GICA检测高致病性禽流感抗体方法的建立

〔目的〕 建立可快速、简便地检测微量禽流感的抗体的方法。〔方法〕 利用灭活的高致病性禽流感病毒H5N1建立禽流感病毒浓缩纯化样品体系,获得大量纯度较高的禽流感病毒(1:5 12 )。将2 .80mg/mL纯化病毒与一定大小的胶体金颗粒偶联,吸附在玻璃纤维上,制作的高致病性禽流感病毒抗体胶体金检测试纸条,用于高致病性禽流感定量(合格)检测。〔结果〕 显色反应良好,条带稳定,检测获得成功。〔结论〕 其反应特异性、敏感性、重复性良好,具备微量、快速、简便的特点,适合于进出境现场检疫和疫情普查。

胶体金免疫层析法高通量测定动物肌肉组织中多兽药残留

[目的]本文旨在建立一种胶体金免疫层析技术高通量测定猪肉、鸡肉组织中8种磺胺类、3种四环素类、2种喹诺酮类和甲氧苄啶药物残留的方法。[方法]动物肌肉组织中磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶经磷酸缓冲液提取,并经含Tween 20的磷酸缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体与硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。[结果]本试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、Tween 20添加量和冻干保护剂种类等关键因素,磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶等药物的检出限分别为50、100、50、35μg·kg^(-1),灵敏度≥97%,假阳性率≤2%,假阴性率≤3%,且与现有标准方法检测结果一致。[结论]该方法操作简便,灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

胶体金免疫层析法同步快速测定畜禽肉中3种兽药残留

该文旨在建立一种胶体金免疫层析技术同步测定猪肉和鸡肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素药物残留的方法。动物肌肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素经酸化、衍生化及乙酸乙酯提取,并经含吐温-20的Tris-HCl缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、吐温-20添加量、衍生化试剂浓度和冻干保护剂种类等关键因素,并对检测卡的灵敏度、特异性和稳定性进行检测。结果显示,所建立的免疫层析方法可在35 min内检出猪肉和鸡肉中呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢物和氯霉素药物,检出限分别为0.5、0.5、0.1μg/kg,灵敏度≥98%,假阳性率≤2%,假阴性率≤2%,稳定性可达到1年,且与现有标准方法检测结果一致。该方法操作简便、特异性强、灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

四种检测泌尿生殖道沙眼衣原体方法的比较与评价

目的对胶体金免疫层析、酶免疫(EIA)、直接荧光抗体测定(DFA)和细胞培养四种检测泌尿生殖道沙眼衣原体的方法进行比较与评价。方法分别应用胶体金,EIA,DFA和细胞培养四种方法检测不同稀释倍数的沙眼衣原体E型标准株。35例临床疑为泌尿生殖道沙眼衣原体感染患者的宫颈或尿道拭子分别应用胶体金,EIA,DFA进行检测。结果能测出沙眼衣原体E型标准株为阳性的最大稀释倍数在胶体金,EIA,DFA和细胞培养法中分别为:104,106,108和104倍;35例临床标本的阳性率在胶体金,EIA和DFA法中分别为:11.43%,25.71%和40.00%,胶体金和DFA法之间差异有统计学意义(P<0.05),敏感性最高的为DFA法。结论 DFA法检测泌尿生殖道沙眼衣原体的敏感性较胶体金、EIA和细胞培养方法高,临床上可提倡应用。

免疫层析技术和化学发光法免疫分析法在梅毒检测中的效果比较

目的:考察全自动微粒子化学发光免疫实验(CMIA)与免疫层析技术(GICA)在梅毒检测中的应用效果差异。方法:采用TPPA法作为金标准检测1500例住院患者血清标准,评价CMIA与GICA在梅毒检测中敏感性和特异性。结果:金标准中1500例血清标本梅毒检出率为12.1%,CMIA阳性检出率为12.5%,GICA为12.7%。CMIA法灵敏度为92.86%,特异性为98.,6%,阳性预测值为89.89%,阴性预测值为99.01%。GICA法灵敏度为98.35%,特异性为99.77%,阳性预测值为98.35%,阴性预测值为99.77%。两组间灵敏度和阴性预测值存在显著差异(P<0.05)。结论:GICA的灵敏性和阴性预测值优于GICA法,可以提到TPPA成为梅毒检测的血清学检测首选方法。

高致病性猪蓝耳病免疫金标试纸条的研制与应用

本试验利用柠檬酸三钠还原法制备粒径约为40 nm的胶体金,在玻璃纤维和硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷上胶体金PRRSV多克隆抗体、HP-PRRSV单克隆抗体和羊抗鼠IgG二抗。本试验组装的免疫胶体金诊断试纸条具备良好的敏感性和较高的特异性,最低病毒检测限为100TCID50;只对高致病性猪蓝耳病呈阳性反应,对PRRSV(ATCC VR2332)有弱反应,对猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒均无反应。重复性试验表明,所研制的试纸条结果重复性较强,4℃条件下至少可保存半年。应用该试纸条对60份临床样品检测,同时与高致病性蓝耳病RT—PCR诊断试剂盒的方法进行符合性比较验证,结果显示两种方法检测结果的符合率达91%(10/11),证明本研究制备的高致病性猪蓝耳病抗原免疫金标试纸条是快速便捷的检测高致病性猪蓝耳病的新型检测技术。

