GNRHRI、GF-1基因对文昌鸡繁殖性状的遗传效应分析

以控制文昌鸡繁殖性状的促性腺激素释放激素受体基因(GNRHR)和胰岛素样生长因子-1基因(IGF-1)为候选基因,采用PCR-RFLP技术检测GNRHR基因和IGF-1基因在文昌鸡中的单核苷酸多态性(SNP),同时对这2个基因与文昌鸡繁殖性状的相关性进行了研究。结果表明,GNRHR基因内含子1的537 bp位置有C→T碱基的变异,在文昌鸡中检测到AA、Aa、aa 3种基因型,A等位基因的频率为0.69,a等位基因的频率为0.31;在IGF-1基因5′非翻译区(5′UTR)发现C→T碱基的变异,改变了限制性内切酶PstI识别位点,经PCR-RFLP分析,在文昌鸡中检测到BB、Bb、bb 3种基因型,B等位基因的频率为0.53,b等位基因的频率为0.47。对其基因型与所检测个体相应的繁殖性状采用GLM分析进行遗传效应研究,结果表明,GNRHR基因对300日龄产蛋数、400日龄产蛋数有显著影响(显性作用),IGF-1基因对300日龄产蛋数有显著影响(加性作用)。因此,推测GNRHR基因和IGF-1基因可能是影响鸡繁殖性状的主效基因或与主效基因紧密连锁的标记基因,并且能够在分子标记辅助选择中用于对鸡繁殖性状的遗传改良和固定。

促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因多态性及其与山羊产羔数的相关性分析

本研究采用候选基因法对与繁殖性能有关的遗传标记进行筛选,旨在为山羊高产仔数的标记辅助选择提供确切的遗传依据。参考牛的促性腺激素释放激素受体(Gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因序列设计4对引物,采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测GnRHR基因在波尔山羊以及我国西南地区9个地方山羊品种中的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP),同时在川东白山羊、古蔺马羊和贵州白山羊3个群体中研究该基因多态性与山羊产仔数之间的相关性。结果显示,4对引物中只有引物P1扩增片段检测出多态性。对于P1的扩增片段,在不同的山羊品种中检测到AA、GG和AG 3种基因型,测序分析表明GG与AA型相比有一处单碱基突变(154G→A)。AA基因型个体在3个群体中产羔数最小二乘均值都显著高于GG和AG基因型个体(P<0.05),GA基因型个体在古蔺马羊中的产羔数显著高于GG型个体(P<0.05),而在其它2个品种中差异不显著(P>0.05)。本研究结果初步表明山羊GnRHR基因的突变与其繁殖性能有关,可能是影响山羊繁殖率的一个因素。

环磷酰胺对成年大鼠卵巢的损伤以及GnRHR在卵巢的表达

目的探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制。方法将成年SD大鼠分为2组:生理盐水组和环磷酰胺组。大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目;免疫组化法检测GnRHR在卵巢的表达。RT-PCR法检测对侧卵巢GnRHR mRNA的表达。结果环磷酰胺可引起卵巢皮质区原始卵泡发生大量丢失,卵巢间质严重损害,血管发生特征性病理改变;局部发生纤维化。GnRHR mRNA和蛋白质可表达于大鼠卵巢。与对照组相比,环磷酰胺组颗粒细胞GnRHR蛋白表达减少;化疗组GnRHR mRNA表达量低于对照组(P<0.05)。结论GnRHR在化疗卵巢较低水平的表达,提示化疗晚期卵巢局部微环境的紊乱。

GnRHR基因多态性与崂山奶山羊产羔数的关联分析

为阐明GnRHR基因的多态性与崂山奶山羊产羔数的关系,设计7对引物,采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术检测GnRHR基因在不同产羔数崂山奶山羊的单核苷酸多态性,并分析其与产羔数的关系。结果显示:该基因存在2个多态位点,A261G突变对于初产母羊GA型产羔数比AA型多0.06只,比GG型多0.04只,差异不显著(P>0.05);对于经产母羊GA型产羔数比AA型多0.35只,差异显著(P<0.05),比GG型多0.45只,差异不显著(P>0.05)。G55A位点共检测到GG和GA这2种基因型,其中对于初产母羊GG型比GA型产羔数多0.13只,经产母羊GG型比GA型产羔数多0.19只,但差异均不显著(P>0.05)。因此,GnRHR基因A261G突变位点可能是影响崂山奶山羊产羔性能一个潜在的有效分子标记。

