低温贮藏对脆肉鲩鱼肉肌动球蛋白特性的影响

以脆肉鲩为对象,研究低温贮藏条件对鱼肉肌动球蛋白性质的影响。结果表明:随着贮藏时间的延长,脆肉鲩肌肉中肌动球蛋白溶出量、Ca2+-ATPase活性、巯基和活性巯基含量下降、表面疏水性上升;贮藏温度对蛋白特性的影响显著,贮藏温度越高,Ca2+-ATPase活性和巯基含量越低,表面疏水性越高。

草鱼两个肌肉生长抑制素cDNA克隆、表达及过量表达对胚胎发育的影响

肌肉生长抑制素(MSTN)是抑制肌肉生长和发育的重要生长调控因子。通过cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆草鱼MSTN-1型和MSTN-2型全长cDNA。RT-PCR分析结果表明,MSTN-1在草鱼肌肉、脑和眼中的转录量较高,在肝胰脏、脾脏和心的转录量较低,在肠、腮、性腺和肾中无表达;MSTN-2只在脑和肌肉中有表达。在草鱼胚胎发育的0-36 hpf期间,MSTN-1的转录量较低;在胚胎发育的36-48 hpf期间,其转录量呈逐渐升高的趋势;MSTN-2各时相均无表达,可能因为该基因在草鱼胚胎发育过程中不起重要作用。通过分别显微注射MSTN-1型和MSTN-2型mRNA至斑马鱼1-2细胞期胚胎。结果显示,注射MSTN-1型mRNA过表达可导致斑马鱼体节发生期胚胎的前-后轴拉长,背-腹轴变短,脊索轻微扭曲,以及体节发育受到强烈抑制而不分化等现象。注射MSTN-2型mRNA胚胎早期发育有所延迟并未发生明显变化,但发育至60 h之后尾部明显发生严重弯曲。

海藻糖对草鱼鱼糜冻藏品质的影响

为研究添加海藻糖对草鱼冷冻鱼糜蛋白质变性的抑制效果,首先检测冻藏期(12周)内各组盐溶性蛋白、总巯基、Ca^(2+)-ATP酶活力、羰基含量的变化,发现6%添加量能最大程度地抑制蛋白质的变性,并于冻藏6个月后对基质构特性进行测定,其凝胶强度达3 026g·mm,极显著高于对照组(P<0.01),扫描电镜发现该组鱼糜凝胶超微三维网状结构更为紧实、致密、坚韧。综上表明,6%的海藻糖能抑制草鱼鱼糜蛋白在冷冻过程中的变性,延缓鱼糜冻藏品质的下降,其作为一种潜在的商业鱼糜抗冻剂具有良好的应用前景。

陶粒浮床对草鱼养殖池塘水质和浮游植物的影响

为了探讨陶粒浮床对草鱼养殖池塘浮游植物群落结构的影响,将6个池塘随机分为两组,分别为浮床组和对照组,2013年5—10月对养殖池塘的藻类群落结构和水质因子进行定期采样分析。结果表明:浮床组池塘水体透明度显著高于对照组(P<0.05),养殖后期,浮床组主要营养盐指标显著低于对照组(P<0.05),微生物总数显著高于对照组(P<0.05)。水质理化指标波动范围小,系统稳定性较强。试验期间共检出浮游藻类8门111属179种,其中绿藻93种,蓝藻25种,硅藻23种,裸藻17种,黄藻6种,甲藻5种,金藻5种,隐藻5种。在养殖中后期,陶粒浮床对藻类的种类组成有显著影响,藻类种数明显高于对照组,浮床组和对照组浮游植物数量范围分别为101.95×106—614.95×106 ind./L和151.43×106—612.60×106 ind./L,生物量范围分别为90.79—402.85 mg/L和116.33—831.55 mg/L,到养殖中后期(8月份以后),对照组浮游植物的生物量显著高于浮床组(P<0.05)。绿藻门和蓝藻门的贡献率一直占总密度的90%以上。浮游植物群落呈明显的季节变化,绿藻门呈先降低后升高的趋势,蓝藻门相反。试验初期浮游植物的优势种为栅藻;在试验开始30d后,浮床组栅藻继续保持优势藻的地位,对照组的优势种则变为平裂藻和微囊藻;7—8月份,浮床组和对照组的优势种均为蓝藻门的平裂藻,9月份后优势藻逐渐由栅藻和绿球藻取代。浮床组和对照组藻类多样性指数无显著差异,物种丰富度均呈逐渐下降的趋势,范围为3.16—5.59,Shannon指数和Simpson指数均呈先降低后升高的趋势,范围分别为1.50—2.46和0.54—0.87。陶粒浮床对改善池塘水质、丰富藻类种类组成、降低过高生物量和微囊藻爆发的风险有一定作用。

