FAST BREEDING OF GROUND-COVER CHRYSANTHEMUM

The experiment of tissue culture of ground-cover chrysanthemum with the tip of shoots as the explant was made. On MS medium, with adding BA 3.0 mg/ L and NAA 0.01mg / L, the adventitious buds had the best multip1ication result. The best result for taking roots was obtained on 1 / 2 MS medium with adding NAA 0.1 mg / L. It had good result and a high survival rate for transplanting the young test-tube plants into soil whcn they were 3-4 cm high,with 5-7 rootlets (0.5- 1.0 cm in length). 30% of edible powdered sugar was uscd to replace sucrose in order to lower thc cost and the same results were obtained.

茶用地被菊新品种的活性成分测定与感官评价

研究地被菊新品种的茶用价值,建立可靠的茶用菊综合测评体系,有助于选育兼有高观赏性、高风味水平、强抗逆性和长花期的菊花品种。目前关于茶用菊品质评价的文献报道以营养成分测定为主,缺少对综合品质的评价。本研究按照茶用菊鲜花品质筛选标准,筛选了‘TC15’、‘TC3’、‘TC40’、‘TC43’、‘TC61’、‘TC12’、‘TC31’和‘TC10’等8个新品种,烘制成茶用样品。以2个传统茶用菊品种(杭白菊、黄山贡菊)为对照,对10个样品的活性成分进行测定,包括总黄酮、总多酚、可溶性糖和水浸出物等指标。组织并培训专业的感官评价小组,按照小组制定感官品质(外观和风味)评分标准,对10个样品的干花和冲泡后的茶汤、汤花进行评价。通过与杭白菊、黄山贡菊比较活性成分含量和感官品质,综合评价得出新品种‘TC43’、‘TC3’和‘TC10’具有较高的茶用价值。

16个地被菊品种的苗期抗寒性评价

为研究地被菊抗寒性,加强地被菊在三北地区的应用推广,为抗寒地被菊品种筛选提供依据,以16个地被菊良种苗期叶片为材料,对其进行低温胁迫后测定叶片相对电导率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,使用Logistic方程进行拟合,计算各地被菊品种半致死温度,并对地被菊的抗寒指标进行综合评价,得到16个品种的抗寒性排序。结果表明:大部分品种的SOD活性随着胁迫程度的加重而降低,但是抗寒性强的品种在胁迫后期SOD活性下降趋势要明显低于抗寒性差的品种;MDA含量与地被菊抗寒性呈负相关。采用隶属函数法对地被菊的抗寒指标进行综合评价,计算得‘毛香玉’半致死温度为最低;参试苗期地被菊苗期抗寒性排序为:‘毛香玉’>‘重阳红’>‘成双’>‘中秋红’>‘金乳荷’>‘新玉’>‘金银菊’>‘橙黄金’>‘1903’>‘醉绣球’>‘紫堇早’>‘美矮粉’>‘1902’>‘繁白露’>‘洒金红’>‘中秋白’。综上所述,‘毛香玉’苗期半致死温度为最低,为-10.66℃,抗寒性最好。

地被菊花幼苗耐旱性评价方法研究

选用地被菊品种White Snow 10 叶龄扦插生根幼苗进行自然失水胁迫和PEG 胁迫处理。划分了不同处理萎蔫指数,测定了鲜样质量保持率、叶片水势、叶片溶质渗透势、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明,萎蔫指数划分的主要形态特征因胁迫方法而异。自然失水胁迫8 h 为幼苗恢复极限;在恢复极限内复水,幼苗鲜样质量保持率、叶片水势、MDA 含量和SOD 以及CAT 活性的变化规律显著。20%PEG 胁迫4 h 为恢复极限;复水期间的鲜样质量保持率、叶片溶质渗透势、MDA 含量和SOD 活性的变化规律显著。综合上述,这2 种方法都可以用于地被菊花幼苗耐旱性快速评价;不同的胁迫处理方式可利用的水分状况和生理指标存在一定的差异。

地被菊花Fall Color体细胞胚途径再生、遗传转化及转基因植株的抗寒性检测

【目的】培育耐寒性强的地被菊花[Dendranthemagrandiflorum(Ramat.)Kitamura]新材料。【方法】以FallColor品种的幼嫩叶片为外植体,探讨胚状体诱导所需的植物生长调节剂浓度和诱导培养时间等条件。【结果】叶片外植体在添加0.75mg·L-12,4-D的诱导培养基上诱导15d,再进行分生培养,不仅能够诱导胚性愈伤组织形成,还能够诱导胚状体发生,并进一步诱导芽再生,最终93%的供试外植体通过胚状体途径获得芽的再生。通过根癌农杆菌介导法将35S启动子驱动的逆境诱导转录因子DREB1A基因导入该品种。转化株在低温下的种子发芽率、扦插苗生长以及植株露地越冬生长状况等方面都明显优于对照。【结论】本研究成功地建立了地被菊花FallColor体细胞胚再生途径,并成功地获得了具有越冬耐性的地被菊花转化株系。

