COMPARATIVE STUDY OF PHOSPHOTYROSYL PROTEIN PHOSPHATASE OF MICE NORMAL LIVER, REGENERATING LIVER, AND MICE H22A HEPATOMA ASCITES CELL

In regenerating liver of mice, marked increase of the activity of phosphotyrosyl protein phosphatase (PTPP) in cytosol was observed. The PTPP activity varied with time and reached the highest level between 24 to 48 hours after partial hepatectomy. In H22a cells the PTPP activity found in every subcellular fraction was lower than that of the normal liver. The PTPP activity was mostly concentrated in lysosomes of normal liver, but mainly distributed in nucleus, cytosol and microsome of regenerating liver. In H22a cells PTPP activity seemed distribute evenly. Five similar major PTPP peaks (I-V) were obtained on DEAE cellulose chromatography of cytosols from all three of liver cells studied. However, two additional PTPP peaks, a and b, were also obtained from cytosol of liver.

肝癌H-22细胞膜抗原肽提取物对小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

目的 应用小鼠肝癌H 2 2细胞膜相关抗原肽 (TAP)提取物免疫小鼠 ,观察其对小鼠自身移植肿瘤生长及免疫学参数的影响 ,为制备肿瘤疫苗提供实验依据。方法 采用微酸洗脱法制备分子量≤ 30 0 0Da的细胞膜TAP提取物 ,皮下免疫小鼠 ,检测胸腺细胞增殖反应、T细胞亚组百分数的变化 ,脾细胞ConA反应性、IL 2和IFN γ活性、CTL杀伤活性的变化及抑瘤效应。结果 TAP提取物免疫后 ,移植肿瘤的发生率降低 (P <0 .0 1) ,平均出现时间延迟 (P <0 .0 0 1) ,生长速度减慢 ;同时 ,脾细胞ConA反应性 (P <0 .0 1)、IFN γ(P <0 .0 5 )和IL 2分泌活性和CTL杀伤活性 (P <0 .0 5 )不同程度增强 ;胸腺细胞3 H TdR自发掺入率 (P <0 .0 5 )及CD4 + 和CD8+ T细胞百分数 (P <0 .0 5 )也有不同程度增高。结论 小鼠肝癌H 2 2细胞膜TAP提取物具有免疫原性 ,能有效激发免疫系统功能 ,抑制自身移植肿瘤的生长。

癌痛消胶囊调节小鼠荷H_(22)移植性肝癌细胞VEGF,p53和p21ras表达的实验研究

目的:通过观察癌痛消胶囊调节小鼠荷H22 移植性肝癌细胞中血管内皮生长因子(Vascularen dothelialgrowthfactor,VEGF)、p53和p21ras的表达作用,以探讨该药抑制肿瘤的作用机理。方法:昆明种雄性小白鼠60只,按随机区组分为6组(A -F组) ;A -E组每鼠均于前肢右腋皮下接种0 2mlH22 肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml) ,接种24h后按体重给药。A组、B组、C组分别给予大、中、小剂量的癌痛消胶囊,D组予康赛迪胶囊,E组予生理盐水,均灌胃给药,每日1次。连续用药10天,停药24h ,称重并处死动物,剥取瘤块称重,计算出肿瘤生长抑制率,用免疫组化法检测癌细胞中VEGF ,p53 ,p21ras ,VHL的表达程度。F组予饲料及水分正常饲养。结果:A ,B ,C ,D组均有明显的抑瘤作用,其中以A组的抑瘤作用最明显(P<0 05或P<0 01)。造模各组动物的肝癌细胞中均见VEGF ,p53和p21ras的阳性染色,但阳性表达程度不同,与B ,C ,E组比较,癌痛消胶囊大剂量组和康赛迪胶囊组均可明显降低肝癌细胞中VEGF ,p53和p21ras的阳性表达(P<0 05或P<0 01)。结论:癌痛消胶囊对小鼠H22 移植性肝癌有抑瘤作用,抑制肿瘤生长的机理可能与下调VEGF ,p53和p21ras的水平有关。

天花粉蛋白诱导H_(22)肝癌细胞凋亡的研究

目的 :观察天花粉蛋白 (trichosanthin,TCS)在体外诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡的效果。方法 :以不同剂量的 TCS加入到H2 2 肝癌细胞溶液中 ,在 2 4孔培养板上培养 72 h后荧光染色并涂片 ,激光共聚焦显微镜下观察 TCS诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡的作用效果。结果 :10 μg/ml浓度的 TCS就可诱导 H2 2 肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征。经统计学分析 ,10 0 μg/ml TCS组与 5 0 μg/ml TCS组间差异无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ,其余各组间差异均有统计学意义 (P<0 .0 1)。TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系 (r=0 .9713,P<0 .0 1)。结论 :TCS在体外可诱导 H2 2 肝癌细胞发生凋亡 ,诱导 H2 2 肝癌细胞凋亡是 TCS抗肝癌作用的机制之一 ,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值。