草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5。抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为κ链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应。选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000;IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子。本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础。

草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备

采用盐析法、重组蛋白A(HiTrapr Protein A Sepharose)亲和层析法分离纯化草鱼血清中的IgM,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较并制备兔抗IgM抗血清。结果表明:33%硫酸铵溶液可以沉淀血清中大部分蛋白,但电泳条带仍较多,其中含有78kD和28kD的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;而rProtein A亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链(78kD)和轻链(28kD)。Western-blot显示,鼠抗人Ig抗体可与78kD及28kD条带发生发应。rProtein A亲和法提纯蛋白的纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯草鱼IgM的有效方法。将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达1:25600的兔抗鱼IgM血清,并测得血清蛋白总量和IgM含量分别为25.87mg和4.5mg,IgM占血清蛋白总量的17.39%。本实验所采用的蛋白A亲和层析法提取草鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。同时本研究所制备的兔抗草鱼IgM血清也为今后的相关研究工作打下基础。

复方中草药制剂对草鱼肝胆综合症的防治研究

试验以患肝胆综合症的草鱼(C tenopharyngodon idellus)种苗为研究对象,选用复方中草药制剂为试验药物,设置3个质量分数分别为0.50%、0.75%和1.00%的复方中草药药饵组,1个不含该复方制剂的常规饲料组,1个青饲料组,饲喂4周;结合组织病理学方法,探讨了草鱼肝胆综合症的病理及复方中草药制剂对该病的治疗效果。结果表明,草鱼病变肝组织出现大片自溶性坏死和弥散性病变,肝细胞核偏移,发生空泡变性和水样变性;0.50%、0.75%和1.00%3个药饵试验组与青饲料和不含药物这2个非药饵对照组中,患病草鱼的成活率分别为60.0%、80.0%、96.7%、36.7%和16.7%。试验组草鱼比对照组草鱼肝胆综合症症状有明显好转,表现为鱼的体色、体表粘液和肝脏形态、色泽、质地恢复正常;背鳍、尾鳍边缘发白以及鳃部淤血、充血现象消失,鳃部粘液明显减少。1.00%试验组草鱼肝脏肝小叶分界清楚,肝细胞之间的界限清晰可见,肝细胞的核膜与核仁容易辨认,肝细胞核位移细胞中部,肝细胞逐渐恢复正常。

草鱼脆化前后肌肉营养成分及其红细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量的比较

对草鱼脆化前后的肌肉营养成分及其红细胞中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)含量进行了测定,结果表明:草鱼脆化养殖后,其肌肉中其他一些营养成分的含量与脆化养殖前基本一致,但粗脂肪和红细胞中G6PD的含量较脆化养殖前明显减少,G6PD差异也达极显著(P<0.01)水平,这说明不同的养殖方式对草鱼的组织化学组成有影响.

