红螯螯虾感光器中Gq蛋白的鉴定及光波长对其含量的影响

用蛋白质常规提取方法分别提取红螯螯虾复眼视网膜的可溶性和膜结合蛋白质 ,用SDS PAGE和免疫印迹法进行G蛋白的分离和鉴定 ;在经光、暗适应及红、绿、蓝、黄 4种波长光照处理后 ,对其感光器中G蛋白分别进行SDS PAGE分析。暗适应、自然光及 4种波长光适应的感光器可溶性蛋白、膜结合蛋白条带数量和分子量大小基本相同 ,在 4 2kD处都出现一条清晰的蛋白条带。兔抗Gαq 11多克隆抗体能识别这一蛋白条带。表明红螯螯虾感光器中存在可溶性和膜结合Gq蛋白α亚基 ,分子量为 4 2kD。在不同光照条件下感光器中可溶性和膜结合Gqα亚基的含量有差异。可溶性Gqα蛋白占总蛋白的百分含量依次为 :日光 (7 71% ) >黄光(7 32 % ) >红光 (7 0 6 % ) >暗适应 (6 94 % ) >蓝光 (6 4 6 % ) >绿光 (5 74 % ) ;除暗适应与红光之间差异不显著外 ,红光与黄光差异显著 ,其余差异极显著。而膜结合Gqα亚基的百分含量则相反 ,依次为 :绿光(13 94 % ) >蓝光 (10 5 6 % ) >暗适应 (10 2 5 % ) >红光 (10 14 % ) >黄光 (9 76 % ) >日光 (9 4 4 % ) ;除暗适应与红光差异不显著外 ,红光与黄光差异显著 ,其余差异极显著。推测红螯螯虾感光器中Gq蛋白的激活与光照刺激的波长有关 ,其感光器对不同波长光刺激的敏感度有差别。

棉铃虫Gq蛋白α亚基基因的克隆及组织特异性表达

目的了解棉铃虫体内Gqα的组织特异性表达情况。方法利用RACE技术获得了Gqα全长基因,利用半定量RT-PCR研究了该基因的时空表达情况。结果从棉铃虫Helicoverpaarmigera触角中克隆了一条全长1101bp的GqαcDNA序列,命名为GqαHarm;阅读框全长1062bp,编码353个氨基酸残基。GqαHarm与已报道的昆虫Gq蛋白α亚基同源性在90%以上,与近缘种甘蓝夜蛾MamestrabrassicaeGqα的同源性高达96.88%,与家蚕BombyxmoriGqα的同源性高达97.73%。半定量RT-PCR研究表明,GqαHarm在棉铃虫雌雄成虫触角中表达,在头、胸、腹、足和翅中也有表达,并且表达量差异不显著;此外,在喙、下颚须和下唇须中也有表达;在卵、幼虫、蛹和成虫体内也都有表达;在卵中的表达量最高,而在成虫中的表达量最低,在幼虫和蛹的前、中、后期的表达量差异不大。结论研究表明GqαHarm是一种在棉铃虫体内普遍存在的蛋白。

钙离子浓度对光暗适应罗氏沼虾感光细胞可溶性Gq蛋白α亚基的影响

以光适应和暗适应条件下的罗氏沼虾复眼视网膜为材料 ,分别用高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后 ,用蛋白质提取液提取可溶性Gq蛋白α亚基并SDS PAGE电泳 ,利用TanonGIS凝胶图像处理系统分析其含量。从光暗条件下 3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了 4 2kDa的可溶性Gq蛋白α亚基。高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中可溶性Gq蛋白α亚基的含量 ,光适应组分别是 3 13%、 3 0 9%、3 0 3% ;暗适应组分别是 3 17%、 3 0 6 %、 3 0 1%。在生理溶液和低钙溶液中 ,该蛋白含量光适应组大于暗适应组 ,但低钙溶液的光适应组与暗适应组无显著差异 ;在高钙溶液中 ,暗适应组显著大于光适应组 ,可能与钙离子反馈调节作用有关。

脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞[Ca^(2+)]_i和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预

