芥菜型油菜与甘蓝型油菜嫁接嵌合体的性状表现

以芥菜型油菜(B.juncea)作砧木,以甘蓝型油菜(B.napus)作接穗,形成嫁接嵌合体(以下简称“甘+芥”嫁接嵌合体),对其植物学性状、农艺性状和32P标记的难溶性磷矿粉的吸收能力进行了研究。结果表明,“甘+芥”嫁接嵌合体除叶片出现紫色性状外,其他性状与甘蓝型油菜没有差异,但其农艺性状明显优于甘蓝型油菜和芥菜型油菜。其根系对肥料中难溶性磷吸收能力强,而且多数转移到地上部分,在体内分布较合理。

一个芸香科属间嫁接嵌合体的拉丁名称:+Citroponcirus‘Hormish’

柑桔属(CitrusL.)和枳属(PoncirusRaf.)属间嫁接嵌合体是1986年从福建省连城县莒溪镇一个专业户果园的芦柑(CitrusreticulataBlanco)嫁接于枳(Poncirustrifoliata(L.)Raf.)的2 a生植株发生冻害后由嫁接口蘖芽产生变异获得的。枝条有单身复叶、二出复叶和三出复叶,一些枝条出现三出复叶枳枝,表现出芦柑和枳的嵌合;幼果密被茸毛,为枳的性状,成熟果实为芦柑形态并具有芦柑风味,产生一部分为枳一部分为芦柑的嵌合果;果实汁胞以橙红色为主,兼有少量淡黄色汁胞和橙黄嵌合汁胞。依据《国际栽培植物命名法规》,芸香科柑桔属和枳属属间嫁接嵌合体拉丁名称的属名是柑桔属和枳属的属名合并建立的新“属名”,定名为+枳合芦属(+Citroponcirus),栽培品种加词采用这个嫁接嵌合体发现者的人名表示,这个属间嫁接嵌合体的拉丁名称是+Citroponcirus‘Hormish’;以公式表示为Citrusreticulata+Poncirustrifoliata。在施文格(Swingle)柑桔分类系统中,+Citroponcirus‘Hormish’是目前世界上芸香科嫁接嵌合体中唯一的属间嫁接嵌合体。

红江橙果实与叶片变异的初步研究

“红江橙”是甜橙(Citrus sinersis(L.)Osbeck)与桔(Citrus reticulata Blanco)的嫁接嵌合体。出现橙型红肉果、橙型红黄肉嵌合果、嵌合桔变果三种变异类型的果实。另外还出现橙型黄肉果、桔变果二种回复到两个嫁接成分的果实。同时,橙型红肉果、橙型黄肉果、桔变果的果实性状与各自的叶片性状有明显的相关性。在生产上运用这些叶片性状可以从苗期开始准确地判别红江橙的变异植株,淘汰回复到两个嫁接成分的植株与枝条。

果树嫁接杂交及其应用

介绍了目前果树嫁接杂交研究的概况。

利用茎尖离体嫁接获得大蒜体细胞嵌合体

以‘阿城紫皮’大蒜和日本‘福地六瓣’白皮大蒜鳞茎茎尖为接穗、鳞茎盘为砧木,利用离体茎尖微体嫁接技术,研究了大蒜体细胞嵌合体的培育,用RAPD分子标记技术进行了嵌合体的鉴定。结果表明:最佳生芽培养基为MS+NAA 0.1 mg·L^(-1)+2ip 0.4 mg·L^(-1);最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 1.5 mg·L^(-1)。嫁接成活率达16.00%～26.67%。利用引物OPF-16鉴定表明,白/紫、白·紫/紫、白·紫/白、紫/白4种嫁接方式获得了嵌合体。利用引物OPJ-12鉴定表明,紫/白嫁接方式获得了嵌合体,而引物OPE-05鉴定未能检测出亲本与嫁接苗之间的差异。

