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人端粒酶催化亚单位启动子驱动的EGFP真核表达载体的构建及在肺癌细胞的表达 被引量:11
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作者 朱圣明 王艳萍 +2 位作者 陈晓禾 唐小军 肖文 《医学研究生学报》 CAS 2007年第2期123-127,I0002,共6页
目的:构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体,研究其调控EGFP在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:从含hTERT启动子序列的重组质粒pGL3-hTERTp上,酶切获取约1100bp的启动子片段,克隆至无启动子的EGFP... 目的:构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体,研究其调控EGFP在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:从含hTERT启动子序列的重组质粒pGL3-hTERTp上,酶切获取约1100bp的启动子片段,克隆至无启动子的EGFP质粒载体pEGFP-1的多克隆位点中,构建pEGFP-hTERTp真核表达载体。用含有巨细胞病毒(CMV)启动子的质粒pEGFP-N1作为阳性对照,pEGFP-1作为阴性对照,脂质体转染法分别转染人肺癌细胞95D,NCI-H446,A2,A549,LTEP-a-2,YTMLC和人正常细胞MRC-5,荧光显微镜下观察各细胞中EGFP转录表达情况。结果:双酶切和单酶切均显示载体pEGFP-hTERTp构建成功。细胞转染结果显示:在转染了pEGFP-hTERTp质粒的肺癌细胞中EGFP都有不同程度的表达,而在MRC-5中无EGFP表达;转染pEGFP-N1的肺癌细胞和正常细胞中均可清晰地观察到EGFP强荧光表达。结论:hTERT启动子能调控EGFP在肺癌细胞中靶向性转录表达。CMV启动子调控的EGFP在肺癌细胞和正常细胞中的表达不具有特异性。hTERT启动子有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的调控元件。 展开更多
关键词 人端粒酶催化亚单位 启动子 肺癌 靶向表达 绿色荧光蛋白
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重组1和2型腺相关病毒载体在小鼠心脏转导研究 被引量:1
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作者 米亚非 李小鹰 +2 位作者 王教辰 付治卿 周声安 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2007年第4期255-257,共3页
目的探讨重组1和2型腺相关病毒(rAAV1和rAAV2)载体向小鼠心脏转导效果。方法14只昆明小鼠应用经腹心包腔内注射术,分别将携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)、荧光素酶(LUC)报告基因的rAAV1(rAAV1-EGFP组6只,rAAV1-LUC组1只)r、AAV2(rAAV2-EGFP... 目的探讨重组1和2型腺相关病毒(rAAV1和rAAV2)载体向小鼠心脏转导效果。方法14只昆明小鼠应用经腹心包腔内注射术,分别将携带增强绿色荧光蛋白(EGFP)、荧光素酶(LUC)报告基因的rAAV1(rAAV1-EGFP组6只,rAAV1-LUC组1只)r、AAV2(rAAV2-EGFP组6只,rAAV2-LUC组1只)分别转导入小鼠的心包腔内,使用共聚焦显微镜观察EGFP在心肌的表达,冷光CCD相机体内监测LUC在心肌表达。结果rAAV1-EGFP组绿色荧光出现于心肌组织全层;rAAV2-EGFP组绿色荧光仅局限于心外膜下少数心肌细胞。rAAV1-EGFP组小鼠心肌细胞的表达范围和强度优于rAAV2-EGFP组。rAAV1-LUC组小鼠心肌组织表达强度、持续表达时间优于rAAV2-LUC组。结论在小鼠心脏中,rAAV1是一种比rAAV2更为有效的转基因载体。 展开更多
关键词 依赖病毒 绿色荧光蛋白质类 荧光素 转染
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Fluorescence Tracking of Exogenous DNA in Genetic Transformation of the Chinese Oak Silkmoth Antheraea Pernyi via Sperm-Mediated Gene Transfer 被引量:1
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作者 刘丹梅 李文利 《Journal of Donghua University(English Edition)》 EI CAS 2014年第4期391-395,共5页
Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( ... Exogenous DNA expressing green fluorescent protein( GFP) and labeled with fluorescein isothiocyanate( FITC) was used to transform the Chinese oak silkmoth Antheraea pernyi( A. pernyi)via sperm-mediated gene transfer( SMGT). Sperms entry into the female reproductive system and eggs were observed using fluorescence microscopy. The ability of A. pernyi sperms to uptake exogenous DNA was confirmed,and transfer of the exogenous DNA was shown by GFP expression in the transgenic eggs. Our result suggested that SMGT could also be used to directly generate transgenic A. pernyi expressing functional genes of interest. 展开更多
关键词 Antheraea pernyi(A.pernyi) exogenous DNA fluorescein isothiocyanate(FITC) label green fluorescent protein(GFP) sperm-mediated gene transfer(SMGT)
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