脆肉鲩低温相变区热特性的研究

采用差示扫描量热仪,研究脆肉鲩鱼肉在低温相变区的冰点、表观比热和热焓以及NaCl、NaCl与蔗糖混合物添加量对脆肉鲩热特性的影响。结果表明,脆肉鲩鱼肉的冻结相变温区为-12.5～-11℃,熔融相变温区为-1.9～0.1℃,冰点为-0.2℃,冰点的表观比热和热焓值分别为130.56J/g·℃、305.57J/g。随着NaCl、NaCl和蔗糖混合物添加量的增加,脆肉鲩肌肉的相变温区向低温方向移动,冰点的表观比热和热焓值下降。鱼肉中NaCl添加量较低时,添加蔗糖可减缓相变温度的下降,当NaCl添加量大于2%时,添加蔗糖对鱼肉相变区温度的影响不大,NaCl起主导作用。

植物乳杆菌163抑菌物质在草鱼鱼片保鲜中的应用

目的研究植物乳杆菌163发酵上清喷雾干燥产品对草鱼鱼肉的保鲜效果。方法以菌落总数、pH值、挥发性盐基氮、感官评价为鲜度指标,鱼片经不同浓度植物乳杆菌163产品溶液浸泡30 min后,于4℃条件下贮藏,测定不同时间其鲜度的变化。结果经4%植物乳杆菌163产品溶液处理的鱼肉保鲜效果最佳,在4℃条件下贮藏9 d可以将菌落总数控制在对照组的1/10左右,挥发性盐基氮含量比对照组延迟2 d到达国标最高检出限,pH值的变化转折点比对照组延迟2 d出现,气味评价得分从3 d开始显著高于对照组(P<0.05)。此外,经该处理的鱼片的鲜度指标在贮藏过程中基本优于nisin处理组。结论 4%植物乳杆菌163产品处理对草鱼鱼片有良好的保鲜效果,鱼片变质较对照组可延缓约2 d。

草鱼引入对滇池湖体海菜花消亡的影响

1976年,曾经繁盛在滇池的海菜花群落消亡并引起了广泛讨论。该文通过对相关文献的整理和分析,重建了1950—2000年滇池水环境、水生植物与鱼产量变化趋势图,发现滇池外海海菜花消失的时间早于污染爆发,而与滇池鱼产量增加的时间基本一致,并由此提出:滇池外海海菜花群落消失主要归因于20世纪60年代草鱼的过量放养,而围湖造田和后期污染则使海菜花种群难以恢复。

卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼肉片中优势腐败菌的抑菌效果

首先采用传统的分离方法从4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点中分离出3株优势菌株,并对其进行鉴定。随后将这3株优势菌分别回接到4℃有氧冷藏草鱼肉片上,判断其致腐能力。最后,采用滤纸片法测定卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)花叶、花蕾提取物对3株优势腐败菌的抑菌活性。结果表明,4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片货架期终点优势腐败菌为腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、草莓假单胞菌(Pseudomonas fragi)和中间气单胞菌(Aeromonas media),其中腐败希瓦氏菌的致腐能力最强。抑菌实验表明,当加量为20μL时,卷丹百合花叶水提物对腐败希瓦氏菌的抑菌圈直径为32 mm,花蕾60%乙醇提取物对草莓假单胞菌和中间气单胞菌的抑菌圈直径分别达到10 mm和26 mm。因此,可以判断卷丹百合提取物对4℃有氧冷藏草鱼去皮肉片中货架期终点优势腐败菌具有抑菌效果。

鲫鱼、草鱼肠道吸收、转运酪氨酸和脯氨酸的研究

采用同位素示踪法和肠道离体灌流模型研究了鲫鱼和草鱼肠道对酪氨酸(Tyr)、脯氨酸(Pro)的吸收量、吸收速率、跨壁运输量与氨基酸灌流时间和灌流浓度的关系。结果表明:随着Tyr、Pro灌流浓度的增加,鲫鱼、草鱼肠道的吸收速率与其浓度均呈正相关关系。但鲫鱼对Tyr、Pro的吸收转运速度明显高于草鱼。随着鲫鱼、草鱼肠道内Tyr、Pro灌流的浓度逐渐下降,留存于其肠道的两种氨基酸的比例也随之下降,而通过肠道转运到肠道外的比例则逐渐增加,但草鱼转运到肠道外的比例极显著低于鲫鱼(P<0.01)。一般,鲫鱼肠道对Tyr、Pro的总吸收率随着灌流氨基酸浓度的下降而下降,草鱼肠道对Tyr总的吸收率随着灌流氨基酸浓度的下降而呈上升趋势。对Pro的总吸收率以5mmol.L-1组(8.14%)最高。且鲫鱼对Tyr、Pro的总吸收率低于草鱼相应的氨基酸浓度组。

