胶体金免疫层析法快速定量分析粮油农产品中黄曲霉毒素B_1

采用自主研制的黄曲霉毒素B1胶体金免疫定量检测卡，建立花生、玉米、大米、小麦等粮油农产品中黄曲霉毒素B1的定量分析方法，4种样品检测的线性范围为1．0～20．0μg/kg，R2＞0．97，方法的定量限为1．0μg/kg，样品加标回收率为75％～106％，RSD＜20％。胶体金免疫层析法与免疫亲和柱净化-HPLC 法相比，相对误差＜15％，具有简便快速、灵敏度高、重现性好等特点，适用于粮油农产品及制品中黄曲霉毒素B1筛查，样品检测时间只需15min，检测成本低于其他方法。

铜绿假单胞菌胶体金免疫层析法的研制和应用

为建立一种简单、快速、准确的铜绿假单胞菌检测方法,结合抗重组铜绿假单胞菌外膜蛋白单克隆抗体(mAb)、胶体金标记技术,采用双抗体夹心法,建立了检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析法,并对该方法的特异性、灵敏度和稳定性进行了评价,对临床痰标本进行了检测。结果显示,该胶体金免疫层析法能在3～15min内完成检测,方法的特异性高、稳定性强,检测灵敏度能达到105CFU/mL。与传统细菌培养方法相比,胶体金免疫层析法的相对灵敏度和特异性分别是80%和90.6%,两种方法的总符合率为86%。结论:利用抗铜绿假单胞菌单克隆抗体建立的胶体金免疫层析法,适合现场快速、特异检测铜绿假单胞菌。

快速检测尿液CK20方法的建立

目的建立快速用于筛查膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of bladder,TCC)的尿液细胞角蛋白20(CK20)单克隆抗体胶体金检测试条的方法。方法自行研制CK20单克隆抗体,建立CK20单克隆抗体胶体金试条,对膀胱移行细胞癌、泌尿系统良性疾病和健康人尿液进行检测。结果成功获得一株稳定分泌抗CK20单克隆抗体的杂交瘤细胞,其腹水抗体和纯化的抗体效价均为1∶106,Western-blotting显示得到纯化CK20单克隆抗体。CK20试条检测结果:50例膀胱移行细胞癌患者尿样检出阳性率为78%(39/50),特异性为87%。20例泌尿系统良性疾病患者血尿检测的阳性率是25%(5/20),20例健康人尿液检测均阴性。肿瘤组与对照组敏感性之间差异具有统计学意义(P<0.005)。结论CK20试条法具有特异性好、敏感性高、操作简单、快速和一般实验室可开展的特点,可作为膀胱移行细胞癌快速筛查和疗效观察的一种新方法。

全血快速检测甲胎蛋白胶体金免疫层析方法的研制和应用

目的 :建立一种简便、快速、准确的检测甲胎蛋白 (AFP)的方法。方法 :采用单克隆抗体胶体金标记技术 ,运用双抗体夹心法免疫层析原理 ,建立全血快速AFP胶体金层析法。结果 :与ELISA法进行对比 ,AFP全血试纸条的阳性符合率 98.31% ,阴性符合率 96 .4 6 % ,总符合率 97.0 9%。结论 :AFP全血试纸条具有快速简便 ,结果易判 ,无需仪器设备 ,末梢全血可即采即测等优点 ,能满足急诊检验的需要 ,尤其为大面积的体检普查 。

支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用

目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,从而诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A;用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜;组装成免疫层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎血清标本,与两家国外公司、1家国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该试纸具有较好的特异性和敏感性,并且更简便快速,适合基层单位使用等特点。

伤寒杆菌抗原胶体金层析法的研制及应用

目的:建立一种早期、简便、快速、准确的诊断伤寒的检验方法。方法:采用单克隆抗体,胶体金标记技术,运用双抗体夹心法,免疫层析原理,建立伤寒杆菌抗原胶体金层析法。与肥达反应、血培养、ELISA法进行对比。结果:伤寒杆菌抗原试纸条的灵敏度较肥达反应、血培养高,特异性与ELISA法接近,灵敏度比ELISA法稍低。结论:伤寒杆菌抗原试纸条具有简便、快速、结果易懂、无需特殊仪器的优点,能满足急诊检验的需要,提供了便利条件,适合于广大基层门诊推广、体检普查以及流行病学调查。

番茄环斑病毒研究进展综述

番茄环斑病毒是一种致命性极强的病毒。它的影响范围广,容易传播,病害严重,是一类较为重要的检疫性病害。本文论述了番茄环斑病毒的生物学特性、寄主范围、病害特点,国内外的检测方法、表达抑制等研究进展,为该病毒进一步的研究打下了坚实的基础。

