响应曲面法优化灰树花水溶性多糖提取工艺的研究

在单因素试验的基础上,利用响应曲面法对灰树花多糖提取工艺参数进行优化研究。响应面分析结果表明,提取温度、提取时间以及水料比与响应值灰树花多糖得率存在显著的相关性,通过典型性分析得到优化灰树花多糖提取条件:提取温度为89.7℃;时间2.48h;以及水料比31.1:1,提取两次,在此条件下灰树花多糖提取得理论值达到10.62%,验证试验条件下实际最大多糖得率为(10.13±0.7)%。

灰树花多糖的超滤分离及免疫活性研究

目的:从灰树花子实体中提取分离灰树花多糖并进行免疫活性检测。方法:热水和稀碱提取灰树花子实体多糖后,利用乙醇沉淀法和超滤法获取灰树花水溶性及碱溶性子实体多糖,通过小鼠脾淋巴细胞转化增殖实验检测免疫活性。结果:利用乙醇沉淀法获得水溶性及碱溶性多糖两个组分,得率分别为6.67%和5.88%,利用超滤法获得分子量范围分别为大于1000kD、100～1000kD以及10～100kD的共六个灰树花子实体多糖组分,其中水溶性多糖组分GFP100、GFP10和GFP1的得率分别为3.99%、0.51%和3.94%,碱溶性多糖组分GFAP100、GFAP10和GFAP1的得率分别为2.42%、2.32%和3.04%,利用超滤法获得的六个多糖组分均显示了显著的促进小鼠脾淋巴细胞转化增殖作用。结论:超滤法应用于灰树花子实体多糖的分离要优于传统乙醇沉淀法,该法工艺简便,多糖得率更高,且不损害其活性。

中药天麻成分对灰树花胞外多糖合成及相关关键酶的影响

采用液体深层发酵方式研究中药天麻对灰树花胞外多糖合成的影响,并用苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果表明:天麻添加量为7g/L时能显著促进灰树花胞外多糖产量的增加。此时灰树花产胞外多糖产量平均为3.91g/L,与对照组的3.72g/L相比提高了5.1%。同时,对灰树花多糖合成代谢途径中的两个重要酶的酶活力进行测定。说明添加天麻成分发酵后,磷酸葡萄糖异构酶酶活力有所降低,磷酸葡萄糖变位酶酶活力则无明显变化。

蒽酮-硫酸法测定泰山灰树花中海藻糖含量的研究

对蒽酮-硫酸法测定灰树花菌体海藻糖含量的条件进行了研究。结果表明,样液与蒽酮-硫酸试剂加入量的体积比为1:2,加热显色5min,625nm比色,测定灰树花菌体中海藻糖含量为3.88mg/ml,平均回收率为106.5%,稳定性和重复性较好。该方法简便、快速、准确,适用于菌体海藻糖含量的测定。

灰树花子实体多糖的降血糖活性和对α-葡萄糖苷酶活性的影响

研究灰树花子实体多糖MT-α-glucan对自发性2型糖尿病模型KKay小鼠降血糖作用的量效关系和时效关系,对KKay小鼠空腹血糖、口服葡萄糖耐量、糖原合成的影响,以及对α-葡萄糖苷酶活性的影响。结果表明:随着MT-α-glucan给予剂量的增加,降血糖作用逐渐增强,以112、225、450mg/kgbw剂量组降血糖作用较为明显;MT-α-glucan 450mg/kgbw单次给予后8h降血糖作用最为明显,随后血糖水平逐渐恢复,给予后24h恢复到给予前水平。MT-α-glucan(450、150mg/kgbw)多次给予具有降低KKay小鼠空腹血糖、提高口服葡萄糖耐量、促进糖原合成的作用,并可使小鼠24h内随机血糖维持在较低的稳定水平。而且,MT-α-glucan对α-葡萄糖苷酶活性具有较强的抑制作用。因此,MT-α-glucan具有明显的降血糖活性,作用机理与抑制α-葡萄糖苷酶活性有关。

灰树花中铁的存在形态分析

优化灰树花中铁元素的提取工艺,对灰树花水提液中微量元素铁进行含量测定及形态分析,分别用0.45μm滤膜、D101大孔吸附树脂,将灰树花水提液中铁分为悬浮态和可溶态、有机态和无机态,并对有机态中蛋白结合态、多糖结合态进行分离。结果表明:灰树花中铁元素最佳提取工艺为温度100℃、时间120min、料液比1:60(g/mL),在此条件下,灰树花中铁提取率(水提液)约72.7%,其中可溶态大约占总量的64.4%,悬浮态大约占总量的8.3%;可溶态中无机态约占总量的39.0%,有机态约占总量的26.1%;有机态则多以蛋白结合态和多糖结合态形式存在,分别占到了总量的12.8%和10.5%。