京海黄鸡GnRHR基因克隆、生物信息学及组织表达分析

旨在根据GenBank上公布的原鸡GnRHR基因序列设计2对引物,采用RT-PCR方法,从京海黄鸡肌肉组织中克隆GnRHR基因的编码区序列,并使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析GnRHR基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因编码蛋白的二级结构、三级结构等。同时为GnRHR基因和β-actin基因各设计1对引物,采用RT-qPCR的方法研究GnRHR基因在京海黄鸡12个组织和器官中的表达情况。最终成功克隆了京海黄鸡GnRHR基因完整的编码区序列和部分侧翼序列,Blast结果显示,京海黄鸡GnRHR基因与原鸡、番鸭、藏羚羊、野猪、马、小鼠、大鼠、家兔、绵羊、人、牛、黑猩猩和斑马鱼的同源性分别为99.7%,86.7%,55.7%,54.6%,52%,51.6%,50.8%,50%,49.9%,49.6%,49.4%,47.4%和39.3%,并成功构建系统发育树。蛋白质结构分析显示,GnRHR蛋白分子量为45.432 kDa,理论等电点为9.55,包含20种氨基酸,其中,亮氨酸含量最高,占13.8%,赖氨酸含量最低,占0.7%;不稳定系数为65.35,显示该蛋白不稳定;脂溶指数为95.54,总平均疏水指数为0.312,为非水溶性蛋白;该蛋白不属于分泌型蛋白,主要存在于胞膜上,没有信号肽结构,存在16个潜在磷酸化位点和11个糖基化位点;保守结构域分析显示存在2个低复杂度序列和7段跨膜结构,跨膜分析显示该蛋白为7次跨膜蛋白,二级结构预测结果显示,在GnRHR二级结构中,α-螺旋占29.83%,β-折叠占17.18%,无规则卷曲占52.98%,GnRHR蛋白三级结构为复杂的7次跨膜螺旋结构,且为单链蛋白。组织表达分析显示,GnRHR基因主要在垂体中高表达,表达量显著高于其他组织,在其他11个组织和器官中表达量较低。

文昌鸡GnRHR基因在不同组织中差异表达的研究

采用半定量RT-PCR方法检测文昌鸡处于性腺轴(下丘脑-垂体-性腺)的不同组织中GnRHR基因的表达水平,结果表明:GnRHR基因mRNA表达于鸡的3种组织——下丘脑、垂体和卵巢;GnRHR mRNA在3种组织中的表达量不同:下丘脑和垂体中表达量较高,卵巢中表达量较弱。

济宁青山羊生后发育阶段GnRH与GnRHR阳性细胞在下丘脑分布规律的研究

为研究济宁青山羊生后发育阶段GnRH及GnRHR在下丘脑内的形态学分布和变化规律,采用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(Strept Avidin Biotin-Peroxidase Complex,SABC)免疫组织化学方法,对0、2、4和6月龄雌性济宁青山羊下丘脑中GnRH及GnRHR的分布进行了同步研究。结果显示,GnRH和GnRHR免疫阳性细胞在下丘脑内广泛存在,主要分布于视前内侧区、乳头体、视上核和视交叉上核。随月龄增长,GnRH和GnRHR阳性细胞不断增大,数量不断增多,其中0～2月龄是最快的时期。结果提示,下丘脑分泌的GnRH及GnRHR对生后发育阶段青山羊性成熟的启动及维持有重要作用。

山羊GnRHR基因部分序列多态性及其与产羔数的关联性分析

采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,用3对引物鉴定了黄淮山羊和波尔山羊促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因外显子2和外显子1部分序列的多态性,并对黄淮山羊Gn-RHR基因多态性与产羔数的关联性进行了分析。结果表明,引物P1、P3扩增片段在2种山羊中均只检测到1种基因型,不存在多态性;而引物P2扩增片段,2种山羊类型均检测到AA、AB和BB基因型。黄淮山羊AA、AB和BB基因型频率分别为0.725、0.200和0.075;波尔山羊AA、AB和BB基因型频率分别为0.765、0.206和0.029。测序分析发现AA型基因与BB型基因相比在58bp处发生A→C碱基突变,该突变导致编码氨基酸由赖氨酸改变为谷氨酰胺。在黄淮山羊中,BB型比AA型个体平均产羔数多0.66只(P<0.05)。因此,山羊GnRHR基因第1外显子具有多态性;GnRHR基因可能是控制黄淮山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密连锁的一个遗传标记。

