大鼠脑缺血再灌注后GRP78和GADD153的表达变化研究

目的观察内质网应激相关因子GRP78和GADD153在大鼠局灶性脑缺血再灌注后的表达,探讨脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的内质网应激机制。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞及再通模型,应用缺口末端标记法检测细胞凋亡;通过RT-PCR、免疫组化和Western-blot方法检测脑缺血再灌注后不同时相缺血周围区GRP78和GADD153的mRNA和蛋白表达。结果模型组GRP78和GADD153表达均高于假手术组,分别于再灌注12h和24h达高峰,GADD153表达与神经细胞凋亡时间趋势一致。结论脑缺血再灌注启动内质网应激反应,前期以GRP78表达上调为主;后期GADD153大量表达,二者表达平衡可能对于神经细胞最后转归具有重要意义。

GRP78和GADD153在Wistar大鼠腭黏膜癌变中的表达及其相关性分析

目的:研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)和生长抑制DNA损伤基因153(GADD153)在Wistar大鼠腭黏膜癌变过程中的表达变化。方法:通过化学诱导法建立大鼠口腔癌模型,采用免疫组化方法检测7例正常黏膜和63例不同癌变发展阶段黏膜细胞中的Grp78和GADD153的表达水平,利用图像分析技术测定阳性细胞的平均光密度值(A值),并对2种指标做相关性分析。结果:Grp78的平均A值随着组织病理学分级增加而逐渐增高,不同程度异常增生组、癌变组与正常黏膜组相比差异有统计学意义(P<0.01)。GADD153的平均A值随着异常增生程度的加重和癌变逐渐降低(P<0.01)。Spearman相关分析显示Grp78与GADD153的表达呈负相关(P﹤0.05)。结论:Grp78和GADD153参与口腔癌的发生发展,联合检测Grp78与GADD153蛋白的表达有利于口腔癌的早期诊断和基因治疗。

阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注后GRP78和GADD153表达的影响

目的观察阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注损伤后内质网分子伴侣GRP78（endoplasmic reticulummolecular chaperon）和GADD153（growth arrest and DNA damage-inducible gene 153）表达变化的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制。方法将54只SD大鼠随机分为阿托伐他汀干预组24只、模型对照组24只和假手术组6只,制作大鼠心肌再灌注损伤模型。阿托伐他汀干预组和模型对照组再灌注2 h6、h、24 h、48 h分别分为4个亚组,每个亚组动物6只。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和GADD153表达变化。结果假手术组大鼠偶可见凋亡细胞,对照组和干预组大鼠缺血再灌注2 h缺血周围区可见少量凋亡细胞,再灌注6 h凋亡细胞有所增多,再灌注24 h凋亡细胞数量达高峰,再灌注48 h凋亡细胞有所减少（P〈0.05或0.01）。相同各时间点比较,干预组大鼠心肌细胞凋亡显著少于对照组（P〈0.05或0.01）。假手术组大鼠心尖部相应区域心肌细胞未见明显GRP78及GADD153阳性表达。对照组和干预组大鼠再灌注2 h后心尖部GRP78表达开始增加,6 h达高峰,24 h时表达水平明显下降（P〈0.01）。在相应时间点,干预组的GRP78蛋白表达水平显著高于对照组（P〈0.01）。对照组和干预组大鼠缺血周围区GADD153从再灌注6 h开始在神经细胞内明显表达,并逐渐增强,于再灌注24~48 h达高峰（P〈0.01）。在相应时间点,干预组的GADD153蛋白表达水平显著低于对照组（P〈0.01）。结论干预心肌缺血再灌注后心肌细胞内质网伴侣GRP78和GADD153的表达可能是阿托伐他汀抑制心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制之一。

epoxomicin可诱发前列腺癌细胞内质网应激蛋白GADD153促进细胞凋亡

目的探讨蛋白酶体抑制剂(epoxomicin,EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡及其与GADD153/CHOP的关系。方法不同浓度的EPO处理DU145不同时间,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率情况;Real-time PCR检测内质网应激的相关分子GADD153、GRP78 mRNA以及Western blot方法检测GADD153、GRP78蛋白表达情况;转染GADD153siRNA从而沉默基因GADD153,通过基因转录水平及蛋白水平检测GADD153证实转染是否成功;转染GADD153后,通过MTS法及流式细胞仪技术检测细胞增殖情况及凋亡情况。结果 EPO抑制DU145细胞生长,并呈现剂量、时间依赖。处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组。EPO处理后GADD153,GRP78基因转录水平随时间逐渐升高,72 h最为明显。GADD153、GRP78蛋白在EPO处理后不断增加,均在72 h增加到最高,且低剂量与高剂量组在72 h差异有统计学意义(P<0.05)。转染GADD153siRNA后,GADD153基因转录水平及蛋白表达水平明显降低,其中GADD153siRNA 50 nmol/L最为明显。沉默基因GADD153后,EPO处理DU145细胞,其细胞数目的减少部分被阻断,细胞凋亡部分被阻断。结论蛋白酶体抑制剂epoxomicin能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活内质网应激,诱发内质网的相关分子GADD153表达有关。

谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响

[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和4mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和8mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和12mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P<0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P>0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P<0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用.