灰树花多糖的分离纯化及体外抗肝癌作用研究

利用超声破碎、水提醇沉、葡聚糖凝胶过滤层析等方法,对灰树花子实体多糖进行分离得到多糖组分GFD-1。高效液相色谱分析表明,GFD-1是分子量为29.574 k Da的多糖均一组分。利用显色试验、紫外光谱、红外光谱及原子力显微镜分析,GFD-1为不含还原性羰基、酚羟基、游离或结合蛋白质、核酸类物质的非淀粉类α-吡喃多糖,其糖链高度在0.5 nm^1 nm。GFD-1能够显著抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并呈剂量依赖关系,IC_(50)为94μg/m L,但其对于正常肝脏细胞L-02无明显影响;通过AO/EB双染,经GFD-1作用的HepG2细胞呈典型凋亡形态学特征;经流式细胞仪分析,HepG2细胞被阻遏在S期。上述结果可知,初步确定分离纯化的GFD-1是一种具有抗肿瘤活性的均一多糖组分,为开发天然抗肿瘤物质和进一步分析其抗肿瘤作用机制提供了参考。

灰树花gpd-GF启动子的克隆与表达载体的构建

根据已经报道有强启动子活性的香菇gpd启动子设计引物,从灰树花基因组PCR扩增获得大小分别为1018,615bp的2个片段gpd-GF1和gpd-GF2。通过DNA序列测定得知二者的大小分别为1018,615bp。经NCBI中的BLASTN比较,gpd-GF1,gpd-GF2与已报道的香菇中克隆的gLeGPD基因上游序列的同源性分别为96%,98%。通过启动子预测软件分析,结果表明,gpd-GF1和gpd-GF2含有多个顺式作用元件如TATAbox,GATAbox,CAATbox等,初步证实gpd-GF1,gpd-GF2可能有较强的启动子活性。将gpd-GF1,gpd-GF2分别与切除CaMV35S启动子的pCAMBIA1301大片段进行亚克隆,构建成表达载体pCBgpdGF1和pCBgpdGF2。

3个灰树花品种的菌种生物差异性比对

对国内3个不同地域来源的灰树花品种进行了菌种拮抗性实验、菌丝体蛋白电泳图谱分析、酯酶同工酶分析、ITS序列比对分析及部分农艺性状分析,结果显示,这些分析手段能从不同生物学层次展现出3个灰树花品种的菌种差异性,分析结果也具有一定协调性。

灰树花菌丝体多糖的硫酸酯化及其降血脂作用

对灰树花菌丝体的水不溶性多糖进行硫酸酯化,得到硫酸酯化多糖(S-GF),并对其进行降血脂活性研究.通过对S-GF的红外光谱分析,其中两个特征吸收峰(1.236和823.cm-1)的出现表明硫酸酯化反应已经完成.S-GF中硫酸根质量分数为17.7%.通过Sephadex G50柱层析图谱,证明S-GF为均一组分.小鼠实验表明,S-GF明显反映出对小鼠血脂的调节作用.在实验条件下给药剂量为50.mg/(kg.d)时,高血脂症模型小鼠可达到治愈的程度.S-GF呈现出明显的降血脂作用.

泰山灰树花液体深层发酵培养基的优化及海藻糖的提取

本文对泰山灰树花液体发酵培养基的配方进行了优化,并对灰树花中海藻糖的测定条件和提取工艺进行了初步研究。结果表明,优化的发酵培养基组成为:马铃薯200g/葡萄糖40g,麸皮25g,板栗壳150g,磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,水1L,菌丝体生物量为15.1g/L。用0.2%蒽酮-硫酸溶液(料液比1:4)测定菌体中海藻糖含量的条件:吸收波长625nm,加热时间2min。海藻糖提取的工艺参数是:冰水浴,0.5mol/L三氯乙酸20mL,提取次数为3次,每次提取时间20min,共从1.0g湿菌丝中提取到14.522mg海藻糖。

灰树花胞外多糖特性研究进展

灰树花是一种珍贵的药、食两用蕈菌,灰树花多糖是其主要的活性成分,具有增强免疫功能、抗肿瘤、抗HIV等广泛的生物活性。本文对灰树花胞外多糖的结构、分离纯化和生物活性进行了综述,分析了国内外当前的研究现状,对灰树花胞外多糖的研究做了展望。旨在为灰树花胞外多糖的深入研究和开发利用提供参考。

灰树花对铬生物富集作用的探讨

本课题对灰树花的耐铬和富铬特性进行了研究。结果表明,灰树花的耐铬和富铬能力都很强。在加铬量为1～5mg/L的固体培养基上,菌丝均能生长,当加铬量超过4mg/L时,菌丝生长受到一定影响。采用B和C两种不同培养基液体深层培养,前者菌丝生物量小,但富集量却高于后者,当铬质量分数达到5mg/L时,菌丝体对铬的富集量最高,达31.398μg/g。

