灵菊七蛋白提取及其降糖活性研究

为了开发降糖药用植物灵菊七,从提取溶剂、加热方式、提取时间、提取温度、料液比5个方面对灵菊七活性蛋白提取工艺进行了研究,并检测了不同工艺获得的提取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,通过响应面法优化了提取条件.结果表明,蛋白提取率最高的提取条件为:提取温度62℃、提取时间3 h、料液比1∶30、提取溶剂PBS缓冲液,蛋白最大提取率可达10.8%;提取液对α-淀粉酶具有最高抑制率的提取条件为:提取温度59℃、提取时间3 h、料液比1∶30、提取溶剂PBS缓冲液,最大抑制率为34.49%;浸提液对α-葡萄糖苷酶具有最高抑制率的提取条件为:提取温度52℃、提取时间5 h、料液比1∶30、提取溶剂PBS缓冲液,灵菊七浸提液对α-葡萄糖苷酶的最大抑制率达到16.04%.浸提液对α-淀粉酶抑制率随着蛋白含量的增加而升高,结合提取液蛋白含量和纯度研究,可以推测灵菊七浸提液含有对α-淀粉酶具有较好抑制作用的活性蛋白.

灵菊七提取物对糖尿病大鼠治疗作用的实验研究

目的观察灵菊七提取物对糖尿病大鼠的治疗作用。方法给大鼠腹腔注射链脲佐菌素,造成糖尿病动物模型,观察不同剂量的灵菊七提取物对正常和糖尿病大鼠体重、血糖、血脂的影响及肾保护作用。结果灵菊七提取物可显著增加糖尿病大鼠体重,降低血糖,治疗效果优于阳性药物对照组;无明显降血清胆固醇(TC)作用,高剂量组可显著降低甘油三酯(TG);显著降低糖尿病大鼠Cr、BUN。结论灵菊七提取物对糖尿病大鼠具一定治疗作用。

灵菊七的急性毒性与降糖作用研究

目的观察灵菊七的降血糖作用及安全性。方法以不同剂量的灵菊七醇提、水提物给小鼠连续ig给药1/d×4,实验性糖尿病模型用肾上腺素、葡萄糖塑造;急毒实验以4.62g.ml-1灵菊七生药1ml分别给20只小鼠ig。观察14d,记录小鼠毒性反应情况。结果灵菊七醇提、水提物对葡萄糖、肾上腺素所致的小鼠高血糖均有明显的抑制作用。该药给小鼠口服ig,其最大耐受量大于230.6g.kg-1,相当于成人日用量的512倍。结论灵菊七具有降血糖作用,毒性极小,口服安全。

灵菊七水提物的降糖作用及促胰岛素分泌作用研究

目的观察灵菊七水提物的降糖作用及对胰岛细胞分泌胰岛素的影响。方法采用四氧嘧啶(70 mg.kg-1)诱导的糖尿病模型小鼠和正常小鼠,连续给药7 d后,观察灵菊七水提物(2.5 mg.kg-1、5 mg.kg-1和10 mg.kg-1)对血糖、血清胰岛素水平和糖耐量的影响;采用M IN6胰岛细胞株,观察灵菊七水提物对胰岛素分泌的影响。结果在给药7 d后,灵菊七水提物可明显降低糖尿病小鼠的血糖水平,并可明显降低正常小鼠和糖尿病小鼠的糖耐量,促进胰岛素的分泌;灵菊七水提物对葡萄糖(16.7 mmol.L-1)刺激下胰岛素的分泌明显具有促进作用。结论灵菊七水提物可通过促进胰岛素分泌来降低血糖。

悬浮培养及培养条件对灵菊七细胞中可溶性多糖合成的影响

以灵菊七叶片诱导的愈伤组织为材料进行悬浮培养,研究培养条件对愈伤细胞、细胞内可溶性多糖合成的影响。结果表明,在培养基MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L GA中悬浮细胞表现出对数生长期最长、可溶性多糖含量最高的特点;离子交换层析纯化结果显示,悬浮细胞中可溶性多糖分了与植株中含有相同的3种主要多糖。培养基MS+0.5 mg/L BA+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L GA,促进可溶性多糖的生物合成,最适于灵菊七愈伤细胞的悬浮培养。本研究初步建立了灵菊七愈伤细胞悬浮培养快速获取可溶多糖的方法,为深入研究灵菊七多糖药理活性奠定了基础。

药用植物灵菊七愈伤组织诱导及其染色体数目稳定性研究

研究了不同植物激素对药用植物灵菊七愈伤组织诱导、继代培养、细胞染色体稳定性的影响。结果表明,灵菊七的愈伤组织诱导、继代培养分别以MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA、MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA为培养基较适宜。培养在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA上的愈伤组织细胞中期分裂相染色体数目稳定,为20条,而培养在MS+2.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA上的愈伤组织细胞中期分裂相染色体数目不稳定,其中86.7%的细胞含有20条染色体,13.3%的细胞含有10条染色体,表明激素ZT会导致愈伤组织细胞的染色体数目不稳定。在81个被观察的愈伤组织细胞中,超过85%的细胞染色体数目为20,表明灵菊七的体细胞染色体数应为2 n=20。