尼莫地平对惊厥持续状态幼年大鼠海马GRP78、CHOP表达及细胞凋亡的影响

目的观察尼莫地平对惊厥持续状态（statusconvulsion，SC）幼年大鼠海马葡萄糖调节蛋白78／免疫球蛋白重链结合蛋白Bip（GRP78／Bip）、前凋亡因子（CHOP／GADD153）表达及神经元凋亡的影响。方法雄性幼年SD大鼠117只，随机分为正常对照组（NC组）、惊厥持续状态组（SC组）、尼莫地平预处理组（NM组）三大组；分别予生理盐水、氯化锂-匹罗卡品、尼莫地平和氯化锂-匹罗卡品进行处理，各组又均随机分为3个亚组，分别于4、24、48h处死。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型；RT—PCR技术检测海马GRP78／Bip和CHOP／GADD153mRNA表达的动态变化。原位末端标记（TUNEL）检测海马CA1区中神经细胞的凋亡。结果SC组各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞表达均明显高于NC组（均P〈005或001oNM组各时间点TUNEL阳性细胞较SC组低，但高于NC组（P〈0．05或0．01）。与NC组相比，SC组各时间点海马GRP78／BipmRNA和CHoP／GADD153mRNA表达均升高。NM组GRP78／BipmRNA、CHOP／GADD153mRNA表达情况与SC组表达规律类似，但表达水平有差别。结论NM预处理可以影响CHOP／GADD153和GRP78／Bip的表达，缓解内质网应激，减轻惊厥后海马神经元细胞凋亡程度。

强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞内质网应激相关因子表达的改变

目的:观察内质网应激相关因子Bip/GRP78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗细胞损伤中的作用。方法:选用健康雄性白色豚鼠48只,将实验组豚鼠暴露在4kHz窄带噪声120dBSPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1d、4d、14d组及对照组在处死前测ABR(每组各12只)。脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEIL)检测耳蜗凋亡细胞。免疫组化及Western Blot方法检测Bip/GRP78,CHOP/Gadd153蛋白的表达。结果:实验组耳蜗Corti/s器、血管纹(stria vascularis,sv)和螺旋神经节细胞(spiral ganglion cell,SGC)存在TUNEL阳性细胞,以1d组最多,而对照组未见阳性细胞。免疫组化、Western Blot检测实验组Bip/GRP78蛋白明显高于正常组,且在1d、4d、14d都维持在比较高的水平;CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d、4d达到高峰,14d减少。结论:强噪声暴露启动内质网应激反应,诱导Bip/GRP78表达,降低细胞损伤,同时激活CHOP/Gadd153途径启动细胞凋亡来清除受害严重的细胞,这可能是内耳细胞内源性保护机制之一。

内质网应激反应参与强噪声诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡的研究

目的:探讨强噪声能否诱导豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)的凋亡,及观察凋亡蛋白酶Caspase-12、内质网应激相关因子Bip/Grp78和CHOP/Gadd153在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC中的表达,探讨内质网应激在强噪声暴露后豚鼠耳蜗SGC损伤中的作用。方法:选用健康雄性白色豚鼠20只,将实验组豚鼠暴露在4kHz窄带噪声120dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1,4,14d组及对照组在处死前测ABR(每组各5只)。通过透射电镜和脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),检测SGC凋亡细胞,免疫组化检测Caspase-12、Bip/Grp78,CHOP/Gadd153蛋白的表达。结果:透射电镜观察发现实验组SGC出现了凋亡细胞的特征性改变。实验组SGC的TUNEL染色明显增强,免疫组化检测实验组Bip/Grp78蛋白明显高于正常组,且在1,4,14d都维持在比较高的水平。Caspase-12、CHOP/Gadd153蛋白含量在噪声刺激后迅速增高,1d和4d达到高峰,14d减少。结论:强噪声可以诱导SGC凋亡,Caspase-12活化引起内质网应激反应性凋亡通道是此过程的信号途径之一。