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Two-step Enzymatic Synthesis of Guanine Arabinoside 被引量:5
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作者 魏晓琨 丁庆豹 +2 位作者 欧伶 张鹭 王昌禄 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2008年第6期934-937,共4页
The chemical synthesis of Guanine arabinoside (ara-G) is extremely complex, time-consuming, and seriously polluted. A two-step enzymatic synthesis process was developed to acquire ara-G easily. 2,6-Diaminopurine ara... The chemical synthesis of Guanine arabinoside (ara-G) is extremely complex, time-consuming, and seriously polluted. A two-step enzymatic synthesis process was developed to acquire ara-G easily. 2,6-Diaminopurine arabinoside (ara-DA) was first synthesized with purine nucleoside phosphorylase and pyrimidine nucleoside phosphorylase produced by Enterobacter aerogenes DGW-07. The conversion yield of ara-DA could reach above 90% when the reaction liquid contained 30 mmol·L^-1 uracil arabinoside as arabinose donor, 10 mmol·L^- 1 2,6-diaminopurine as arabinose acceptor in pH 7.0 20 mmol·L^-1 phosphate buffer, and reacted at 60℃ for 48h. Then, ara-DA was effectively transformed into ara-G with adenylate deaminase produced by Aspergillus oryzae DAW-01. The total process had no complex separation and purification. 展开更多
关键词 guanine arabinoside 2 6-diaminopurine arabinoside purine nucleoside phosphorylase pyrimidine nucleoside phosphorylase adenylate deaminase Enterobacter aerogenes Aspergillus oryzae
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菊苣干预高尿酸血症鹌鹑尿酸及相关代谢酶活性研究 被引量:26
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作者 黄胜男 林志健 +5 位作者 张冰 赓迪 牛红娟 朱春胜 王雪洁 孙博喻 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期9-13,共5页
目的探讨菊苣对高尿酸血症(HUA)鹌鹑尿酸及相关代谢酶活性的影响,阐释菊苣防治HUA的可能机制。方法将60只鹌鹑,按体质量随机分为5组,即正常组,模型组,苯溴马隆组(20 mg·kg-1·d-1),菊苣高、低剂量组(10,5 g·kg-1·d-... 目的探讨菊苣对高尿酸血症(HUA)鹌鹑尿酸及相关代谢酶活性的影响,阐释菊苣防治HUA的可能机制。方法将60只鹌鹑,按体质量随机分为5组,即正常组,模型组,苯溴马隆组(20 mg·kg-1·d-1),菊苣高、低剂量组(10,5 g·kg-1·d-1),每组12只。除正常组喂饲鹌鹑普通饲料外,其余各组均给予高嘌呤饲料(普通饲料拌入酵母干粉15 g·kg-1·d-1)复制HUA模型。以菊苣治疗28 d,动态观察鹌鹑尿酸(uric acid,UA)水平及UA生成代谢酶活性的变化。结果给药7,14,21,28 d,菊苣高、低剂量组可显著降低鹌鹑UA水平(P<0.05);不同程度地抑制UA生成代谢酶5'-核苷酸酶(5'-NT)、腺苷脱氨酶(ADA)、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)、鸟嘌呤脱氨酶(GD)、黄嘌呤氧化酶(XO)的活性(P<0.05,P<0.01)。结论菊苣可有效降低鹌鹑HUA模型UA水平,可能与其降低UA代谢酶5'-NT、ADA、PNP、GD、XO的活性有关。 展开更多
关键词 高尿酸血症 菊苣 5'-核苷酸酶 嘌呤核苷磷酸化酶 腺苷脱氨酶 鸟嘌呤脱氨酶 黄嘌呤氧化酶
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老年慢性肝病患者血清鸟嘌呤脱氨酶,胆碱脂酶的变化及临床意义 被引量:1
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作者 王立强 孙晓玲 +3 位作者 徐文亮 王永文 迟宝荣 周琪 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期1042-1043,共2页