目的 :观察脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVECs) [Ca2 + ]i 和Gq蛋白的影响及山莨菪碱的干预作用。方法 :分离、培养并鉴定Wistar大鼠RPMVECs;应用Fura - 2 /AM法测定RPMVECs[Ca2 + ]i;流式细胞仪技术测定RPMVECsGq蛋白。结果 :①LPS作用于RPMVECs 30min和 90min后 ,[Ca2 + ]i 显著高于对照组 ;Gq蛋白显著低于对照组。②山莨菪碱可抑制LPS的上述作用。结论 :①LPS致RPMVECs[Ca2 + ]i 增加和Gq蛋白下降 ;②山莨菪碱通过抑制LPS诱导RPMVECs[Ca2 + ]i 增加和Gq蛋白下降的作用而保护其内皮屏障功能。

心力衰竭大鼠左室组织Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化及苯那普利的干预作用

目的:观察慢性心力衰竭大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化,以阐明该信号转导通路在心力衰竭发病中的作用。方法:SD大鼠分为3组:对照组、心衰组和苯那普利干预组。心衰组大鼠腹腔注射阿霉素累积剂量达20mg.kg-1BW制作慢性心力衰竭模型,苯那普利组大鼠腹腔注射阿霉素同时给予苯那普利10mg.kg-1.d-1。4周后大鼠经颈内动脉插管至左心室行血流动力学测定,心肌组织中Gαq/11蛋白表达采用Western印迹法,磷脂酶C活性测定采用酶水解同位素底物法。结果:心衰组大鼠左室压力最大上升速率(+dp/dtmax)和最大下降速率(-dp/dtmax)均显著低于对照组,其左室组织中Gαq/11蛋白表达、基础磷脂酶C活性和GTPγS刺激后磷脂酶C活性均显著高于对照组(P<0.01)。苯那普利组大鼠±dp/dtmax均显著低于对照组但高于心衰组(P<0.05),其左室组织中Gαq/11蛋白表达、基础磷脂酶C活性和GTPγS刺激后磷脂酶C活性均显著低于心衰组但高于对照组(P<0.01)。结论:心力衰竭大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径活性显著升高,该信号通路的过度活化可能在心衰的发生中起到一定的作用,ACEI类药物苯那普利可部分逆转心衰大鼠左室组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的激活。

钙离子对光暗适应罗氏沼虾感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的影响

用蛋白质提取液提取膜结合Gq蛋白α亚基并SDS-PAGE电泳,利用Tanon G IS凝胶图像处理系统分析其含量.光暗条件下,在3种溶液孵育后的感光细胞中都提取到了42 kDa的膜结合Gq蛋白α亚基.高钙溶液、生理溶液、低钙溶液孵育后的感光细胞中膜结合Gq蛋白α亚基的含量,光适应组分别是4.58%、4.63%、5.05%;暗适应组分别是4.56%、4.94%、5.13%.

异丙酚预处理对ARDS大鼠多器官Gq/11蛋白表达的影响及其保护作用的研究

目的探讨异丙酚预处理对急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)大鼠多器官Gq/11蛋白表达的影响及其保护作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为油酸组、预处理组和对照组。油酸组由大鼠尾静脉注射油酸0.2 ml/kg(2 min内)复制ARDS模型。预处理组经左颈静脉输注异丙酚80 mg.kg-1.h-1,30 min后再以相同方式注射油酸。对照组从尾静脉注射同剂量的生理盐水。测定各组大鼠平均动脉压(MABP)、血气、血浆和各器官乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)含量。免疫印迹法检测各器官Gq/11蛋白含量。结果油酸组和预处理组的pH、PaO2较对照组下降(P<0.05)。与对照组相比,油酸组血浆与肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组心、肾、小肠LDH活性明显升高(P<0.05)。预处理组血浆、肺、脑、心、肾、肝LDH活性较油酸组降低(P<0.05)。与对照组相比,油酸组血浆、肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组血浆、心、肾MDA含量明显升高(P<0.05)。预处理组血浆、肺、脑、心、肾、肝、小肠MDA含量较油酸组降低(P<0.05)。与对照组相比,油酸组和预处理组血浆、肺脏ACE活性明显降低(P<0.05),而肾脏、小肠ACE活性升高(P<0.05)。与油酸组比较,预处理组血浆ACE活性升高(P<0.05),肺脏、小肠ACE活性降低(P<0.05)。油酸组肺、脑、心、肾、肝、小肠以及预处理组肺、脑、心、肾、小肠中Gαq/11蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05)。与油酸组比较,预处理组肺、脑、肾、肝中的Gαq/11蛋白表达有所降低(P<0.05),心、小肠的变化无明显差异(P>0.05)。结论异丙酚预处理能减轻ARDS时多器官损伤程度,其抑制Gq/11蛋白高表达变化可能是其保护途径之一。