异种骨髓移植后1例慢性移植物抗宿主病动物模型的观察

目的 探讨异种造血嵌合体模型中慢性移植物抗宿主病 (graft- versus- host disease,GVHD)发生的特点及机制 .方法 本研究对 40余只异种造血嵌合体模型中出现的一只慢性 GVHD实验兔行血常规、肝功、骨髓涂片检查 ,对其肝、肺、小肠、皮肤等脏器行常规病理、胶原纤维染色等检查 ,并同时用 PCR测其外周血中供体细胞嵌合情况 .结果 该实验兔外周全血细胞减少 ,PCR检查未发现供体细胞 ,骨髓轻度增生不良 ;病理结果显示其病变仍以皮肤为重但均较同种GVHD轻 ,其病变侵犯部位与同种 GVHD无明显区别 .结论 异种骨髓移植的慢性 GVHD出现时间晚 ,较罕见 ,临床表现不如同种慢性 GVHD典型 ,病变较同种 GVHD轻 ;其病变侵犯器官与同种

“早蜜橙”的来源、结构及其果实性状的研究

以“早蜜橙”这个新发现的柑桔嫁接嵌合体及与其有关品种类型的柑桔为材料，通过叶片气孔观察、花粉试验、多种酶同工酶分析和果实性状的比较分析，研究了它的来源、结构和果实主要经济性状的表现．结果发现：（１）在来源上，“早蜜橙”是由甜橙（新会甜橙的可能性最大）和南丰蜜桔形成的嫁接嵌合体．（２）在嵌合体结构上，“早蜜橙”是一个不完全周缘嵌合体，ＬＩ、ＬＩＩ以橙为主，ＬＩ则以桔为主，兼有橙因子．（３）“早蜜橙”果实品质上等，果实性状大部分来自橙，少数来自桔．糖、酸等主要营养物质的含量大都介于两亲本之间，绝大部分水解氨基酸含量比原接穗和砧木品种都高，有较大的利用价值．

供体特异性输血与嵌合体发生及肾移植急性排斥反应的关系

目的 :研究供体特异性输血 (DST)患者末梢血中嵌合体的发生及其与肾移植急性排斥反应的关系。方法 :肾移植患者 6 0例 ,分为 :A组 ,未行 DST的尸体肾移植 35例 (2 or 3HL A- mism atched) ;B组 ,未行 DST的活体肾移植 3例 ,HL A配型各位点无错配 ;C组 ,术前行 DST的活体肾移植 2 2例 (1 or 2 HL A- mism atched) ,利用 PCR- SSP法检测患者末梢血中的 HL A- DRB1基因。结果 :A组 1 2例 (34.3% )、B组 3例 (1 0 0 % )、C组 1 9例(86 .3% )发现了供体的 HL A- DRB1基因 ,证实有嵌合体发生。在 34例有嵌合体发生的病例中 1 4例 (4 1 .2 % )、2 6例无嵌合体存在的病例中有 1 0例 (38.5 % )发生过急性排斥反应 ,但两组间比较差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,同时排斥反应发生的频率、次数比较差异也无显著性 (P>0 .0 5 )。另外 ,C组病例中嵌合体现象消失 ,PCR- SSP检测转为阴性时未见排斥反应病例发生。结论 :DST有利于促进嵌合体的形成 ,嵌合体现象与急性排斥反应间无相关性 。

小鼠脾细胞在混合骨髓移植中的作用

目的:观察同异基因小鼠脾细胞输注比例和输注量在混合半相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)和嵌合状态的影响。方法:受鼠全身照射后,经尾静脉回输同基因和半相合异基因供鼠骨髓及两者不同比例脾细胞。A组未加入异基因供鼠脾细胞,B组加入的同异基因供鼠脾细胞量相等,C组加入异基因供鼠脾细胞量是同基因供鼠脾细胞量的两倍。回输后观察GVHD临床表现,取肝、皮肤、小肠送病理学检查评定GVHD分级。测定+70天、+150天嵌合率。监测造血重建和受鼠生存率。结果:混合骨髓移植各组小鼠生存期均超过50天。其中A组,临床和病理无GVHD表现,+150天嵌合水平大幅度下降。B组,临床和病理无明显GVHD表现,+150天嵌合水平中等幅度下降。C组病理有GVHDⅡ级表现,+150天嵌合水平下降不明显。半相合骨髓移植对照组小鼠出现典型的GVHD临床和病理表现,仅20%小鼠生存期超过50天。结论:小鼠混合半相合骨髓移植中,同异基因小鼠脾细胞输注比例和输注量对移植排斥和GVHD有协调作用。