草鱼免疫球蛋白IgM四聚体的分析鉴定

草鱼（Ctenopharyngodonidellus）是我国重要的淡水经济鱼类之一。为了制备有效的抗各种病原体的疫苗，必须对草鱼的免疫应答分子进行分析。IgM是大多数真骨鱼类血清中都存在的一种免疫球蛋白，是主要的介导体液免疫应答的分子，也是有颌类脊椎动物进化过程中最先出现的免疫球蛋白。

响应面优化草鱼发酵工艺条件

利用一株植物乳杆菌为发酵菌种,对草鱼进行发酵.以总酸含量为主要指标,在单因素试验的基础上,运用Design-Expert7 Trial统计分析软件,设计4因素5水平试验,建立加盐量、发酵温度、发酵时间和接种量的二次回归模型,得到草鱼发酵的最优条件.研究结果表明:最优的发酵工艺条件为加盐量5.5%,发酵温度29.5℃,发酵时间25.9h,接种量7.4%,在此条件下发酵草鱼的总酸含量可达15.61‰,且感官评分值达到82.6分.

吡喹酮及其主要代谢产物在草鱼体内代谢动力学研究

[目的]研究吡喹酮及其主要代谢产物在草鱼体内的代谢动力学规律。[方法]运用高效液相色谱法(HPLC),研究淡水草鱼在单次口灌给药10 mg/kg剂量条件下,鱼体各组织中吡喹酮(PZQ)及吡喹酮一羟基代谢物(M1)的药动学差异。[结果]草鱼血浆、肠道、肝脏和肾脏内PZQ在各个时间点的药物浓度存在极显著差异(P<0.01);PZQ在血浆、肠道、肝脏和肾脏的达峰时间分别为1.0、0.5、1.0和1.0 h,而药物峰浓度为0.41、0.45、0.72和0.44 mg/L,M1在血浆、肠道、肝脏和肾脏的达峰时间分别为48.0、0.5、6.0和48.0 h,而药物峰浓度为0.72、0.45、0.42和0.42 mg/g。这表明PZQ在草鱼体内吸收分布快,M1的达峰时间滞后于PZQ。二者达峰浓度相似表明M1是PZQ在草鱼体内主要代谢物。PZQ在血浆、肠道、肝脏和肾脏的消除半衰期(t_(1/2))分别为16.41、4.77、37.16和8.74 h,M1在血浆、肠道、肝脏和肾脏的消除半衰期(t_(1/2))分别为124、71、246和162 h,其消除半衰期明显比PZQ长,说明在鱼体中M1的残留时间比PZQ更长。[结论]在实际生产中,应注意对M1的检测。

磷对草鱼生长性能及肌肉抗氧化特性的影响

本试验旨在评估日粮磷水平对草鱼生长性能及肌肉抗氧化特性的影响。以平均初始体重为(283.15±3.29)g的720条草鱼为试验动物,日粮有效磷水平分别为1.0、2.5、4.0、5.5、7.0、8.5 g/kg,试验共开展8周,以研究有效磷水平对草鱼生长性能、肌肉组成、肉质特征及肌肉抗氧化能力。结果表明:日粮有效磷水平达到4.0 g/kg时,增长率显著提高(P<0.05),日粮有效磷水平达到5.5 g/kg时,血清磷水平显著提高(P<0.05)。8.5 g/kg有效磷组肌肉水分含量最高,4.0 g/kg有效磷组肌肉水分含量最低(P<0.05)。日粮有效磷水平为4.0 g/kg和5.5 g/kg时,草鱼肌肉粗蛋白质含量显著高于其他组(P<0.05)。日粮有效磷水平为5.5~8.5 g/kg时,肌肉粗脂肪含量显著低于1.0~4.0 g/kg g/kg组(P<0.05)。不同磷水平对肌肉剪切力和羟脯氨酸含量无显著影响(P>0.05)。日粮磷补充组显著提高了肌肉灭活羟基自由基、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽-S-转移酶活性和谷胱甘肽含量(P<0.05),而灭活超氧阴离子、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性随日粮有效磷的增加而显著降低(P<0.05)。结论:日粮适宜的有效磷水平可以改善草鱼生长性能、肉质和肌肉的抗氧化能力。