实验性急性呼吸窘迫综合征大鼠脑组织Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化

目的:探讨急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠脑组织中Gq蛋白-肌醇磷脂途径的变化及其作用。方法:健康雄性40只Wistar大鼠随机分为油酸组(OA组)和对照组。OA组由大鼠尾静脉注射OA 0.2 mL/kg(2 min内)复制ARDS模型,根据不同观测时点分为30 min、60 min、90 min和120 min 4个亚组。检测各组大鼠平均动脉血压(MABP),血气,血浆和脑组织丙二醛含量及乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性。免疫印迹法检测各组大鼠脑组织中的Gq/11蛋白α活性亚基以及磷脂酶C(PLC)含量。结果:与对照组相比,OA组MABP、PaO2明显降低(P<0.05)。OA90 min和120 min组血浆和脑组织的MDA含量和LDH活性明显升高(P<0.05)。OA组血浆CK活性较对照组明显升高(P<0.05),脑组织CK活性在OA 60 min组升高(P<0.05),随后在90 min和120 min组降低(P<0.05)。脑组织Gαq/11蛋白在OA60 min、90 min和120 min组明显升高(P<0.05)。OA组脑组织PLC表达明显上调(P<0.05)。脑组织Gαq/11蛋白表达与PaO2的改变呈负相关(r=-0.579,P<0.05),与脑组织MDA变化呈正相关(r=0.538,P<0.05),与脑组织LDH的变化亦呈正相关(r=0.624,P<0.05)。结论:ARDS时Gq蛋白-肌醇磷脂信号通路活性增强可能参与了脑组织的损伤。

钙离子浓度对日本沼虾感光细胞内可溶性Gq蛋白α亚基含量的影响

研究了钙离子浓度对日本沼虾(Macrobrachium nipponense)感光细胞中可溶性Gq蛋白α亚基含量的影响。以暗适应状态日本沼虾的复眼视网膜为材料,分别用高钙溶液、生理溶液、低钙溶液进行孵育,应用SDS-PAGE及免疫印迹技术对其可溶性蛋白粗提取液进行分离和鉴定,并利用Tanon GIS凝胶图像处理系统对蛋白条带的含量进行分析,结果显示:不同钙离子浓度中孵育的日本沼虾感光细胞蛋白的条带数量和分子量大小基本相同。兔抗Gqα多克隆抗体在高钙溶液、生理溶液及低钙溶液处理的日本沼虾感光细胞中均识别了可溶性Gq蛋白α亚基,分子量为42 ku,可溶性Gq蛋白α亚基的含量分别是8.6%、8.4%和7.2%。在暗适应条件下,细胞中可溶性Gq蛋白α亚基的含量与钙离子浓度成正比,这表明钙离子浓度的升高可促进膜结合的Gq蛋白α亚基转化为可溶性的Gq蛋白α亚基。

Ca^(2+)浓度对罗氏沼虾Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响

采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适应条件下不同Ca2+浓度对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergi)感光细胞中Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响。结果表明,对于光适应组,在高Ca2+溶液、生理溶液和低Ca2+溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是3.51、2.13和0.93。对于暗适应组,在高Ca2+溶液、生理溶液和低Ca2+溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是3.01、1.08和0.47。这些表明了罗氏沼虾感光细胞中Gq蛋白α亚基在暗适应条件下同时分配在感杆束和细胞质中。在光照和细胞质内Ca2+浓度适度升高的条件下,膜结合的Gq蛋白α亚基进而转化为可溶性的Gq蛋白α亚基。

罗氏沼虾溞状幼体早期复眼中的Gq蛋白α亚基

Gqα proteins of one thousand pairs of compound eyes of Macrobrachium rosnbergii in zoaea I～IV were isolated with SDS-PAGE electrophoresis , gel and protein maps photoed and the percent of protein was analyzed by Tanon GIS gel image disposal system. The results showed that the amount of Gqα protein of compound eyes increased gradually from zoaea I to IV, the percent of the Gqαin zoaea I～IV was 3.499%,3.540%,3.558% and 3.565% respectively. However, the percent of the protein in zoae IV and zoae I was significantly different (pair t test p <0.05). Our research verified that the function of compound eyes perfected gradually with individual development in zoaea of Macrobrachium rosnbergii.

