细胞系SGC-7901体外研究GPC3... 目的:研究GPC3基因在人胃癌中的表达,并结合wnt-β-catenin的表达研究其相关性,进一步研究GPC3的促瘤效应及其机制。方法:荧光定量PCR及免疫组织化学检测GPC3及wnt-β-catenin通路在人胃癌中的激活情况,胃癌细胞系SGC-7901体外研究GPC3体外促瘤效应。分别采用MTS及Annexin-PI共染法检测GPC3的促增殖抗凋亡效应。Western blot检测wnt-β-catenin信号通路的激活及下游基因的表达。结果:与癌旁正常胃组织相比,GPC3在人胃癌组织中高表达,且其表达与wnt-β-catenin信号通路呈正比。体外研究发现GPC3能够促进胃癌细胞的增殖,降低胃癌细胞的凋亡率,而其机制在于GPC3能够激活wnt-β-catenin通路及下游促癌基因。结论:GPC3基因在人胃癌组织中高表达,并通过激活wnt-β-catenin通路发挥癌基因生物学效应。 展开更多
关键词 gpc3 β - CATENIN 胃癌
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血清GPC3联合AFP检测在HCC中的临床意义
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作者 王攀 万卫昌 李招云 《医学研究杂志》 2012年第5期59-61,共3页
目的探讨血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和甲胎蛋白(AFP)在肝细胞癌(HCC)患者中的临床意义。方法采用ELISA法检测血清GPC3和血清AFP,分析72例HCC患者、58例肝良性病变组和40例健康组血清GPC3和AFP水平。结果 HCC患者血清GPC3和AFP水平... 目的探讨血清磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)和甲胎蛋白(AFP)在肝细胞癌(HCC)患者中的临床意义。方法采用ELISA法检测血清GPC3和血清AFP,分析72例HCC患者、58例肝良性病变组和40例健康组血清GPC3和AFP水平。结果 HCC患者血清GPC3和AFP水平显著高于肝良性病变组和健康组(P<0.05);肝良性病变组和健康组中表达无统计学意义(P>0.05)。两者表达与肿瘤大小、是否侵袭和病理分级有关(P<0.05);年龄、性别、有无HbsAg感染和包膜与两者表达无关(P>0.05)。单项检测灵敏度、准确度较低;联合检测灵敏度达84.7%,准确度达90.1%;两者在HCC中表达未存在直接关联(P>0.05)。结论联合检测血清GPC3和AFP水平有助于HCC的早期临床诊断。 展开更多
关键词 肝细胞癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3) AFP
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抗GPC3单链抗体细菌外膜囊泡的制备及其肝细胞癌靶向性的鉴定
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作者 杨邦亚 邓雨霏 +2 位作者 马官荣 方廖琼 白晋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2258-2269,共12页
本研究旨在制备抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)单链抗体的细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs),分析其在体内外对Hep G2肝癌细胞及组织的靶向效果。通过合成Hbp-h GC 33-sc Fv基因并连接至p ET28a表达载体,构建重组... 本研究旨在制备抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)单链抗体的细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs),分析其在体内外对Hep G2肝癌细胞及组织的靶向效果。通过合成Hbp-h GC 33-sc Fv基因并连接至p ET28a表达载体,构建重组表达质粒p ET28a-Hbp-h GC 33-sc Fv;采用免疫印迹法检测原核表达的融合蛋白Hbp-h GC 33-sc Fv,确定其最适诱导条件;采用超滤浓缩法收集重组表达菌株分泌的外膜囊泡(Hbp-h GC 33-OMVs)并进行表征;采用免疫电镜技术分析Hbp-h GC 33-sc Fv在细菌及Hbp-h GC 33-OMVs的定位情况;采用免疫荧光法观察其与Hep G2细胞的结合效果。建立Hep G2荷瘤小鼠模型,通过活体荧光成像系统观察Hbp-h GC 33-OMVs在小鼠肿瘤部位的靶向滞留情况。结果显示,融合蛋白的实际分子量为175.3 k Da,最佳诱导条件为在OD600=0.5时加入0.5 mmol/L IPTG于16℃低温诱导过夜。Hbp-h GC 33-OMVs平均粒径为(112.3±4.6) nm,具有不规则球形结构,表达外膜囊泡标记蛋白Omp C、Omp A和融合蛋白Hbp-h GC 33-sc Fv。与野生型wt OMVs相比,Hbp-h GC 33-OMVs组对Hep G2细胞的结合效果更强(P=0.008)。活体成像显示,Hbp-h GC 33-OMVs组能快速精准地靶向肿瘤部位。抗GPC3单链抗体细菌外膜囊泡的成功制备为肝细胞癌的特异性靶向治疗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 单链抗体 细菌外膜囊泡 肝细胞癌 靶向治疗
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靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3的嵌合体抗原受体慢病毒载体构建及病毒包装滴定的实验研究
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作者 胡想金 王赛仑 +3 位作者 郭佳 高耀 谭炳琴 闾军 《北京医学》 CAS 2021年第9期905-909,共5页