药用植物灵菊七的染色体核型研究

[目的]研究药用植物灵菊七(Gynura medica)的细胞染色体特点,并对其染色体核型进行分析。[方法]以灵菊七幼苗茎尖为材料,从上午6:30～10:30,每隔20 min取材一次,采用常规制片技术制片,显微镜观察中期分裂相细胞,对染色体完全分散开的细胞进行染色体计数及核型分析。[结果]在染色体分散良好的102个中期分裂相细胞中,有96.08%含20条染色体,3.92%含40条染色体;同时结果表明上午7:50～9:30取材较佳。[结论]G.medica为二倍体植物,体细胞含有10对染色体,核型公式为2n=2x=20 m,染色体核型属于1A型。该研究结果为国内首次报道。

植物激素对灵菊七愈伤组织中黄酮含量的影响

以灵菊七(Gynura medica)无菌试管苗叶片为外植体,接种于愈伤组织诱导培养基上,诱导形成愈伤组织,并进行愈伤组织继代培养。将继代培养的愈伤组织接种于含有不同激素(浓度)组合的愈伤增殖培养基上,以硝酸铝显色法测定其中黄酮的含量。结果表明,在4种愈伤组织增殖培养基上,愈伤组织中总黄酮含量最大值分别达到0.794%、2.112%、1.652%、2.792%。培养基MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA+1.0 mg/L GA最适用于灵菊七愈伤组织中黄酮总量的积累。

灵菊七提取物降血糖作用的实验研究

考察不同剂量的灵菊七提取物对糖尿病小鼠血糖、口服糖耐量、血清胰岛素水平的影响。采用雄性昆明小鼠腹腔注射四氧嘧啶制备糖尿病小鼠模型,分别以灵菊七提取物低、中、高剂量进行灌胃,连续21天,灌胃结束后观察血糖、口服糖耐量、血清胰岛素水平的变化。结果显示灵菊七提取物各剂量组均能降低糖尿病小鼠的血糖,改善口服糖耐量和提高血清胰岛素水平,并具有一定的量效、时效关系。

紫背菜提取物降血糖作用的实验研究

目的:考察不同剂量的紫背菜提取物对2型糖尿病模型大鼠的治疗作用。方法:SPF级雄性SD大鼠高糖高脂喂养合并小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导制备2型糖尿病模型,分组灌胃给予紫背菜提取物及阳性对照药物,连续21天。给药结束后取材并检测血糖(BG)、血脂(甘油三酯TC、总胆固醇TG)、血清胰岛素(Ins)、口服糖耐量(OGTT)等指标,考察紫背菜提取物对各项指标的影响。结果:紫背菜提取物可显著降低2型糖尿病模型大鼠血糖,改善其脂代谢紊乱和高胰岛素血症。结论:紫背菜提取物对2型糖尿病大鼠具有较好的防治作用,其降血糖机制可能与改善胰岛素抵抗和脂代谢紊乱有关。

灵菊七不同温度提取物抗氧化活性研究

目的:研究提取温度对灵菊七提取物总多酚、总黄酮含量及其抗氧化活性的影响;方法:采用不同温度(40-100℃)提取灵菊七药材,Folin-Ciocalteu及三氯化铝显色法测定灵菊七不同温度提取物的总多酚、总黄酮含量,DPPH、ABTS+.及磷钼酸铵三种抗氧化模型研究其抗氧化活性;结果:随着药材提取温度的升高,总多酚、总黄酮含量及抗氧化活性均显著升高(P<0.05),当提取温度达到100℃时,其总多酚、总黄酮含量及抗氧化活性与提取温度为90℃提取物无显著性差异(P>0.05)相关性分析表明总多酚、总黄酮含量与抗氧化活性显著相关(P<0.001);结论:提取温度对灵菊七提取物总多酚、总黄酮含量及抗氧化活性均有显著的影响。

灵菊七脂溶性成分抑制α-葡萄糖苷酶活性及其成分分析

体外测定了灵菊七石油醚萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并采用GC-MS联用仪分析灵菊七石油醚萃取物的化学成分。结果表明,灵菊七石油醚萃取物对α-葡萄糖苷酶有较好的抑制活性,浓度在5 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为59.6%。经GC-MS分析从灵菊七石油醚萃取物中鉴定出17个化合物,占流出峰总面积的78.1%。石油醚萃取物中的萜类化合物可能是其抑制α-葡萄糖苷酶活性的主要物质。

A New Species of Gynura Cass. (Compositae)

Gynura medica Y.K.Yang et J.K.Wu sp.nov.-Gynura miraculoa Y.K.Yang et J.K.Wu sp.nov.in sched.Haec species G.divaricatae(L.)DC et G.nepalensi DC similis ab illa e caule valde ramosi,foliis subtusglaucis niveis,lateri-nervis 8-12-jugatis,petiolis basi haud aurielis,phyllis involucri extra puberulis etpubescentibus 3-5-nervis,acheniis 6-9-gonis bene differt.Ab hac eaule,ramis.petiolis et foliis utroque albo-

灵菊七抗氧化成分研究

目的:研究灵菊七中抗氧化活性部位酚类成分。方法:采用系统溶剂萃取,1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)抗氧化模型筛选灵菊七抗氧化活性部位;运用硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶和RP-ODS柱色谱分离纯化灵菊七抗氧化活性部位酚类化学成分,根据化合物的理化性质和波谱数据并与文献对照鉴定其结构。结果:灵菊七乙酸乙酯萃取物为其抗氧化活性部位,从乙酸乙酯萃取物中分离得到4个酚类化学成分,分别鉴定为山柰酚(1)、紫云英苷(2)、咖啡酸(3)、3,4-二咖啡酰奎宁酸(4)。化合物1～4均为首次从灵菊七中分离得到,化合物3和4为首次从三七草属中分离得到。结论:本研究可对进一步开发利用灵菊七植物资源提供科学依据。