嵌合体对异种骨髓移植后急性移植物抗宿主病的预防作用

目的 探讨嵌合体对异种骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的预防作用。方法 用亚致死量60 Coγ射线全身照射+输注小鼠骨髓细胞 +腹腔注射环磷酰胺的方法 ,建立嵌合体大鼠模型 ,然后观察嵌合体对异种骨髓移植致小鼠aGVHD的预防作用。结果 移植小鼠均出现典型aGVHD症状 ,未用aGVHD预防方案即输注无嵌合体大鼠骨髓和脾细胞的移植小鼠 (A组 ) ,死亡高峰在移植后 10～12天。输注嵌合体大鼠细胞的移植BALB/C小鼠 (B组 ) ,生存时间较A组和C组 (输注嵌合体大鼠的C5 7BL/ 6小鼠 )显著延长 ,aGVHD症状及病理表现明显减轻。结论 诱导出的嵌合体能有效预防异种骨髓移植后的aGVHD ,减轻其症状和病理损害 ,延长平均生存时间 。

混合脐血移植重建小鼠免疫造血功能的研究

目的：探索多份脐血混合移植重建免疫造血系统的可能性，扩大脐血移植的应用范围。方法：将1×10^6个C57BL／6和1×10^6个615小鼠脐血单个核细胞(MNC)同时输注给经致死量照射的BALB／c小鼠，10--15天后检查受鼠的脾结节(CFU—S)，作受鼠的骨髓粒—巨噬细胞集落形成单位(CFU—GM)培养，以检测造血重建；1个月后用流式细胞仪(FCM)检测受鼠体内供者细胞的嵌合状态；用单向混合淋巴细胞反应(MLR)检测免疫重建和免疫耐受；用受鼠小肠和皮肤病理切片检测移植物抗宿主病(GVHD)。结果：混合脐血移植小鼠的生存率为65％，未移植小鼠全部死亡；移植后10一15天在小鼠的脾脏可以检测到CFU—S，小鼠骨髓培养有CFU—GM生长；移植后30天发现在同一个小鼠的体内有2个供者的不全嵌合体同时存在；受鼠对两个供鼠的淋巴细胞均产生了免疫耐受；受鼠小肠和皮肤病理切片检查表明有轻—中度GVHD。结论：混合脐血移植可以重建同种异基因小鼠的免疫和造血功能而不引起重度GVHD。本研究为扩大脐血移植的应用范围打下了一定的理论和实践基础。

供者骨髓来源的T细胞抑制移植物抗宿主性疾病的作用研究

目的在骨髓移植的嵌合体中,研究供者骨髓来源的T淋巴细胞对移植物抗宿主性疾病(graft-vs.-host disease,GVHD)是否具有保护作用。方法采用T细胞去除(T cell-depleted,TCD)的Balb/c小鼠与野生型(wild type,WT)B6或TCD B6小鼠的混合骨髓细胞,输入致死量照射(8 Gy)的Balb/c小鼠体内,建立TCD Balb/c+WT B6及TCD Balb/c+TCD B6的混合嵌合体(mixed chimeras,MCs)小鼠模型。8周后,输入WT B6或SJL B6小鼠的脾细胞作为供者淋巴细胞输入(donor lymphocyte infusion,DLI)。通过比较死亡率、体质量变化、GVHD靶器官的病理损害,明确供者骨髓来源的T细胞是否减轻了DLI诱导的GVHD作用。并通过比较骨髓来源的T细胞或DLI来源的T细胞在外周血中的比例,明确骨髓来源的T细胞是否抑制了具有同种异基因反应的DLI来源的T细胞,进一步建立TCD Balb/c+CD4去除的B6或TCD Balb/c+CD8去除的B6的混合嵌合体,分别比较CD4 T或CD8 T细胞对GVHD的抑制作用。结果在含有骨髓来源的T细胞的WT嵌合体中,小鼠的生存率明显高于TCD嵌合体,而DLI后的体质量改变以及GVHD靶器官的损害程度明显轻于TCD嵌合体。而且,骨髓来源的T细胞,可抑制具有同种异基因反应的DLI来源的T细胞。同时,供者骨髓来源的CD4 T或CD8 T细胞对GVHD都起到保护作用,尤其是CD8 T细胞的保护作用更为明显。结论在DLI诱发的GVHD的混合嵌合体中,供者骨髓来源的T细胞,尤其是CD8 T细胞,有效的保护了GVHD的发生。