猪INHA与GnRHR基因型互作效应对产仔数的影响

利用不对称PCR-SSCP、PCR-SSCP、PCR-RFLP技术检测了INHA基因、GnRHR基因在大白猪、长白猪、宁乡猪、桃源猪、大围子猪、沙子岭猪、海南五指山猪中的多态性.结果表明,INHA基因外显子Ⅱ检测到2个突变位点,即外显子ⅡG262A位点和A852G位点.在GnRHR基因5′-UTR端310bp处有1个A→C的突变位点.分析INHA基因G262A与GnRHR基因A310C互作效应时发现,基因型的互作效应在大白猪中极显著(P<0.01),在长白猪中达到了显著水平(P<0.05).基因互作型效应最大的是AGDD基因互作型,最小的是GGEE基因互作型.分析INHA基因A852G与GnRHR基因A310C互作效应时发现,各基因型互作对总产仔数、产活仔数影响不显著(P﹥0.05).

半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)GnRHR基因全长cDNA的克隆与组织表达分析

采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)方法,克隆了半滑舌鳎中GnRHR全长cDNA。通过基因全长以及推断的氨基酸序列分析,得知该序列包含一个7tm-1保守结构域,为G蛋白偶联受体家族成员。利用PHYLIP3.5c邻位相连法以及DNAstar中的CLUSTALW方法对相应的氨基酸序列进行了聚类分析和序列相似度分析。结果表明,半滑舌鳎GnRHR与鲈鱼、琥珀鱼、虹鳟以及青鳉等鱼类中的GnRHR聚为一支,亲缘关系较近,且相似度较高,分别为90.1%、89.7%、79.0%以及78.3%,而与高等哺乳动物人、小鼠相似性仅分别为18.8%和16.2%,亲缘关系较远。应用半定量RT-PCR技术分析其组织表达,发现GnRHR广泛表达于各个组织,但表达量差异较大,在性腺、脑和肾中表达量较高,其它组织较弱。

GnRHR和Fas/FasL在胃癌组织中的表达及其临床意义

引言胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。促性腺激素释放激素（Gonadotropin releasing hormone,GnRH）是下丘脑神经内分泌细胞合成的十肽。近来研究发现人体的多种恶性肿瘤也能分泌GnRH.

高邮鸭与金定鸭GnRHR2基因组织表达差异分析

克隆鸭GnRHR基因序列,并研究其对产蛋性能的调节作用。采用RT-PCR技术从鸭生殖轴组织总RNA中克隆GnRHR基因cDNA序列,并利用Real-time PCR技术分析GnRHR基因在不同产蛋期高邮鸭和金定鸭生殖轴组织中的表达。序列分析结果表明克隆序列长度约500 bp,属II型GnRHR基因序列,与家鸡cGnRHR2序列的同源性为96%。金定鸭群体的开产日龄较高邮鸭群体早30 d,72周龄产蛋数比高邮鸭多83个。从产蛋早期至高峰期,GnRHR2基因在高邮鸭和金定鸭下丘脑、垂体中的表达量呈上调趋势,且高邮鸭的表达量显著高于金定鸭(P<0.05,P<0.01);而在卵巢中的表达量呈下调趋势,金定鸭卵巢组织中的表达量显著高于高邮鸭(P<0.01)。产蛋期前卵巢中GnRHR2基因的暂时性高表达可能有助于性成熟的启动,提早开产日龄;产蛋早期后下丘脑、垂体中GnRHR2基因的持续上调表达对产蛋高峰期的维持具有重要作用。

文昌鸡和隐性白羽肉鸡GnRHR基因及GHR基因多态性研究

为了研究GnRHR基因与GHR基因在文昌鸡和隐性白羽肉鸡群体中的遗传变异情况,运用连接酶检测反应(PCR-LDR)对GnRHR基因的537 bp位点与GHR基因的571 bp位点进行基因分型,并分析了该位点在群体中的基因型、基因频率和Hardy-Weinberg平衡情况以及与产蛋性能的关系。结果显示:GnRHR基因的537 bp位点在文昌鸡与隐性白羽肉鸡群体中仅检测到CC一种基因型,文昌鸡与隐性白羽肉鸡GnRHR基因型的频率(CC)和基因频率(C)均为1;GHR基因的571 bp位点在文昌鸡与隐性白羽肉鸡群体中仅检测到TT一种基因型,文昌鸡与隐性白羽肉鸡的GnRHR基因型频率(TT)和基因频率(T)均为1;且在这2点均处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。