癌痛消胶囊调节小鼠荷H_(22)移植性肝癌细胞VEGF表达的实验研究

目的 :通过观察癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的调节作用 ,探讨该药抑制肿瘤的作用是否与抑制肿瘤血管生成有关。方法 :于昆明种雄性小鼠前肢右腋皮下接种0 2mlH22 肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml)进行造模。利用造模动物观察瘤块重量 ,计算肿瘤生长抑制率 ,用免疫组化法检测瘤细胞中VEGF的表达程度。结果 :与阴性对照组相比 ,癌痛消胶囊组有明显的抑瘤作用(P<0 05) ,抑瘤率为36 34 % ;病理检测显示 ,造模各组VEGF阳性表达率为100% ,但程度不同 ,癌痛消胶囊组可使肿瘤组织VEGF的表达明显下调 ,与阴性对照组比较 ,差异有显著性意义(P<0 01)。结论 :癌痛消胶囊对小鼠荷H22 移植性肝癌细胞的生长有抑制作用 ,能减少血管生成调控基因VEGF的表达。

小鼠肝癌H_(22)细胞LDL受体活性的研究

目的 :观察小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性。方法 :对小鼠肝癌H2 2 细胞和正常肝细胞进行受体结合的Scatchard分析和单点分析。结果 :①H2 2 细胞对LDL的亲和性与正常肝细胞相同 ,但H2 2 细胞Bmax明显增多 ;②H2 2 细胞对LDL的非特异性结合、内移和降解能力与正常肝细胞相同。结论 :小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性增高 ,其对LDL的内移和降解功能未变。

超声激活血卟啉对小鼠肝癌H 22细胞抑制效应的实验研究

通过台盼兰拒染法,以细胞存活率为指标观察超声激活血卟啉对H 22肿瘤细胞在体外的直接杀伤作用;通过小鼠H 22实体瘤模型,以体积和体重变化为指标观察超声激活血卟啉对H 22肿瘤细胞在体内的生长抑制作用.结果表明,超声激活血卟啉在体内体外对H 22肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用.

拟黑多刺蚁对H22荷瘤鼠抑制肿瘤生长的初探

通过建立动物肿瘤模型,采用对比实验法,探讨拟黑多刺蚁对H22荷瘤鼠的抑瘤作用.结果表明:拟黑多刺蚁具有抑制H22肿瘤细胞的作用,并增强荷瘤鼠的免疫功能.

原卟啉Ⅸ-声动力学方法对H-22肿瘤细胞损伤机制的研究

研究了频率为1.43 MHz、强度为1 W/cm2的聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对H-22肿瘤细胞的损伤作用,并探讨其生物学机制.应用台盼蓝拒染法检测不同处理后肿瘤细胞的存活率,环境扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部的超微结构变化,荧光标记技术检测肿瘤细胞内活性氧的产生,硫代巴比妥酸(TBA)法检测肿瘤细胞脂质过氧化水平的变化.发现原卟啉Ⅸ-声动力学方法对H-22细胞产生的损伤效应表现为:细胞存活率明显下降,细胞表面和内部的超微结构改变,胞内活性氧和脂质过氧化水平增高.结果表明:原卟啉Ⅸ-声动力学方法能够使肿瘤细胞产生活性氧自由基,造成膜脂质过氧化,直接或间接地破坏细胞的膜系统,从而杀伤肿瘤细胞.

The Observation of the Photodynamic Effect of Hematoporphyrin Derivative (HpD) Combined with Aidiron on Ascitic Hepatoma Cells in Vitro

In this study, we found, through biochemical synthesis of DNA with the incorporation of ~3HTdR and morphological observation of the tumor cells, that aidiron (912), an extract from earthworm, had a stronger kilting effect (27%) on mouse ascitic hepatoma tumor cells (H_(22)) in vitro, and that laser-hematoporphyrin derivative (HpD) combined with 912 markedly enhanced the kilting effect (74%) on tumor cells. By means of the fluoresoence spectrophotography we also dis- covered that the killing effect of laser-HpD-912 on tumor calls was closely related with the produc- tion of free radicals and lipid peroxidation.