荧光原位杂交方法分析肾脏移植物血管内皮细胞嵌合

目的观察移植肾穿刺活检标本中血管内皮细胞被受体内皮细胞替代(内皮嵌合)的情况,并分析内皮嵌合与急性排斥反应的关系。方法选择Y染色体长臂Yq12区域(异染色质区)DNA片段作为探针,同时选择X染色体着丝粒区(α卫星DNA)探针作为对照,通过在石蜡切片标本上进行间期细胞双色荧光原位杂交方法(FISH),分析34例男性供者、女性受者的移植肾穿刺活检标本的内皮嵌合现象,探讨其与排斥反应的关系。结果肾脏移植物中血管内皮细胞嵌合现象较普遍存在,内皮细胞的分布呈灶状,供者内皮细胞和受体内皮细胞可相邻存在。血管内皮细胞嵌合的发生与排斥反应无明显相关性(P>0.05)。结论FISH方法可用于研究性别错配移植受者中血管内皮细胞的起源,肾脏移植物中血管内皮细胞可以被受者来源的内皮细胞所替代,内皮细胞嵌合与排斥反应的发生无明显关系。

供体骨髓输注减轻同种肝移植排斥反应

目的:研究非清髓性骨髓移植在同种肝移植免疫反应中的作用及其意义。方法:动物实验为同种大鼠肝移植:Ⅰ组为W istar→W istar同基因对照组;Ⅱ组为SD→W istar急性排斥组;Ⅲ组为SD→W istar环孢素A(cy-c losporine A,CsA)肌肉注射处理组;Ⅳ组为SD→W istar术前1周大剂量供体骨髓细胞输注处理组。用术后一般状态、生存时间、病理学排斥分级、肝标本中IL-2、IFN-γ的表达以及胸腺内嵌合体的检测等手段,确定不同处理组移植后的排斥反应情况及机体的免疫状态。结果:Ⅰ组大鼠术后无排斥反应发生;Ⅱ组大鼠术后9-13 d内全部死亡,中位存活时间(10.7±0.5)d,排斥反应明显;Ⅲ组大鼠仅见轻度排斥;Ⅳ组自然存活亚组6只大鼠4只长期存活(>100 d),排斥分级明显低于Ⅱ组(P<0.05),与Ⅱ组相比,Ⅳ组IL-2、IFN-γ蛋白的表达均明显下调。在骨髓输注15 d后,用PCR法在雌性W istar大鼠受体胸腺内可检测到雄性SD大鼠供体特异性的Y染色体(Y-chromosom e-spec ific sequence,Sry)基因片段。结论:供体骨髓输注可形成供受体细胞的嵌合状态,可降低同种异体肝移植的排斥反应,延长受体生存时间。