GnRHR基因多态性与崂山奶山羊产羔数的关联分析

研究旨在阐明GnRHR基因的多态性与崂山奶山羊产羔数的关系。设计7对引物,采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术检测GnRHR基因在不同产羔数崂山奶山羊的单核苷酸多态性,并分析其与产羔数的关系。结果显示:该基因存在2个多态位点,A261G突变对于初产母羊GA型产羔数比AA型多0.06只,比GG型多0.04只,差异不显著(P>0.05);对于经产母羊GA型产羔数比AA型多0.35只,比GG型多0.45只,差异显著(P<0.05)。G55A位点共检测到GG和GA两种基因型,其中对于初产母羊GG型比GA型产羔数多0.13只,经产母羊GG型比GA型产羔数多0.19只,但差异均不显著(P>0.05)。因此,GnRHR基因A261G突变位点可能是影响崂山奶山羊产羔性能的一个潜在的有效分子标记。

乌湖杂交羊GnRHR与INHA基因多态性及其互作效应对产羔数的影响

试验旨在探究GnRHR和INHA基因遗传变异及其互作效应对绵羊产羔数的影响。参考GenBank发布的绵羊GnRHR基因(登录号:AH004943)和牛INHA基因(登录号:U16237)的DNA序列设计引物,采用PCR-SSCP技术检测GnRHR和INHA基因在乌湖羊、湖羊、乌骨绵羊中的遗传多态性,分析多态位点与产羔数的相关性,以及GnRHR和INHA基因间互作效应。结果显示,乌湖羊和湖羊群体GnRHR和INHA基因均存在多态位点,分别检测到GG、GC、CC和AA、AB、BB基因型,乌骨绵羊因样本较少,未发现多态位点。测序发现,GnRHR基因编码区198 bp处发生G→C突变,导致甘氨酸变为精氨酸,为错义突变;INHA基因877 bp处发生T→C突变,为同义突变(仍为天冬氨酸)。遗传学分析显示,GG和AA为优势基因型,G和A为优势等位基因;χ2适合性检验显示,试验羊群体GnRHR和INHA基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);分析GnRHR与INHA基因互作效应发现,基因互作效应在乌湖羊和湖羊群体差异显著(P<0.05),ABCC互作基因型互作效应最大,AAGG互作基因型互作效应最小。乌湖羊ABCC互作基因型的平均产羔数比AAGG互作基因型多1.68只,湖羊ABCC互作基因型产羔数比AAGG互作基因型多1.32只,ABCC互作基因型比AB和CC基因型的产羔数都高,表明互作效应与羊产羔数呈正相关。本研究认为,INHA基因T877C位点与GnRHR基因G198C位点互作基因型与绵羊产羔数紧密关联,对试验羊群体产羔数影响显著。

丙氨瑞林对子宫内膜增生中ER PR GnRHR的调节及对增生内膜转化作用的研究

目的研究丙氨瑞林对子宫内膜增生的治疗作用,以及对增生内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和促性腺激素释放激素受体(GnRHR)是否有调节作用。方法对诊刮确诊为子宫内膜增生150例患者随机分组,丙氨瑞林组(治疗组)肌肉注射丙氨瑞林150μg,qd,连续3月;炔诺酮组(对照组)口服炔诺酮5mg,qd,每月22天,持续3个月。观察用药前后子宫内膜的转化情况以及ER、PR、GnRHR的变化。结果丙氨瑞林组增生内膜的转化率为95.5%,炔诺酮组增生内膜的转化率为66.7%,两组转化率比较,P<0.05。两组用药前后ER、PR和GnRHR表达均无差异(P>0.05)。结论丙氨瑞林对3种子宫内膜增生均有转化作用,其中对单纯增生型子宫内膜的转化最好,并且丙氨瑞林治疗单纯增生型子宫内膜的疗效明显优于炔诺酮,但丙氨瑞林治疗子宫内膜增生3个月,对ER、PR和GnRHR无明显的调节作用。