菊花新品种——地被菊系列

地被菊新品种‘七仙女’、‘秋意’、‘玉满堂’、‘天坠玉露’、‘金合欢’、‘恒星’和‘飞天’经自交种子辐射诱变选育获得.花期株高40～50 cm,植株具匍匐生长特性,长势旺盛,分枝性强,冠幅均匀且较大,花色艳丽,初花期10月底,盛花期11月上旬,营养生长期叶色浓绿均匀,适合园林地被应用.

地被菊花粉生活力测定及影响因素研究

花粉生活力的高低直接影响地被菊杂交育种效率的高低或成败。快速准确测定不同地被菊品种的花粉生活力,可为正确选择杂交组合和授粉时间等提供参考依据,也是保证杂交育种顺利进行的关键。采用ME3液体培养基为基本培养基,探讨了地被菊花粉离体萌发的培养时间、适宜培养基和影响花粉生活力的主要因素,结果表明:花粉离体培养后90 min,花粉萌发率达到最高值;地被菊花粉萌发的适宜培养基为ME3+蔗糖100 g/L+PEG4000 150g/L或ME3+蔗糖150 g/L+PEG4000 150 g/L,150 g/L的PEG600和250 g/L的PEG4000也对花粉萌发有一定促进作用;温度是影响地被菊花粉萌发的重要因素,其中10,15,20℃是地被菊花粉萌发的适宜温度,高温会抑制花粉萌发;同一天内不同时间段采集的花粉生活力不同,其中13:00采集的花粉生活力最高,11:00-15:00也有较高的生活力。

地被菊直接体细胞胚发生研究

该文建立了地被菊品种‘玉人面’直接体细胞胚受体体系。试验以‘玉人面’叶片为外植体,研究了培养基、生长调节剂等因子对其直接体细胞胚诱导的影响,同时还进行了抗生素敏感性试验。结果表明：①在相同浓度下,KT诱导体胚的效果优于6-BA;②体胚诱导培养基为MS＋KT 2.0 mg/L＋2,4-D 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L,诱导10 d后,转入去除2,4-D的体胚发育培养基MS＋KT 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L中培养30 d,体胚发生率最高为93.0%,平均每外植体分化的体胚数为13.6个;③MS基本培养基对‘玉人面’体胚发生的效果优于N6、B5培养基;④‘玉人面’直接体胚发生途径的基因转化的卡那霉素选择压为10 mg/L,头孢霉素前期（3-4周内）选择压为300 mg/L,后期（4周后）为100 mg/L。

3个地被菊品种香气成分的分析

研究地被菊的香气成分及其日变化规律。采用活体植株动态顶空套袋-吸附采集法与TCT-GC/MS(热脱附冷阱-气相色谱/质谱联用)分析技术相结合,对东林瑞雪、玉龙和向阳3个地被菊品种花朵的香气成分进行分析,用总离子流峰面积归一化法对香气成分在总挥发物中的相对含量进行比较,对东林瑞雪一天中3个不同时段花朵香气成分的变化情况进行研究。结果表明:东林瑞雪花朵香气成分有13种,玉龙有6种,向阳有14种;樟脑,莰烯和-α蒎烯为3种地被菊共有的香气成分;樟脑在3个品种中的相对含量均超过17%;其他香气成分的相对含量因品种不同差别很大。东林瑞雪主要香气成分中,莰烯含量随时间推移逐渐下降,樟脑含量先下降后上升,其他香气成分均呈先升高后下降的趋势。3个地被菊品种的香气成分不同,其中有3种共有的香气成分;东林瑞雪各主要香气成分在一天中的不同时段均稳定存在,但其相对含量呈明显的日变化。