Gq/11蛋白在ARDS时大鼠肺损伤中的动态变化

目的研究急性呼吸窘迫综合征(ARDS)时大鼠肺Gq/11蛋白的动态变化。方法采用尾静脉注射油酸法复制大鼠ARDS模型,并将其分为对照组(C组)和油酸组(OA组),又根据不同时限将其分为30min、60min、90min和120min4个亚组;紫外法测定血管紧张肽转化酶(ACE)活性,免疫印迹法检测各组大鼠肺组织中的Gq/11蛋白含量。结果OA各组随时间延长Gq/11蛋白含量较C组分别高(19.24±2.38)%、(35.12±2.01)%、(43.93±1.62)%、(48.63±1.88)%(P<0.01),OA组除了30min组其它各组血浆及肺组织的ACE活性显著低于C组,并随着时间延长而更低(P<0.01)。结论Gq/11蛋白的表达上调在ARDS肺损伤中可能占有一定地位,并参与ARDS的发生发展。

异丙酚对急性呼吸窘迫综合征时肾Gq/11蛋白的干预作用

目的探讨异丙酚是否通过影响Gq/11蛋白的表达对肾脏起保护作用。方法采用尾静脉注射油酸(OA)法复制急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠模型。将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C组)、OA组和异丙酚预处理组(P组),并观察血压及相关酶的变化。用蛋白质免疫印迹法检测肾脏中Gq/11蛋白含量。结果P组Gq/11蛋白含量(124.68±19.38)%较C组(100.00±0)%增加了(24.68±19.38)%(P<0.01),但明显低于OA组(149.34±20.04)%(P<0.01)。P组肾组织血管紧张素转换酶(16.52±1.37)μmol·min-·g-1、乳酸脱氢酶(1.20±0.16)kU/g活性和丙二醛(1.51±0.35)μmol/g含量也均明显低于OA组分别为(17.56±1.02)μmol·min-1·g-1,(1.41±0.16)kU/g,(1.94±0.16)μmol/g,P均<0.01。结论预先注射异丙酚能降低Gq/11蛋白在肾脏中的含量,并减轻ARDS时肾损害的程度。

运动性心肌肥大及其信号通路研究进展

传统理论认为,运动性心肌肥大体现了机体对系统训练的生理适应,但最新的研究结果表明,运动诱导的心肌肥大会导致机体出现一些病理性的改变.相关研究证实,无论生理性心肌肥大或病理性心肌肥大,均具有鲜明的结构和分子基础,最具特征的信号通路则是PI3K和Gq信号通路.在介绍运动性心肌肥大机制的基础上,对心肌肥大的分类以及信号通路进行综述,以期更好地了解运动性心肌肥大,从而将运动性心肌肥大风险控制在最小范围.

磷脂酰肌醇信号通路对动物采食的调节及作用机制

磷脂酰肌醇信号通路是指胞外信号通过膜受体与其相应的第一信使分子结合后,激活膜上的Gq蛋白(一种G蛋白),激活质膜上的磷脂酶C(PLC),PLC水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸生成的三磷酸肌醇和二酰甘油2个第二信使的过程。磷脂酰肌醇信号通路对动物采食的作用则主要通过各种营养素刺激Gq蛋白偶联受体激活整个通路完成。本文综述了磷脂酰肌醇信号通路结构、对动物采食调节的影响及作用机制等,以期为相关研究提供参考。