甘肃肉羊新品种选育群GnRHR基因多态性及其与产羔性状关联分析

根据GenBank发布的绵羊促性腺激素释放激素受体(gonadotropin releasing hormone receptor,GnRHR)基因序列设计2对引物,采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析GnRHR基因外显子2和3在甘肃肉羊新品种选育群中的单核苷酸多态性,并与产羔性状进行关联分析。结果表明,在甘肃肉羊新品种选育群GnRHR基因外显子2检测到GG、GH、HH基因型,基因型频率分别为0.784(160)、0.206(42)0、.010(2),序列测序结果发现在编码区第198位碱基发生突变G→C,导致G变成R(甘氨酸→精氨酸)变化;GnRHR基因外显子3检测到MM、MN基因型,基因型频率分别为0.882(180)0、.118(24),序列测序结果发现在第257位碱基发生突变A→G,导致Q变成R(谷氨酰胺→精氨酸)。GnRHR基因外显子2突变对新品种群羊繁殖力高低影响极显著,突变纯合基因型(HH)绵羊平均产羔数比野生纯合型(GG)多0.981只(P=0.006<0.01);外显子3突变对新品种群羊繁殖力高低也有显著影响,MN基因型羊平均产羔数比MM基因型多0.688只(P=0.029<0.05)。由此可推测GnRHR基因可能是控制新品种群羊产羔性能的一个主效基因或是与之存在紧密连锁的一个遗传标记。

GnRHR与EGFR在原发性肝癌组织中表达及意义

目的研究促性激素释放激素受体(GnRHR)和表皮生长因子受体(EGFR)在原发性肝癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化SP及原位定量法,对30例原发性肝癌组织中GnRHR、EGFR的表达进行检测及半定量分析。结果在原发性肝癌各种不同分化的癌组织均显示不同程度的GnRHR和EGFR阳性免疫反应,原位定量显示GnRHR表达阳性27例(90.00%),EGFR表达阳性15例(50.00%),原位定量显示GnRHR的表达高分化13例、中分化9例、低分化5例,随着组织分化程度增高而增高,EGFR的表达高分化3例、中分化5例、低分化7例,随着组织分化程度增高而降低(P<0.05),并且GnRHR较EGFR阳性免疫反应强。结论 GnRHR与EGFR的表达量可能与原发性肝癌的发生及发展有关。

高邮鸭GNRHR基因克隆及卵巢中mRNA表达分析

为了探究GNRHR基因在双黄蛋形成过程中的作用,本研究以高邮鸭为试验素材,应用克隆测序技术获得了高邮鸭促性腺激素释放激素(GNRHR)基因的全序列,并分析该基因的结构;采用荧光定量技术检测258日龄和330日龄高、低产双黄蛋鸭卵巢组织GNRHR基因mRNA的表达量,并分析了两者之间的差异。结果表明,鸭GNRHR基因序列全长为1 944 bp,共有3个外显子和2个内含子;258日龄和330日龄,高产双黄蛋鸭卵巢GNRHR基因mRNA的表达量高于低产双黄蛋鸭的表达量(P<0.05)。

地黄菟丝调经颗粒对环磷酰胺致POF大鼠GnRHR蛋白表达的影响

目的:观察地黄菟丝调经颗粒(DHTXTJ颗粒)对卵巢早衰模型大鼠促性腺激素释放激素受体(GnRHR)蛋白表达的影响,探讨DHTXTJ颗粒治疗卵巢早衰(POF)的机制。方法:采用一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX)60mg/kg的方法制造POF大鼠模型,实验设空白组、模型组、戊酸雌二醇组、DHTXTJ颗粒预防组、DHTXTJ颗粒组,共5组,灌胃给药8周后,光镜下观察卵巢形态学改变;采用化学发光法检测大鼠血清雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH);免疫组织化学法检测GnRHR蛋白表达。结果:DHTXTJ颗粒可使大鼠卵巢生长期卵泡和黄体数量增多,闭锁卵泡数量减少,发育成熟卵泡增多,卵巢间质淋巴细胞浸润减少。DHTXTJ颗粒能够降低FSH水平,升高E2水平(P<0.05),预防组优于西药组(P<0.05);与西药组比较,DHTXTJ颗粒预防组能明显上调颗粒细胞GnRHR蛋白的表达(P<0.05)。结论:DHTXTJ颗粒能减轻CTX对卵巢的损伤,其机制可能是通过促进各级卵泡发育,调节雌激素的分泌,调节颗粒细胞GnRHR蛋白表达来实现的。