地被菊匍匐性的遗传分析与RAPD标记研究

【目的】探讨地被菊株型匍匐性的遗传控制,并寻找与匍匐性连锁的RAPD标记,为匍匐型地被菊新品种选育、分子标记辅助育种和匍匐性相关基因的克隆奠定基础。【方法】以盆栽小菊品种‘早意大利红’为母本,地被菊品种‘03(6)-12’为父本构建F1群体,从F1中选取株型表现为匍匐、直立和中间型的单株各1株,分别自交,构建F2群体,并以选取的3个类型F1单株为母本与‘03(6)-12’回交,构建BC1群体。以主枝分枝角度作为株型划分依据,统计每个群体中不同株型分离比,推测地被菊株型控制相关基因特点。此外,以F1分离群体为试材,采用集团分离分析法(bulkedsegregantanalysis,BSA)构建株型匍匐/直立基因池,利用200个RAPD随机引物筛选与地被菊匍匐基因相连锁的分子标记。【结果】通过遗传分析和χ2检验表明,地被菊匍匐/直立特性由1对不完全显性主效基因控制,同时存在微效修饰基因。筛选出1个与地被菊匍匐性状控制基因相连锁的分子标记A-10555。经过重复性验证和群体单株验证,该标记与地被菊株型匍匐/直立位点遗传距离为7.96cM。【结论】以主枝分枝角度作为株型的划分标准是可行的,通过F1、F2和BC1分离群体能对地被菊株型控制位点进行有效分析。获得的分子标记与株型匍匐/直立位点的遗传距离小,能用于辅助育种。

干旱胁迫对地被菊光合生理特性及水分利用率的影响

为研究地被菊的抗旱能力,采用盆栽控水法进行干旱处理,研究不同程度干旱胁迫对地被菊光合生理特性及水分利用率的影响。结果表明,随着胁迫程度的加深,地被菊净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)呈下降趋势,轻度干旱胁迫下净光合速率与对照差异不显著。而胞间CO2浓度(Ci)在轻度干旱条件下下降,重度干旱胁迫下提高30.6%。水分利用率在不同程度干旱胁迫下均升高,中度干旱胁迫下为对照的1.34倍。同时,叶绿素含量在轻度干旱胁迫下比对照提高6.2%,中度和重度干旱胁迫下低于对照。表明地被菊对干旱胁迫有一定的适应能力。

转基因地被菊晚粉抗旱生理特性研究

对转太行菊OtMYB基因晚粉进行干旱胁迫和复水处理,以野生型晚粉和野生太行菊为对照,测定不同水分胁迫下叶片的叶绿素、可溶性蛋白、丙二醛、游离脯氨酸、可溶性糖的含量和膜透性,比较外源OtMYB基因表达对转基因晚粉抗旱性的影响。结果表明:随胁迫时间的延长,三者叶片中叶绿素含量均呈下降趋势,丙二醛含量、游离脯氨酸含量和相对电导率明显上升,但转基因晚粉各指标变化规律与太行菊相似,比野生型晚粉表现出更强的稳定性和恢复能力,表明OtMYB基因在转基因植株中成功表达,并提高了植株的抗旱性。转基因植株的可溶性蛋白和可溶性糖含量,表现出与OtMYB基因来源种太行菊相似的变化趋势,明显区别于野生型晚粉,推测OtMYB基因在干旱胁迫下能诱导转基因植株糖和蛋白的特异表达。

地被菊‘中国红’再生及遗传转化体系的建立

为建立地被菊‘中国红’的再生和遗传转化体系,以其无菌苗叶片为外植体,通过添加不同浓度的生长调节剂,研究其对诱导愈伤组织、不定芽的影响,并利用根瘤农杆菌介导法对地被菊‘中国红’叶片进行遗传转化,研究影响菊花转化的若干因素,建立一套高效的遗传转化体系。结果表明:地被菊‘中国红’在MS+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA的培养基上获得了最高的不定芽分化率(89.6%);地被菊‘中国红’的最适生根培养基为1/2MS+0.3mg·L-1NAA,生根率达100%;其叶片外植体的遗传转化条件:OD600=0.6、农杆菌侵染时间为7min、共培养48h、延迟培养2d、卡那霉素筛选浓度为15mg·L-1、头孢霉素抑菌浓度为300mg·L-1。本研究为进一步开展菊花的基因工程育种奠定基础。

地被菊新品种选育研究

本文采用远缘杂交后连续选择的方法,对菊花新品种群——地被菊进行了研究。母本多采用‘美矮粉’和早菊品种等,父本则多采用菊属野生种(含半野生种)毛华菊、小红菊、甘野菊、野菊、紫花野菊以及‘北京菊’等。结果选育出一套抗性强、开花繁密、花期集中于“十一”前后或较长、植株较矮或匍匍状、管理粗放、适合于露地栽植过冬的地被菊新品种10个以上。