灰树花胞外多糖发酵条件优化研究

灰树花是一种营养丰富的药食两用真菌,其胞外多糖是一种具有抑制肿瘤、抗HIV、调节免疫等生理活性的真菌多糖。研究了碳源、氮源、生长促进剂和无机盐对灰树花产胞外多糖的影响,结果表明,灰树花产胞外多糖较佳的培养基组合为每升培养基添加葡萄糖50 g、黄豆粉40 g、豆油1 g、KH2PO4 4 g、MgSO4 2 g,每升培养基可得到灰树花胞外多糖3.78 g。

采用动态热回流法制备莲花菌多糖

以莲花菌子实体为材料,采用动态热回流法制备莲花菌多糖。通过单因素试验和正交试验研究原料颗粒粒径、提取温度、溶液pH、液料比、溶剂回流率、提取时间对莲花菌多糖提取效果的影响,并将动态热回流法与传统热水浸提法进行比较。研究结果表明:动态热回流法制备莲花菌多糖的最佳工艺条件是:原料颗粒粉碎度为3 500μm,提取温度为95℃,溶液pH为6.5,液料比为6.5-1.0,溶剂回流率为15%,提取时间为90 min,在此条件下,粗多糖得率可以达到13.98%,比传统热水浸提法提高16.1%,提取时间比传统法减少了3/4,溶剂用量比传统法减少了7/8。该方法可用于莲花菌多糖的规模化制备生产,亦可为其他真菌多糖及相关产品的大规模工业生产提供借鉴。

响应面法优化以中药为基质的灰树花菌丝体发酵培养基

以山药、莲子、黑米、党参、薏苡仁、枸杞6味药食两用中药培养基的灰树花发酵,并运用Box-Behnken试验设计及响应面分析对培养基进行优化。结果表明:枸杞、党参适合于作碳源,莲子适合于作氮源;以枸杞、莲子为基质的最佳发酵培养基为:枸杞质量浓度23.5g/L、莲子质量浓度4.3g/L、葡萄糖质量浓度28.8g/L,在此条件下,灰树花菌体生物量可达16.937g/L。

加镧液体培养灰树花富集有机铬的研究

本文在部分文献的基础上研究了稀土元素之一的镧元素(La)对灰树花菌丝体富集有机铬的影响。研究发现镧能有效促进灰树花富集有机铬,用灰树花菌丝体的优化培养基(以1 L计,含5 mg CrCl3?6H2O、100 mg La(NO3)3、300 g马铃薯、36 g葡萄糖、35 g麸皮)培养灰树花菌丝体,灰树花菌丝体中的有机铬的产量为25.61μg/g,比未加镧元素的增加18.33μg/g。

灰树花菌丝体发酵酒工艺研究

以灰树花菌丝体发酵液为原料研制灰树花菌丝体发酵酒,在单因素实验研究的基础上,采用L9(34)正交实验设计对其发酵工艺条件进行了优化。结果表明,酒精发酵的优化工艺为酵母菌接种量1.0 g/L、发酵温度22℃、初始pH4,适宜的澄清方法为超滤澄清,澄清度达到78.7%,得到的灰树花菌丝体发酵酒产品色泽浅黄,澄清透明无明显杂质,口感柔和醇厚,酒精度11.75%vol,灰树花多糖含量1.56 g/L。

灰树花斜面母种培养基的优化

试验在传统培养基基础上,分别从葡萄糖单因素培养、合成培养基正交培养与半合成培养基正交培养3个角度或层次对灰树花(Grifola frondosa)母种斜面培养基进行了优化探讨。结果表明,适合灰树花菌丝生长的最佳斜面培养基配方为土豆200g、麸皮100 g、玉米面100 g、板栗壳100 g、葡萄糖20 g、林地土20 g、蛋白胨1 g、琼脂20 g、CaCl2 0.1 g、KH2PO41 g、FeSO4 1 g、MgSO4 0.5 g、ZnSO4 0.01 g、水1L、pH值6.0。该配方既可为灰树花母种的制备提供依据,又能为灰树花的大面积栽培以及为实现工业化大生产而进行的液态发酵培养奠定基础。

不同产地灰树花多糖含量测定

目的测定不同产地灰树花多糖含量，为灰树花多糖的综合开发利用提供科学依据。方法采用蒽酮-硫酸法，正交试验确定最佳工艺，测定不同产地灰树花粗多糖、可溶性糖含量。结果18批不同产地灰树花粗多糖含量8．17％～34．82％，可溶性糖含量27．46％～55．65％。结论不同产地灰树花多糖含量具有显著差异。