异基因骨髓细胞联合淋巴细胞输注抑制结肠癌肝转移

背景:异基因造血干细胞移植对结肠癌术后肝转移的预防和治疗在临床以及动物实验中鲜有研究报道,结肠癌术后肿瘤负荷较小,此时建立混合型嵌合体可望取得一定疗效。目的:探讨异基因造血干细胞移植对结肠癌肝转移的抑制作用及其对嵌合体和移植物抗宿主病的影响,并对其抑瘤机制进行研究。方法:BALB/c×C57BL/6杂交一代CB6F1小鼠保脾注射CT-26大肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型,随机分为4组:对照组、环磷酰胺组、全相合脾细胞加骨髓细胞移植+环磷酰胺组(全相合移植组)、半相合脾细胞加骨髓细胞移植+环磷酰胺组(半相合移植组),每组8只。取自C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠骨髓及脾细胞混合后行尾静脉注射,之后接受腹腔注射环磷酰胺进行非清髓性预处理,再输注供鼠淋巴细胞。观察各组小鼠生存时间、肿瘤肝转移以及移植物抗宿主病发生情况;流式细胞仪进行嵌合体分析,ELISA方法测定血浆白细胞介素2、γ-干扰素、白细胞介素4、转化生长因子β水平。结果与结论:(1)半相合移植组小鼠生存期明显延长,结肠癌肝转移抑制率明显增高,抑瘤率明显增加,与环磷酰胺组及全相合移植组相比,差异有显著性意义;(2)半相合移植组小鼠混合细胞移植7 d后,供鼠细胞嵌合率逐渐增加;至移植后28 d,供鼠细胞基本取代受鼠细胞,嵌合率达99%以上;(3)半相合移植组小鼠的移植物抗肿瘤效应明显增强,但未出现严重的移植物抗宿主病症状,且小鼠血浆白细胞介素2、γ-干扰素水平较其他组明显升高,转化生长因子β水平明显降低,而白细胞介素4水平无明显差异;(4)结果表明,小鼠经环磷酰胺非清髓处理的异基因骨髓细胞联合淋巴细胞移植后嵌合率明显增加,伴随产生了明显的移植物抗肿瘤效应,其对结肠癌肝转移具有抑制作用。血浆白细胞介素2、γ-干扰素、转化生长因子β水平变化与肿瘤生长抑制是有关联的。

半相合细胞移植对CT-26结肠癌荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:探讨半相合细胞移植的移植物对CT-26结肠癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及潜在机制。方法:取C57BL/6小鼠的脾细胞和骨髓细胞作为供体细胞;取18只CB6F1小鼠(受体),随机分成对照组、环磷酰胺组和移植组,每组6只,皮下种植小鼠结肠癌CT26细胞建立荷瘤小鼠模型;然后分别于尾静脉注射0.2 mL生理盐水、环磷酰胺、环磷酰胺+脾细胞+骨髓细胞,连续4周;于不同时间点检测3组小鼠肿瘤体积变化;于2周时取3组小鼠肿瘤、肝脏、小肠和皮肤组织,HE染色观察组织变化;ELISA法检测肿瘤组织中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α和TGF-β含量;流式细胞术检测移植组3 d、2周、4周时小鼠外周血细胞(H-2Kd/b)嵌合率;结果:2周时,环磷酰胺组和移植组小鼠肿瘤体积明显小于对照组(P均<0.01);与对照组和环磷酰胺组相比,移植组肿瘤组织中IL-2、IL-10、IFN-γ与TNF-α含量明显增高(P均<0.05),IL-4和TGF-β含量明显降低(P均<0.05);与移植3 d时相比,2、4周时移植组小鼠外周血中H-2Kb所占比例显著增加(P均<0.01)。结论:C57BL/6(H-2Kb)小鼠来源的脾细胞和骨髓细胞通过改变CB6F1(H-2Kd/b)小鼠肿瘤部位的免疫微环境,进而发挥抗荷瘤模型小鼠结肠癌效应。

肾骨髓联合移植与嵌合体发生及急性排斥反应的关系

目的 研究肾骨髓联合移植与嵌合体发生及急性排斥反应的关系。方法 采用供体骨髓与肾脏联合移植 ,进行 2 4例造血干细胞微嵌合体诱导 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测受者嵌合状态 ,与单纯肾脏移植组 37例比较嵌合发生率及急性排斥反应发生率。结果 随访 1年 ,肾骨髓联合移植组术后嵌合体发生率 (87 5 % ,2 1/ 2 4 )明显高于单纯肾脏移植组 (40 5 % ,15 / 37) ,差异有显著意义 (P 0 0 0 1) ;嵌合阳性组急性排斥反应发性率 (19 4 % ,7/ 36 )与嵌合阴性组 (44 % ,11/ 2 5 )相比差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论 肾骨髓联合移植可诱导嵌合体发生并增加受者对供体器官的免疫耐受 ,降低急性排斥反应发生率 。