急性呼吸窘迫综合征大鼠多器官中Gq／11蛋白表达的变化及意义

目的 探讨急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠肺、脑、心、肾、肝、小肠中Gq/11蛋白表达及作用.方法 40只Wistar大鼠按随机数字表法分为5组,每组8只.由大鼠尾静脉注射油酸（OA）0.2 ml/kg复制ARDS模型,对照组从尾静脉注射等量生理盐水.模型组分别于制模后30、60、90和120 min检测血浆和各器官中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、血管紧张素转换酶（ACE）;蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测各器官中Gq/11蛋白α活性亚基Gαq/11蛋白表达.结果 与对照组相比,LDH活性于30 min后在血浆和心呈进行性升高[血浆（kU/L）：9.69±1.66比6.27±1.70,心（kU/g）：0.81±0.12比0.59±0.09],60 min后在肺、脑、肾、小肠呈进行性升高[肺（kU/g）：1.15±0.19比0.87±0.11,脑（kU/g）：2.27±0.37比1.53±0.61,肾（kU/g）：1.13±0.26比0.64±0.09,小肠（kU/g）：0.72±0.10比0.60±0.13],90 min后在肝（kU/g）呈进行性升高（0.50±0.14比0.39±0.05,P〈0.05或P〈0.01）;MDA含量于30 min后在心（μmol/g）呈进行性升高（2.20±0.47比1.45±0.27）,60 min后在血浆、肺、肾呈进行性升高[血浆（μmol/L）：3.10±0.58比2.33±0.35,肺（μmol/g）：5.56±1.30比2.05±0.52,肾（μmol/g）：1.61±0.27比0.98±0.42],90 min后在脑、肝、小肠呈进行性升高[脑（μmol/g）：6.78±1.38比5.83±1.58,肝（μmol/g）：2.58±0.68比2.11±0.42,小肠（μmol/g）：2.14±0.51比0.81±0.26,P〈0.05或P〈0.01];ACE活性于60 min后在血浆和肺呈进行性降低[血浆（μmol·min-1·L^-1）：15.47±1.68比19.87±3.11,肺（μmol·min^-1·g^-1）：20.61±1.81比26.26±1.93],在肾（μmol·min-1·g^-1）呈进行性升高（15.92±1.20比13.67±2.26）,90 min后在小肠（μmol·min-1·g-1）呈进行性升高（4.42±0.34比3.29±0.24,均P〈0.01）;Gαq/11蛋白表达于30 min后在肺、小肠呈进行性升高[肺：（119.24±2.38）%比（100.00±18.74）%,小肠：（138.91±23.03）%比（100.00±19.43）%],60 min后在脑、心、肾呈进行性升高[脑：（141.85±33.82）%比（100.00±16.81）%,心：（124.72±24.05）%比（100.00±16.04）%,肾：（123.98±25.74）%比（100.00±8.50）%],90 min后在肝呈进行性升高[（134.34±19.14）%比（100.00±13.04）%,P〈0.05或P〈0.01].Gαq/11蛋白表达与各器官中LDH的变化呈正相关（r=0.584,P〈0.05）.结论 ARDS过程中肺、脑、心、肾、肝、小肠中Gq/11蛋白表达有不同程度上调,引发肌醇磷脂信号转导通路活性异常,参与了各器官的损伤发生.

实验性急性肺损伤大鼠脑组织中Gq／11蛋白的动态变化

目的观察急性肺损伤（acute lungin iury，ALI）大鼠脑组织中Gq／11蛋白的动态改变，从分子水平研究油酸（0A）性ALI导致脑损伤以及ALI导致多器官功能障碍综合征的可能机制，为ALI和多器官功能障碍综合征的发病机制提供实验和理论依据。方法用尾静脉注射OA法复制ALI大鼠模型，将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组（C组）和实验组（OA组），OA组又根据不同时限将其分为30min、60min、90min和120min4个亚组。观察检测各组大鼠血气（pH、Pa02、PaCO2）、平均动脉压（MABP）、血浆及脑组织乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）。免疫印迹法检测各组大鼠脑组织中的Gq／11蛋白含量。结果Gq／11蛋白含量：除OA30min组外，其余OA各组随着时间延长较C组分别增加至（141．85±33．82）％、（165．84±30．27）％、（174．31±32．52）％（P〈0．01）。除OA30min组外，其余OA各组血浆MDA含量均较C组升高（P〈0．01）；OA30min组和OA60min组脑组织MDA含量与C组比较差异无统计学意义，OA 90min组和OA 120min组脑组织MDA含量较C组升高（P〈0．01）。OA各组血浆LDH活性均较C组升高（P〈0．01）；除OA30min组外，其余OA各组脑组织LDH活性均较C组升高（P〈0．01）。脑组织CK活性在60min时达到峰值（P〈0．01），以后呈下降趋势。结论ALI可导致远隔器官脑的损伤，引起细胞信号转导功能异常和脑代谢及形态的变化，Gq／11蛋白的高表达变化可能参与了ALI过程及脑损害的病理性信号转导。