地被菊引种栽培试验

地被菊新品种群(Dendranthema×grandiflora Tzvel.Ground—Cover Chrysanthemum Group)是80年代初期选育而成的。于1989年10月～1992年10月在哈尔滨地区进行该品种群的引种栽培试验,共引种18个品种。试验结果表明:地被菊中的大部分品种在哈尔滨地区栽培表现良好,仅在栽培的第1～2年稍加埋土防寒即可越冬,成年以后则不加任何保护措施,就可越冬成活。其优点:(1)高生长、冠幅、花朵大小均明显大于北京的同类品种;(2)花期均迟于北京地区;(3)在背阴的小区里,大部品种(除早花品种外)开花可持续至10月30日左右;在空旷地栽培的品种,花朵会受初霜(9月底或10月初)冻害,但花蕾不受冻害在初霜以后气温回升,还可继续开花。地被菊新品种可在哈尔滨地区推广栽培。

地被菊抗寒生理生化特性研究

在自然低温条件下,对地被菊5个品系的SOD酶活性、可溶性蛋白含量、MDA含量、游离脯氨酸含量、可溶性糖含量进行测定。结果表明:在9～10月份沈阳地区自然低温条件下,各品系地被菊的SOD活性在试验初期显著升高(p<0.05),到10月15日后开始降低。可溶性蛋白质含量、游离脯氨酸含量从9月15日后随着温度的降低而显著增加(p<0.05)。MDA含量开始时增加缓慢,到10月15日后增加显著,其中074-175增加幅度最大,由10月15日的0.269mmol·g-1上升到10月30日的0.302mmol·g-1。可溶性糖含量呈下降-上升-下降-上升趋势。运用隶属函数法进行抗寒性综合评判,得出5个品系的抗寒性强弱顺序为:074-175>074-123>074-17>074-237>074-428。

地被菊幼嫩花瓣组织培养研究

以地被菊幼嫩花瓣为试材,进行了组织培养的研究,结果表明地被菊幼嫩花瓣是诱导愈伤组织的良好材料。当培养基中2.4-D和NAA浓度为0.5～2mg·L-1时,愈伤组织诱导率均达87.2%以上,并且诱导出的愈伤组织结构疏松,易于分割。在分化培养基MS+KT2mg·L-1+IAA0.5mg·L-1上,芽分化率可达92.5%。不同接种方向对地被菊花瓣不定芽形成无显著影响。地被菊花瓣培养芽的分化率以基部组织为最高(94%),中部和上部组织分化率则逐渐变低。经培养得到的再生植株与原品种相比在形态上产生了一系列变化。

地被菊雨花勋章再生和遗传转化体系的建立

以匍匐型地被菊雨花勋章叶片为外植体，建立了其高频再生体系及根癌农杆菌介导的稳定遗传转化体系。结果表明，不同激素配比对叶片离体再生影响很大，以MS＋1．0mg·L^-16-BA＋1．0mg·L^-1NAA的诱导率最高，达91．1％；分化前期一定时间的暗培养可防止愈伤组织褐变，提高再生率。预培养3d，侵染10min，共培养3d，延迟培养3d为最优转化体系；乙酰丁香酮导致外植体褐化加速，不利于转化。叶片对潮霉素十分敏感，叶盘再生筛选以6—8mg·L^-1为宜，生根筛选以7mg·L^-1为宜。羧苄青霉素抑菌质量浓度以250～350mg·L^-1为宜。获得的抗性芽部分株系经PCR检测初步证实外源基因已转入植物基因组DNA中。

转DREB1A基因地被菊耐旱节水性

选用已经获得的具有多重抗逆性的转DREB1A基因地被菊6个株系为试验材料,以未转基因的野生型植株‘WT’为对照,将各株系盆栽幼苗分别进行室温条件下和高温条件下的水分胁迫处理,通过研究水分胁迫前后各株系植株生理指标的变化规律,分析了各株系的耐失水特性,并利用方差分析及隶属函数综合评价的方法对不同株系的耐旱节水能力进行了评价。结果表明,在6个转基因地被菊株系中有5个株系的耐旱节水性优于‘WT’,且其中3个株系与‘WT’差异显著(p<0.05);有1个株系耐旱节水性不如‘WT’,但与‘WT’差异不显著。

与地被菊株型匍匐性连锁RAPD标记的SCAR转化

In this study,PCR product amplified with a RAPD marker A10555 which is linked to gene controlling creeping habit of ground-cover chrysanthemum（Dendranthema grandiflorum） was recovered,and subsequently subcloned and sequenced. A pair of 18-base specific primers was designed based on the obtained sequence.The validity of this SCAR marker was verified by screening parents and 152 individuals of the F1 progeny,and the consistence in the locus of the special band and the number of recombinants was observed between SCAR analysis and RAPD analysis. The size of this SCAR marker was 555 bp,which was designated as SCA10555. The results demonstrated that the RAPD marker was converted to SCAR marker successfully. This study provides bases for new cultivars developing,molecular markers assisted breeding and creeping habit related genes cloning of the ground-cover chrysanthemum.