目的探讨老年慢性肝病患者鸟嘌呤脱氨酶(GD)和胆碱脂酶(CHE)的变化及临床意义。方法对80例老年慢性肝病患者及100例健康老人血清中GD和CHE活性进行检测。结果老年慢性肝病患者血清中GD活性明显高于正常对照组,且随病情加重而升高更为明... 目的探讨老年慢性肝病患者鸟嘌呤脱氨酶(GD)和胆碱脂酶(CHE)的变化及临床意义。方法对80例老年慢性肝病患者及100例健康老人血清中GD和CHE活性进行检测。结果老年慢性肝病患者血清中GD活性明显高于正常对照组,且随病情加重而升高更为明显(P<0.01);血清CHE活性明显低于正常对照组,且随病情加重降低更为明显(P<0.01);GD与CHE呈负相关(P<0.05)。结论GD和CHE是反映肝实质细胞受损害及其合成代谢能力下降的敏感指标。联合检测GD、CHE的变化可以反映肝病发展的程度,对了解病情,判定治疗效果及预后有重要意义。 展开更多
关键词 慢性肝病 鸟嘌呤脱氨酶 胆碱脂酶
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鸟嘌呤脱氨酶速率法测定及其对肝病的诊断价值 被引量:2
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作者 张一兵 张淑芹 +1 位作者 周文兴 罗喜钢 《检验医学》 CAS 北大核心 2010年第8期625-627,共3页
目的通过速率法测定鸟嘌呤脱氨酶(GD)活性,探讨GD活性对肝病的特异性诊断意义。方法利用GD催化鸟嘌呤生成黄嘌呤,偶联黄嘌呤氧化酶(XOD)生成H2O2,经过氧化物酶(POD)作用与4-氨基安替比林(4-AAP)及2,4-二氯酚作用生成醌亚胺化合... 目的通过速率法测定鸟嘌呤脱氨酶(GD)活性,探讨GD活性对肝病的特异性诊断意义。方法利用GD催化鸟嘌呤生成黄嘌呤,偶联黄嘌呤氧化酶(XOD)生成H2O2,经过氧化物酶(POD)作用与4-氨基安替比林(4-AAP)及2,4-二氯酚作用生成醌亚胺化合物,从而建立测定GD活性的速率测定法。结果该方法重复性良好,批内度异系数(CV)为2.53%,批间CV为3.57%。最适pH值为7.0,Km=1.09×10^-2mmol/L。线性在13.50U/L以下。健康人GD活性呈偏态分布,第95百分位数(P95)〈1.08U/L。急性黄疸型肝炎和继发性肝癌患者GD活性明显增高,其阳性率分别98%和96%。结论该方法快速,精密度高,适用于自动生化分析仪,使GD能成为临床常规测定项目。GD活性增高对肝实质细胞性急性损害有较高的特异性诊断价值,优于丙氨酸氨基转移酶(ALT)等肝功能酶项目测定。 展开更多
关键词 鸟嘌呤脱氨酶 速率法 肝病
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嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠垂体嘌呤核苷酸代谢关键酶基因表达的影响
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作者 崔佳乐 洪新雨 +2 位作者 赵丽艳 刘剑凯 洪敏 《中国实验诊断学》 2012年第9期1556-1559,共4页
目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠垂体嘌呤核苷酸分解代谢关键酶腺苷脱氨酶(ADA)、嘌呤核苷酸补救合成关键酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因表达的影响,阐明海洛因对垂体嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对... 目的研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠垂体嘌呤核苷酸分解代谢关键酶腺苷脱氨酶(ADA)、嘌呤核苷酸补救合成关键酶次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因表达的影响,阐明海洛因对垂体嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对抗作用。方法建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只建模成功的雄性Wistar大鼠随机分成对照组(生理盐水)、核苷酸组(不给海洛因)、海洛因组、海洛因+核苷酸组(同时给药)、海洛因戒断3d组、海洛因戒断9d组、核苷酸3d组(海洛因停药后给核苷酸3d)及核苷酸9d组(海洛因停药后给核苷酸9d)(每组10只)。检测垂体组织内ADA及HGPRT基因表达的情况。结果与对照组比较,海洛因组、戒断3d组大鼠垂体ADA mRNA水平有所增高,但差异均无显著性(P>0.05)。垂体组织核苷酸组HGPRT mRNA水平高于对照组(P<0.05),其他各组与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论海洛因有增强大鼠垂体组织ADA基因表达,减弱HGPRT的基因表达作用,但作用不显著;补偿嘌呤核苷酸保持海洛因依赖大鼠垂体ADA和HGPRT基因表达的相对稳定。 展开更多
关键词 海洛因 嘌呤核苷酸 腺苷脱氨酶 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 垂体
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嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢相关酶基因表达的影响
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作者 李昆 何海涛 +2 位作者 李鸿梅 刘剑凯 洪敏 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第2期162-164,共3页