胶体金免疫层析法测定HBsAg同时判定HBeAg结果

目的 在金标 HBs Ag测定的商品试纸条上 ,尝试一种可同时获得 HBs Ag和 HBe Ag两项检验结果的方法。方法 收集 40 0份乙肝患者血清标本 ,采用四种商品金标 HBs Ag检测试纸条在检测 HBs Ag的同时 ,根据阳性反应和对照两条色带特异变化直接判定是否存在 HBe Ag,并与 EIA“两对半”测定结果进行比较。结果 HBe Ag检出率为 99.2 % ,符合率为 96.7%。结论 采用一种 HBs Ag金标试纸既可进行 HBs Ag的急诊检验 ,又能立即判定 HBe Ag的结果。方法简便、快速、经济适用、结果可靠 ,颇有实用价值。

胶体金免疫层析捕获法检测人血清中肺炎支原体IgM抗体

采用胶体金标记鼠抗人IgMμ链抗体,肺炎支原体P1抗原作包被蛋白,检测肺炎支原体特异性抗体IgM.经对免疫金制备条件进行优化,制备了胶体金免疫层析检测试纸条.将该试纸条与市售试剂盒作对比检测,总符合率为99.17%,表明本方法灵敏度较高、特异性较强,价格低,操作简便快捷,更适合MP感染患者早期临床筛查.

快速胶体金免疫层析法在疟原虫感染诊断中的应用

目的探讨快速胶体金免疫层析法(GICA)在疟原虫感染诊断中的应用价值。方法以传统的血涂片法为金标准,以抗疟药治疗有效性作为回顾性诊断依据,分析GICA在疟原虫感染诊断中的特异性、敏感性。结果检测发热病人334例,其中间日疟特异性达94.16%,敏感性达75%;恶性疟特异性98%,敏感性81%。结论GICA敏感性、特异性较高,具有较高的可靠性,且方便快捷适于现场应用。

胶体金免疫层析法快速检测桔青霉素的研究

目的:开发一种快速、稳定的现场检测谷物中桔青霉素(Citrinin, CIT)的方法。方法:将桔青霉素与载体蛋白BSA和HSA连接制备人工抗原,将人工抗原免疫Babl/c小鼠制备特异单克隆抗体(2D3)制备胶体金-mAb探针和免疫层析试纸条。结果:单克隆抗体的亲和力为7.17×10~8 L/mol,与其它霉菌毒素无交叉反应。在最佳条件下,视觉检测限和仪器检测限分别为5 ng/mL和0.11 ng/mL。免疫层析(ICA)技术对玉米和小麦样品的添加回收率为86.93%~110.34%,相对标准偏差为0.47%~2.59%,检测结果与高效液相色谱(HPLC)法具有良好的一致性(R^2>0.98)。结论:胶体金免疫层析技术可用作现场检测CIT含量的快速、可靠的技术。

应用胶体金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研究

〔目的〕应用胶体金免疫层析法,研究水产品中霍乱弧菌的快速检测方法。〔方法〕通过模拟水产品棉拭子标本比对试验及现场应用比对试验,比较不同检验方法的差异。〔结果〕70份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×10CFU/ml的模拟水产品棉拭子标本分别按检验方法1、检验方法2检验,同时检出阳性51份,检验方法2的检出率(87%)显著高于检验方法1的检出率(74%);30份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×101CFU/ml的“模拟水产品棉拭子标本”按检验方法2进行检验的检测结果均为阳性。对2000份水产品进行检测的现场应用对照实验结果显示:检验方法3的检出率(0.4%)与检验方法1的检出率(0.3%)差异无显著性;胶体金试纸条实验的假阳性率为8%。〔结论〕在胶体金免疫层析法实验中,增菌液增菌前霍乱弧菌含量为1CFU/ml,通过增菌后可被检出;增菌液霍乱弧菌含量为10CFU/ml,增菌12h后均可被检出;水产品棉拭子标本增菌12h检测阴性者可报告阴性,阳性者则参照《霍乱防治手册》[1]进一步分离鉴定。鱼贝类霍乱弧菌污染菌数较少(103CFU/100g以下)[2],无法满足使用胶体金免疫层析法所要求的含菌量(106CFU/ml)[3],可以通过改良增菌培养液成分,以提高待检菌繁殖能力,在短时间内提高增菌液待检菌浓度,使胶体金免疫层析法的灵敏性高于或接近常规的分离鉴定法。