肝移植后移植物抗宿主病受者的相关检查结果

目的揭示原位肝移植后移植物抗宿主病（GVHD）相关实验结果，探讨诊断依据及死亡原因。方法对2002年5月2008年5月1013例原位肝移植后临床表现为GVHD的13例患者的血常规、肝功能和微生物学检查结果进行回顾性分析，并对其中5例患者行骨髓细胞学检查、5例行病理检查、4例行细胞因子检测、6例行嵌合体检测。结果13例GVHD患者均表现出白细胞不同程度减少，其中8例极度缺乏；9例患者肝功能大致正常；10例患者血液、胆汁、创口分泌物、粪便和痰细菌培养阴性。4例患者骨髓造血细胞受抑甚至无造血细胞生成，5例患者病理检查结果符合GVHD。4例患者细胞因子检测发现白细胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-2、IL-4在GVHD病程中低表达或无表达；IL-10除1例在GVHD发病前高表达外，其余患者中的表达水平均减低；单核细胞趋化蛋白、血管内皮生长子、IL-6、表皮生长因子和IL-8逐渐增高或持续高表达；肿瘤坏死因子α随病程轻微增高；干扰素γ仅在GVHD发病初期有轻微改变。1例患者检查到嵌合体。结论嵌合体是确诊GVHD可靠但非惟一的依据，还需通过病理学、骨髓象、微生物学、肝功能、血常规及细胞因子检查，综合分析并结合临床表现进行鉴别诊断，骨髓造血功能衰竭导致的感染和出血是死亡的主要原因。

骨髓输注联合阻断共刺激通路延长大鼠皮肤移植物的存活时间

目的探讨骨髓输注联合阻断共刺激通路对大鼠移植皮肤存活的影响及可能机制。方法以Lewis大鼠为受者，皮肤移植前经尾静脉输注供者（BN大鼠）骨髓细胞2×10^8个，并于骨髓输注当天、输注后第2、4、6及8天腹腔注射抗CD25单克隆抗体，同时按照分组要求腹腔注射细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig组）、抗CDl54单克隆抗体（抗CDl54单抗组）以及CTLA4Ig和抗CDl54单克隆抗体（联合处理组），于骨髓输注后第8天移植BN大鼠的皮肤。另以仅行皮肤移植者为对照（对照组）。观察各组移植物抗宿主病（GVHD）的发生情况、外周血中供者细胞嵌合率、T淋巴细胞凋亡率及移植皮肤的存活时间。结果各组均未观察到GVHD的发生。骨髓输注后第7天即可在CTLA4Ig组、抗CDl54单抗组及联合处理组观察到嵌合现象，至第21天时，嵌合率仍维持于一定水平，联合处理组明显高于其它三组（P〈0．01）。骨髓输注后第7及21天，CTLA4Ig组、抗CDl54单抗组及联合处理组间两两比较，T淋巴细胞凋亡率的差异无统计学意义，但均显著高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。CTLA4Ig组、抗CDl54单抗组及联合处理组移植皮肤的存活时间显著长于对照组（P〈0．01），联合处理组移植皮肤存活时间为（16．7±3．1）d，明显长于CTLA4Ig组和抗CDl54单抗组（P〈0．05）。结论骨髓输注联合阻断共刺激通路能够延长移植皮肤存活时间，其机理可能与诱导嵌合和T淋巴细胞凋亡有关。

胆道闭锁母源性微嵌合体的荧光原位杂交分析

目的探讨胆道闭锁与母源性微嵌合体的相关性。方法随机选取2010年1月至2010年8月经手术和病理活检的12例胆道闭锁和8例婴儿肝炎综合征、2例胆总管扩张症的男性肝脏组织石蜡切片中，采用荧光原位杂交染色体计数探针，标记细胞中的X、Y染色体，计数细胞核中2条X染色体的母体细胞。结果在12例胆道闭锁肝脏组织切片中均可发现母体细胞，在10例对照组肝脏组织切片中也可发现母体细胞；在肝脏组织切片的30个可读视野中，母体细胞的数量分别是11±2．59和1．8±1．69（P〈0．01），差异有显著统计学意义。结论胆道闭锁等男性患儿肝脏组织中均可发现数量不等的母源性微嵌合体；肝脏组织中母源性微嵌合体的数量，胆道闭锁显著高于其他肝病患儿；母源性微嵌合体可能与胆道闭锁的发病机制相关。