目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢酶的影响。方法将50只雄性Wis-tar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。采用real-timePCR的方法检测大鼠脑皮质中腺苷脱氨酶(ADA... 目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸代谢酶的影响。方法将50只雄性Wis-tar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。采用real-timePCR的方法检测大鼠脑皮质中腺苷脱氨酶(ADA)、黄嘌呤氧化酶(XO)、次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT)和腺苷激酶(AK)mRNA的表达水平。结果海洛因组ADA、XO的mRNA比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。海洛因组HGPRT、APRT和AK的mRNA比对照组明显降低(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组与海洛因组相比有不同程度升高,以HGPRT的升高程度尤为显著(P<0.05)。海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组的各项指标差异无显著性。结论海洛因在大鼠基因水平上促进嘌呤核苷酸的分解代谢,降低合成代谢,而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。 展开更多
关键词 嘌呤核苷酸 海洛因 腺苷脱氨酶 黄嘌呤氧化酶 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 腺嘌呤磷酸核糖转移酶 腺苷激酶
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酿酒酵母和大肠杆菌鸟嘌呤脱氨酶基因的克隆、原核表达及活性测定 被引量:1
7
作者 孙莹 潘思安 +2 位作者 李萌萌 邓威威 张正竹 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第18期139-144,共6页
与植物体内合成路径不同,微生物体内合成咖啡碱存在一条以黄嘌呤为底物,利用鸟嘌呤脱氨酶催化鸟嘌呤生成黄嘌呤有效合成咖啡碱的新途径。为克隆鸟嘌呤脱氨酶的基因,构建可高效合成黄嘌呤的原核表达载体并对外源蛋白活性进行检测,分别以... 与植物体内合成路径不同,微生物体内合成咖啡碱存在一条以黄嘌呤为底物,利用鸟嘌呤脱氨酶催化鸟嘌呤生成黄嘌呤有效合成咖啡碱的新途径。为克隆鸟嘌呤脱氨酶的基因,构建可高效合成黄嘌呤的原核表达载体并对外源蛋白活性进行检测,分别以酿酒酵母和大肠杆菌为研究材料,根据Gen Bank中酿酒酵母和大肠杆菌中鸟嘌呤脱氨酶基因gud1和egud序列设计引物,聚合酶链式反应特异扩增其基因片段,将目的基因连接至p MAL-c5X载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达,并用高效液相色谱法鉴定其目的蛋白的催化活性。结果表明重组载体p MAL-gud1、p MAL-egud均可用来合成黄嘌呤,且GUD1比EGUD合成黄嘌呤的效率更高。研究结果将进一步丰富黑茶加工技术理论,同时为体外构建高效咖啡碱生物工程菌提供理论支持。 展开更多
关键词 黑茶加工 咖啡碱 鸟嘌呤脱氨酶 黄嘌呤 生物合成 原核表达
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鸟嘌呤脱氨酶检测对肝脏疾病的诊断价值
8
作者 李萍 许淑惠 +1 位作者 高宝秀 曹凤 《华西医科大学学报》 CSCD 1996年第2期189-191,共3页
采用比色法测定200名不同疾病患者血清中鸟嘌呤脱氨酶(GD)活性,发现除肝脏疾病患者血清中GD活性高于正常外,其它疾病患者的GD活性均不升高。不同类型的肝脏疾病中,急性肝炎患者GD活性比慢性肝炎高,急慢性肝炎、肝内外... 采用比色法测定200名不同疾病患者血清中鸟嘌呤脱氨酶(GD)活性,发现除肝脏疾病患者血清中GD活性高于正常外,其它疾病患者的GD活性均不升高。不同类型的肝脏疾病中,急性肝炎患者GD活性比慢性肝炎高,急慢性肝炎、肝内外胆道梗阻患者血清GD活性与丙氨酸氨基转移酶呈直线正相关;在慢性活动性肝炎、肝内外胆道梗阻、肝硬化时患者血清GD活性与总胆红素浓度呈直线正相关;抗HCV阳性患者GD活性也显著升高。由此表明,血清GD检测是反映肝脏功能的一项特异、灵敏的指标,并有助于对急慢性肝炎、肝硬化的鉴别诊断及对丙型肝炎的诊断。 展开更多
关键词 肝疾病 诊断 鸟嘌呤脱氨酶 实验室诊断
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用于阿糖鸟苷合成的腺苷脱氨酶在大肠埃希菌中的表达
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作者 黎梦 刘国生 +2 位作者 刘磊 常利草 邢善涛 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1604-1609,共6页
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨合成阿糖鸟苷,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险。将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)... 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脱氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脱氨合成阿糖鸟苷,但铜绿假单胞菌TX16是一种条件致病菌,直接用于工业生产存在一定风险。将铜绿假单胞菌TX16菌株来源的腺苷脱氨酶基因(add)克隆至载体p ET-28a中,然后转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经过筛选获得工程菌E.coli(add)。经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测及酶活力测定,表明E.coli(add)能够表达大量腺苷脱氨酶,其产酶能力是含空载质粒的BL21(DE3)菌株E.coli(p ET-28a)的16.2倍。以E.coli(add)制备的粗酶液为催化剂,催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷发生脱氨反应得到产物阿糖鸟苷,转化率可达96.8%。 展开更多
关键词 阿糖鸟苷 2 6-二氨基嘌呤核苷 铜绿假单胞菌 腺苷脱氨酶 基因表达
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