微量血清血吸虫抗体检测层析卡的研制与评价

目的研制血清用量少的血吸虫抗体检测层析卡。方法采用Sephacryl S 300HR柱层析分离血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),保留具有特异性反应活性的抗原蛋白组分。并研究标记浓度及稀释剂配方、样品缓冲液成分,组成最佳反应体系,建立血清用量5μl的血吸虫抗体检测层析卡。结果血吸虫抗体检测层析卡对血吸虫虫卵阳性病人的敏感性为93.7%,EPG<24的低感染度检出率达91.3%,健康人群的特异性为97.1%,并殖吸虫病人的交叉反应率为5.6%,Youden指数为0.91。与ELISA平行检测流动人口的总符合率为96.1%,Kappa值为0.81。结论血吸虫抗体检测层析卡具有血清用量少、敏感性高、特异性强、交叉反应低、应用范围广等特点,具有现场实用价值。

胶体金免疫层析法复检HBsAg阳性标本的可行性分析

目的评价利用胶体金免疫层析法(GICA)复检酶联免疫吸附试验(ELISA)所检测出的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性标本的效果。方法分离用ELISA法筛选出的无黄疸、无溶血HBsAg阳性标本血清,按初检A值/cutoff值的大小分为A-E 5组,每组随机选取40例患者标本,另取40例健康者血清纳入对照组F组。每组标本分别用GICA法、ELISA法和化学发光免疫分析法(CLIA)进行复检。以CLIA法检测结果为金标准,计算并比较GICA法和ELISA法复检的假阳性率及假阴性率。结果 GICA法复检全部标本的假阳性率为0。当1≤A值/cutoff值<5时,GICA法的假阴性率为95.24%,同时,检测出1例因HBsAg滴度过高导致ELISA漏检的标本;当5≤A值/cutoff值<10时,GICA法的假阴性率降为23.68%;当A值/cutoff值≥10时,GICA法的假阴性率为0。结论 ELISA法HBsAg初检A值/cutoff值≥10时,用GICA法复检为阳性,可及时发出报告;当A值/cutoff值<10时,为保证检验结果的准确性,除胶体金法外,还应使用ELISA等方法进行复检。

胶体金免疫层析法与双单克隆抗体夹心ELISA检测鼠疫F1抗原的比较

目的比较胶体金免疫层析法(GICA)和双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验(DMcAbS-ELISA)检测鼠疫F1抗原的敏感性和特异性。方法用GICA试纸条和DMcAbS-ELISA平行检测308份强毒鼠疫耶尔森菌感染鼠脏器标本和327份对照鼠标本,用RIHA微量法同时检测作为参照。结果327份对照鼠鼠疫细菌学检验及GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA的F1抗原检测均为阴性,GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA在108cfu/mL水平上未发现与近缘假结核耶尔森菌有交叉反应;308只感染鼠样本细菌培养阳性284只,24只样本未分离到鼠疫菌;F1抗原检测GICA阳性287份,DM-cAbS-ELISA阳性280份,RIHA阳性276份,GICA阳性检出率最高93.19%,与DMcAbS-ELISA和RIHA比较,差异均有统计学意义(χ2=5.14,9.09;P=0.016,0.001);GICA与DMcAbS-ELISA符合率97.73%(Kappa=0.845);GICA和DMcAbS-ELISA与RIHA符合率分别是96.43%和98.70%(Kappa=0.774,0.926);284份细菌培养阳性鼠标本F1抗原检测GICA阳性率是98.59%,高于DMcAbS-ELISA和RIHA,差异有统计学意义(χ2=4.17,5.14;P=0.031,0.016);24份细菌培养阴性实验鼠标本F1抗原检测:GICA检出7份阳性,阳性率29.17%,DMcAbS-ELISA检出6份阳性,阳性率25%,RIHA检出3份阳性,阳性率12.5%,GICA高于DMcAbS-ELISA和RIHA,但差异无统计学意义(χ2=2.25,0;P=0.125,1.000)。结论GICA检测鼠疫F1抗原敏感特异,快速简便,优于DMcAbS-ELISA和RIHA,是鼠疫快速诊断中有应用价值的检测技术。

谷物中玉米赤霉烯酮残留的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、针对谷物中玉米赤霉烯酮残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出玉米赤霉烯酮胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对谷物中玉米赤霉烯酮的检测限为100μg/kg,灵敏度为99%,特异性为94%,假阴性率为1%,假阳性率为6%,检测时间为10 min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于现场快速检测谷物中的玉米赤霉烯酮。

胶体金免疫层析法快速检测韭菜中腐霉利残留

【目的】建立韭菜中腐霉利残留的胶体金免疫层析快速检测方法。【方法】通过合成两种不同结构的腐霉利半抗原,并分别与载体蛋白耦联制得免疫原和包被原,免疫小鼠获得腐霉利单克隆抗体。基于竞争性免疫抑制原理,建立可视化胶体金免疫层析法。【结果】检测韭菜中腐霉利残留,检测限为5 mg/kg,满足国家标准规定的最大残留限量;对实际样本的检测结果与液相色谱-质谱法检测结果一致。【结论】本研究建立的方法具有简便、快速、准确等优点,可实现对韭菜中腐霉利残留超标的高通量快速筛选。