异丙酚预处理对急性肺损伤脑组织Gq／11蛋白表达的干预作用

目的观察异丙酚预处理后Gq／11蛋白在急性肺损伤（acute lung injury，ALI）大鼠脑组织中的动态变化，探讨异丙酚是否通过影响Gq／11蛋白的表达对脑组织起保护作用。方法用尾静脉注射油酸法复制ALI大鼠模型，将24只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、ALI组和异丙酚预处理组。检测各组大鼠血气（pH值、PaO2、PaCO2）、平均动脉血压（MABP）以及血浆和脑组织乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、丙二醛（MDA）。Western blot检测各组大鼠脑组织中的Gq／11蛋白含量。结果异丙酚预处理组Gq／11蛋白含量为（133．89±21．59）％，较对照组增加（33．89±21．59）％（P〈0．01），但低于ALI组[（165．84±30．27）％，P〈0．053。异丙酚预处理组及ALI组PaO2较对照组明显降低（P值均〈0．01），但异丙酚预处理组高于ALI组（P〈0．01）。异丙酚预处理组及ALI组MABP均较对照组降低（P值均〈0．01），异丙酚预处理组低于ALI组（P〈0．01）。异丙酚预处理组脑组织LDH和CK活性分别为（1．51±0．58）U／mg、（35．83±7．09）U／mg，MDA含量为（4．70±1．59）U／mg，均低于AI。I组[分别为（2．38±0．72）U／mg（P〈0．01），（44．31±8．15）U／mg（P〈0．01），（6．78±1．38）U／mg（P〈0．05）]。血浆LDH和CK活性、MDA含量呈现与之相似的变化趋势。结论异丙酚预处理能减轻ALI时脑的损伤程度，其保护作用可能与下调Gq／11蛋白有关。

异丙酚预处理对Gq蛋白在ARDS时肝脏表达的影响

目的观察异丙酚预处理后Gq蛋白在ARDS时肝脏中的动态变化,以探讨其对肝脏的保护作用。方法油酸法复制大鼠ARDS模型,实验组经异丙酚预处理,免疫印迹法检测肝脏Gq蛋白的含量。结果异丙酚预处理后肝脏Gq蛋白的表达显著下降。结论异丙酚预处理能降低Gq蛋白在ARDS时肝脏的表达,对肝脏有一定的保护作用。

CCKAR与下游效应器融合蛋白的偏向性信号通路探讨

目的 探讨胆囊收缩素A受体(CCKAR)的偏向性信号通路,设计治疗糖尿病的特异性药物,为其他G蛋白偶联受体(GPCR)偏向性信号通路的研究提供新思路。方法 构建受体与Gα亚单位(Gs、Gq)或者β-arrestin-1之间的融合蛋白,研究其偏向性信号通路。在确保融合蛋白能够正常表达的前提下,采用环磷酸腺苷(cAMP)累积实验检测细胞在硫化缩胆囊素八肽(CCK-8s)刺激后细胞内cAMP含量的变化;采用钙成像技术检测细胞在CCK-8s刺激后细胞内钙离子的变化;采用免疫印迹技术检测细胞在CCK-8s刺激后细胞外调节蛋白激酶(pERK)和Bcl-2死亡启动子(pBad)的磷酸化情况。结果 融合蛋白质粒(CCKAR-Gs/Gq/β-arrestin-1)能够在HEK293细胞系中稳定表达;CCKAR-Gs融合蛋白可以产生高的cAMP信号,非融合蛋白CCKAR产生低的cAMP信号,而CCKAR-Gq/β-arrestin-1不引起cAMP信号;CCKAR-Gq具有更强的钙离子信号;CCKAR-β-arrestin-1具有特异的信号偏向性,显著提升下游ERK蛋白和Bad蛋白的磷酸化水平。结论 人工构建的CCKAR融合蛋白能够有效、偏向性地激活CCKAR的下游信号通路,可以选择性地行使不同信号通路调控的生理功能。