性激素对小鼠卵巢囊淋巴孔调控及淋巴吸收的影响

目的研究性激素对小鼠卵巢囊淋巴孔的作用及淋巴吸收的影响,并通过卵巢囊内层间皮细胞核内雌激素受体对性激素调控淋巴孔的开放加以探讨。方法应用示踪剂测定淋巴孔的吸收能力;利用扫描电镜、透射电镜和免疫胶体金技术,观察雌、雄激素作用下小鼠卵巢囊淋巴孔的变化。结果雌激素能使小鼠卵巢囊淋巴孔开放增加,淋巴孔吸收能力增强;雄激素则使淋巴孔开放数量减小,降低了淋巴孔吸收能力。实验首次发现,卵巢囊内层间皮细胞核内存在雌激素受体。雌激素干预使间皮细胞雌激素受体表达水平下降,而雄激素则上调雌激素受体的水平。结论性激素能调控小鼠卵巢囊淋巴孔的开放及淋巴吸收,其作用机制可能与卵巢囊内层间皮细胞的雌激素受体表达水平有关。

胶体金标记免疫层析试纸条在儿童HbsAg检测中的应用评价

目的 :寻求一种灵敏快速易懂的儿童血检法。方法 :试用一种胶体金标记免疫层析 (CIA)试纸条 ,一步法快速、定性检测 196 5例儿童未梢全血中乙型肝炎病毒表面抗原 (HbsAg)。结果 :胶体金标记免疫层析试纸条与全血中的HbsAg具有特异性的结合能力 ,阳性检出率达 95 .0 0 % (5 7/ 6 0 )。对HbsAg灵敏度高达 2ng/ml,不出现前带现象 ,接近EIA法。经胶体金标记免疫层析试纸条检出的 6 7例阳性儿童 ,再行静脉抽血用EIA法进行第二次复查比较 ,6 7例标本HbsAg全部呈阳性 ,阳性符合率达 10 0 %。结论 :胶体金标记免疫层析试纸条特异性强 ,灵敏度高 ,简便快速 ,结果易懂 ,无需特殊仪器设备 ,适合广大基层门诊 ,尤其大面积的儿童HbsAg的普查 ,街头无偿献血等过筛应用。

河鲀毒素胶体金免疫层析快速定量方法

建立了河鲀毒素的胶体金免疫层析检测方法。所建立的河鲀毒素检测方法IC_(50)为48 ng/m L,线性范围为(10~160)ng/m L(y=-0.20lnx+1.23,R^2=0.98)。建立了基于磷酸盐缓冲液一步提取的河鲀毒素快速前处理方法,检测河鲀样本的最低检出限为20μg/kg,平均相对标准偏差<20%(n=6)。该方法适用于热加工样品的检测,整个检测过程仅需10 min,且无需使用大型设备,为河鲀餐前快检提供了有力的技术手段。

乙肝表面抗原弱阳性标本复检策略分析

探讨ELISA检测乙肝表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的复检策略。采用ELISA双孔检测法、化学发光免疫分析法及胶体金免疫层析法复查149例ELISA初检HBsAg弱阳性标本。比较这三种方法的检测灵敏度、特异性以及临床实用价值。结果显示,ELISA法复查149例HBsAg弱阳性标本中,仅81例阳性,与化学发光法比较,结果无显著性差异,一致性检验Kappa值为0.864;以化学发光法与ELISA检测一致的结果为标准,金标法检测HBsAg弱阳性标本灵敏度为87%,特异性达到95%,能够满足临床HBsAg弱阳性标本复查要求;化学发光法较前两者具有更高的特异性及灵敏度,影响因素小,准确性高,临床研究多将其作为参考方法,缺点是其试剂成本高。因此,我们依据各检测方法特点,并针对不同的干扰因素,综合考虑临床需要和经济效益,合理制定HBsAg弱阳性标本的复查策略。

肺癌患者铜绿假单胞菌感染快速检测方法的应用

探讨胶体金免疫层析方法在感染铜绿假单胞菌肺癌患者快速床边检验的应用价值。方法:用分子生物学方法克隆OprF基因,原核系统诱导表达并纯化OprF,免疫BALB/c小鼠后通过杂交瘤技术制备特异性的mAb。采用双抗体夹心法,建立了检测铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析法,并对该方法的特异性、灵敏度和稳定性进行了评价,对121例晚期肺癌患者临床标本进行了检测。结果:成功克隆OprF基因,经原核诱导表达获得铜绿假单胞菌的OprF。通过杂交瘤技术筛选,经鉴定单克隆抗体3C3B5可作为捕获抗体,多克隆抗体被HRP标记后可作为检测抗体。以传统细菌培养和鉴定方法为参照,用胶体金免疫层析试纸条检测的敏感度为83.3%(45/54),特异性为92.5%(62/67),总符合率为88.4%。结论:成功制备了铜绿假单胞菌胶体金免疫层析法试纸条,实现了晚期肺癌感染患者床边检验和病情检测。中华肿瘤防治杂志,2012,19(2)