立达霉在草鱼体内的代谢机制研究

[目的]研究立达霉在草鱼体内的代谢机制。[方法]采用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测方法,检测草鱼在立达霉单次口灌200 mg/kg,浸泡9 mg/L剂量条件下,其肝脏组织中立达霉原药含量及代谢产物的种类,研究立达霉在草鱼肝脏组织中的代谢机制。[结果]在口灌组及浸泡组,肝脏组织中的立达霉以原药(M0)为主,高于75.00%;立达霉在草鱼体内代谢产物主要有4种,分别为代谢物N-(2-羧基-6-苯甲基)-N-(甲氧乙酰基)丙氨酸、N-[(2-羟甲基)-6-甲苯基]-N-(羟乙酰基)丙氨酸、N-(2,6-二甲苯基)-N-(羟乙酰基)丙氨酸和N-(2-羟甲基-6-苯甲基)-N-(甲氧乙酰基)丙氨酸甲酯,各代谢产物所占比例均小于10.00%。[结论]立达霉在草鱼肝脏组织中残留应以立达霉原药作为残留检测标识物。

五种植物免疫增强剂对草鱼非特异免疫力的影响

在水温20～26℃下,用网箱饲养法研究了绿原酸(A组)、枸杞多糖(B组)、金丝桃素(C组)、黄芪多糖(D组)、植物血凝素(E组)对平均体重43克草鱼(Ctenopharyngodon idellus)血清超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)及过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果显示,基础饲料中添加0.165、0.33、0.66g·kg-1的枸杞多糖;0.165、0.33、0.66g·kg-1的金丝桃素;0.165、0.66g·kg-1黄芪多糖;0.1、0.2g·kg-1绿原酸的试验组,超氧化物歧化酶的活力比对照(O组)显著增强(P<0.05)。但在含免疫增强剂的试验组间差异不显著。当饲料中添加0.4g·kg-1绿原酸的试验组,超氧化物歧化酶极显著提高(P<0.01)。而碱性磷酸酶、过氧化氢酶试验组与对照组无显著差异。只是金丝桃素、绿原酸使碱性磷酸酶活性有增强的趋势;植物血凝素使过氧化氢酶的活性有升高的程度。60d的饲养表明,饲料中添加适量的枸杞多糖、金丝桃素、绿原酸及黄芪多糖可以显著提高草鱼的超氧化物歧化酶活性,对增强草鱼的非特异性免疫功能具有重要作用。

草鱼cyclin G1基因的克隆、鉴定及适应性进化分析

本研究从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝肾cDNA文库中克隆到草鱼cyclin G1基因。测序结果表明,草鱼cyclin G1全长cDNA为2118bp,使用ORF finder推译其开放阅读框为第256bp～第1155bp,编码299个aa,SMART在线软件预测其中N端第57个aa～第143个aa为细胞周期蛋白盒。同源性比对分析显示cyclin G1在鱼类中同源性极高,其中草鱼cyclin G1与斑马鱼的同源性为90%。通过PAML软件的密码子替换模型进行适应性进化分析,结果表明cyclin G1编码蛋白的26A、171A和225K氨基酸位点受到正选择作用。本研究为进一步了解草鱼cyclin G1结构功能与分子演化打下基础。