目的构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的慢病毒载体,并进行慢病毒载体的鉴定、包装及病毒滴度测定。方法设计靶向GPC3抗原的嵌合性抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)分子重组基因及特异性引物,用聚合酶链反应(polym... 目的构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)的慢病毒载体,并进行慢病毒载体的鉴定、包装及病毒滴度测定。方法设计靶向GPC3抗原的嵌合性抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)分子重组基因及特异性引物,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对CAR分子重组基因进行体外扩增及PCR反应片段搭桥,双酶切后定向插入到pCDH质粒,构建pCDH-anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,经菌落PCR、DNA凝胶电泳及测序鉴定。将目的质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集上清液按不同比例稀释后感染293T细胞,流式细胞术检测anti-GPC3-CAR表达并计算病毒滴度。结果经菌落PCR及测序证实,正确构建重组慢病毒载体pCDH-anti-GPC3-CAR,包装后的病毒滴度为(1.50~3.24)×10^(6)TU/ml。结论本研究成功构建携带不同共刺激分子的pCDH-anti-GPC3-CAR慢病毒表达载体,可在293T细胞中表达并产毒,为后续构建CAR免疫细胞提供技术储备。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 嵌合抗原受体 免疫治疗 原发性肝癌
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Caspase-3及Gpc1的表达对神经胶质瘤细胞增殖的影响及其机制研究 被引量:7
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作者 陈斯泽 张威 +2 位作者 钟德泉 陈光忠 陈雪梅 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期553-557,共5页
目的 研究凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3及Glypicante1 (Gpc1)的表达对神经胶质瘤细胞增殖能力的影响及其可能机制. 方法 取广东省人民医院神经外科自2011年1月至2011年12月手术切除的52例胶质瘤标本和同期因脑外伤行颅内... 目的 研究凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3及Glypicante1 (Gpc1)的表达对神经胶质瘤细胞增殖能力的影响及其可能机制. 方法 取广东省人民医院神经外科自2011年1月至2011年12月手术切除的52例胶质瘤标本和同期因脑外伤行颅内减压术的13例患者的正常脑组织标本,免疫组化染色检测标本中Caspase-3和Gpc1的表达;体外常规培养人神经胶质瘤A172细胞株,构建peDNA3.1/Gpc1高表达质粒,Luciferase双荧光素酶报告基因试剂盒检测0.5、1、2、4 μg peDNA3.1/Gpc1高表达质粒转染A172细胞后Hedgehog (Hh)信号通路活性的变化;用siRNA-Gpc1干扰质粒转染A172细胞沉默Gpc1的表达,再使用8μg/mL抗生素杀稻瘟菌素S处理细胞24h(实验组),以加入等量溶剂的正常A172细胞作为对照组,免疫组化染色检测2组细胞CyclinD1的表达,噻唑蓝(MTT)检测转染后24、48、72和96h2组细胞的增殖活力. 结果 神经胶质瘤组织Caspase-3、Gpc1表达阳性率均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05),神经胶质瘤标本中Caspase-3与Gpc1的表达呈正相关关系(r=0.486,P=0.000);与对照组比较,0.5、1、2、4μg peDNA3.1/Gpc1高表达质粒组细胞荧光强度增加,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化染色显示沉默Gpc1的表达后A172细胞Hh通路中靶基因CyclinD1的表达低于正常A172细胞.MTT检测显示沉默Gpc1的表达后48、72、96h A172细胞株的增殖活力均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 Caspase-3与Gpc1蛋白的表达异常在神经胶质瘤细胞增殖中起重要作用,可能与Hh信号通路的介导有关. 展开更多
关键词 蛋白半胱氨酸蛋白酶-3 gpc1 神经胶质瘤 增殖
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强抗原决定簇hAFP542-550在真核细胞膜定位表达研究 被引量:2
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作者 羊东晔 李彩虹 +4 位作者 蓝方 张扬清 卢放根 杨峥嵘 黄来强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期592-595,599,共5页
目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、EGFP和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP,确定其定位表达在真核细胞膜上,以强化靶细胞的免疫原性。方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA... 目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、EGFP和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP,确定其定位表达在真核细胞膜上,以强化靶细胞的免疫原性。方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA中调取GPC3基因,化学合成基因片段-KOZAK-GPCN+afp542-550-,并从pEG-FP-N1质粒中扩增EGFP基因,三者嵌合构建融合蛋白的表达质粒pcDNA3.1(+)/GPCN+afp542-550-EGFP-GPCC(pG-PC3-EGFP);②以Lipofectamine 2000转染质粒pGPC3-EGFP入肝癌细胞株HepG2(GPC3+AFP+),转染后24h和48h引物GPCN-F和EGFP-rRT-PCR及Western blot检测融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达;③对照质粒pEGFP-N1和pG-PC3-EGFP转染HepG2,荧光显微镜观察比较两种质粒EGFP蛋白表达的部位;pGPC3-EGFP转染人胚肾HEK293细胞(GPC3-AFP-),提取细胞膜蛋白和可溶蛋白Westernblot检测融合蛋白表达。结果:①成功构建pGPC3-EGFP质粒;②融合蛋白可在HepG2中表达;③与pEGFP-N1不同,融合蛋白主要在胞膜上出现荧光反应,胞质内仅见散在零星荧光;转染后HEK293细胞的膜蛋白中检测到融合蛋白表达,而可溶蛋白中未检出。结论:pGPC3-EGFP可以在真核细胞中表达,表达的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP仍然定位表达在细胞膜,是一种新型GPI再锚定蛋白。 展开更多
关键词 人AFP542-550 glypican3 增强绿色荧光蛋白EG-FP 真核细胞 蛋白质工程
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天蚕壮阳散对肾阳虚证小鼠附睾精子膜GPC含量的影响 被引量:2
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作者 刘朝圣 曾顺 《中国民间疗法》 2010年第9期58-59,共2页
关键词 精子膜 天蚕壮阳散 附睾 肾阳虚证 gpc 甘油-3-磷酸胆碱 精子成熟 小鼠
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GPC3基因对人肝癌细胞SK-Hep-1生物学行为的影响
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作者 王冰 林山 王烈 《福州总医院学报》 2010年第1期19-20,9,7,共4页
目的:利用构建好的GPC3真核表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察转染前后肝癌细胞增殖、黏附、运动及... 目的:利用构建好的GPC3真核表达载体,研究其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法:将pEGFP-N2-GPC3增强型绿色荧光蛋白表达载体通过脂质体方法转入SK-Hep-1人肝癌细胞,确定GPC3已经成功转入细胞后,观察转染前后肝癌细胞增殖、黏附、运动及体外侵袭能力的改变,并观察四种生长因子FGF2、IGF2、BMP4、TGFβ1对GPC3抑制细胞增殖的影响。结果:GPC3抑制SK-Hep-1的增殖,降低对Matrigel胶的黏附能力,增加SK-Hep-1的迁移及侵袭能力,GPC3抑制FGF2对SK-Hep-1细胞的增殖效应,而对其他三种生长因子IGF2、BMP4、TGFβ1无此作用。结论:GPC3真核表达载体可抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖,但可降低其对Matrigel胶的黏附能力,增加其迁移及侵袭能力,GPC3可能通过抑制FGF2信号途径来抑制肝癌细胞细胞的增殖。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3) SK—Hep-1肝癌细胞 侵袭 生长因子
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抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗体定点偶联药物的制备及其抗肿瘤活性评价
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作者 孙召朋 沈明月 +7 位作者 唐昭娜 袁灿 王欣 彭秀娥 王翠 惠希武 刘伯宁 姚兵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1192-1197,共6页
目的通过杂交瘤技术获得抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)单克隆抗体,并制备抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC),评价ADC的抗肿瘤活性。方法采用免疫雄性BALB/c小鼠的方式获得高亲和力抗GPC3单克隆抗体,采用ELISA、流式... 目的通过杂交瘤技术获得抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)单克隆抗体,并制备抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC),评价ADC的抗肿瘤活性。方法采用免疫雄性BALB/c小鼠的方式获得高亲和力抗GPC3单克隆抗体,采用ELISA、流式细胞术检测抗体对抗原的亲和力及在肿瘤细胞的内吞率;并通过定点偶联技术获得DAR(drug-to-antibody ratio)为2的ADC药物,细胞杀伤试验检测其对肝癌细胞HepG2和Hep3b的增殖抑制效果。结果抗体16C8-8E6在蛋白水平有很高的亲和力,EC_(50)为2.51 ng/mL,细胞水平(高表达GPC3的稳转株4E1、Hep3b、HepG2)亲和力明显高于原研抗体GC33(t分别为14.9、13.0和12.9,P均<0.05),在高表达GPC3的稳转株4E1的荧光强度为20542±107;内吞率优于原研抗体GC33,48 h内吞率达73.9%。16C8-8E6-ADC对肝癌细胞HepG2和Hep3b有一定的抑制增殖活性。结论成功获得靶向GPC3的单克隆抗体,为靶向GPC3的免疫疗法研究奠定了基础。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 免疫偶联药物 单克隆抗体 肝癌 肿瘤
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