DHA复合物对鼠移植瘤细胞和T淋巴细胞细胞周期及凋亡的影响

目的 研究DHA复合物的抗癌机理。方法 用流式细胞术研究了DHA复合物对荷瘤鼠H2 2 细胞和T淋巴细胞细胞周期及凋亡的影响。结果 ( 1)与阴性对照组相比 ,DHA复合物中、高剂量组G0 G1期H2 2 癌细胞百分比明显增加 (P <0 .0 1) ;DHA复合物低、中、高剂量组G0 G1期T细胞百分比明显减小 (P <0 .0 1)。 ( 2 )与阴性对照组相比 ,DHA复合物低、中、高剂量组S期H2 2 癌细胞百分比明显减小 (P <0 .0 1) ,S期T细胞百分比明显增加 (P <0 .0 1)。 ( 3)与阴性对照组相比 ,DHA复合物中剂量组G2 M期H2 2 癌细胞百分比显著减少 (P <0 .0 1) ,DHA复合物低、高剂量组G2 M期H2 2 癌细胞以及DHA复合物低、中、高剂量组G2 M期T细胞百分比均显著升高 (P <0 .0 1)。 ( 4 )与阴性对照组相比 ,DHA复合物低、中、高剂量组H2 2 癌细胞增殖指数 (PI)明显下降 (P <0 .0 1) ,T细胞增殖指数明显升高 (P <0 .0 1)。 ( 5 )与阴性对照组相比 ,DHA复合物低、中、高剂量组H2 2 癌细胞及DHA复合物中、高剂量组T细胞凋亡率明显升高 (P <0 .0 1)。结论 DHA复合物可抑制H2 2 癌细胞的增殖 ,促进T淋巴细胞增殖 ,同时DHA复合物还可促进H2 2 细胞。

CHP调节NHE1活性影响细胞生长和死亡

钠氢离子交换蛋白(NHE)定位于细胞膜,它的重要功能是调节细胞内pH值。钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE必要的活性调节亚单位。研究了NHE1结合CHP与否对细胞生长和死亡的影响。结果显示,CHP结合于NHE1细胞质调节区域之中靠近细胞膜部位,二者以疏水键结合而形成蛋白IV级结构。在细胞内pH5.4的非生理条件下,表达没有CHP结合能力的突变体NHE1-4R细胞只有表达野生型NHE细胞7.6%的最大摄取钠活性;在细胞内pH7.2的生理条件下,这个比例降至1.2%的摄取钠活性。与野生型NHE1比较,有血清时表达突变体NHE1-4R的细胞生长速度减慢;在血清饥饿时这些细胞因自身的胞浆酸性化而死亡数增加。实验结果证明,CHP是NHE1生理活性的必要调节因子,它能影响细胞生长和死亡。

EFFECTS OF ACUMOXI ON IL2-IFN-NKC IMMUNOREGULATORY NETWORK AND ITS RELATED MACROPHAGE-IL1-Th NETWORK AND ON TUMOR——Observation on the Effect of Acumoxi on the Macrophage-IL1-Th Network and on the Metastasis of Hepatoma

Objective: To observe the effect of acumoxi (acupuncture and moxibustion) on macrophage (Mφ)-lL1-Th net-work and hydroperitoneum hepatoma (H 22) metastasis in mice. Methods: A total of 36 BALB/ c male mice bearing H 22 are randomly divided into control, acupuncture and acumoxi groups with 12 cases in each group. In the later 2 groups, Dazhui (GV 14) and Guanyuan (CV 4) are punctured once daily, continuously for 18 days, and in acumoxi group, the two acupoints were also moxibustioned alternatively with moxa stick once every day. After killing the mice, the tissue samples of the 3 groups are treated routinely step by step and analyzed by means of colorimetric analysis for determining the phagocytic function of the macrophages; and the content of IL1 of the Mφ supernatant is assayed with serum plate agglutination (SPA)-Ig floral hoop method of T helper cell (Th) monoclonal antibody; the weight of the reniportal lymph node, the kidney and the lung, and the number of the cancerous nodes on the pulmonary surface are calculated. Results: After acupuncture and moxibustion treatment, the immunoregulatory network indices of acumoxi group increase obviously compared with those of control group(P<0.01), showing an anti-metastasis effect of acumoxi on H 22. Conclusion: Results of the present study and those of our former research prove that acupuncture and moxibustion can suppress the tumor growth and H 22 metastasis by the enhancement of the immunoregulatory network.

青蒿琥酯抗肝癌作用的实验研究

目的 :研究青蒿琥酯的抗肝癌作用。方法 :运用小鼠肝癌H2 2 癌模型、MTT法和集落形成法 ,观察青蒿琥酯对荷瘤鼠和人肝癌SMMC 772 1细胞株的作用。结果 :口服青蒿琥酯 30 0mg·kg-1·d-1,肿瘤受到明显抑制 ,抑瘤率在 3次实验中分别为 49.1% ,48.7% ,46 .6 % ;小鼠生存时间明显延长。青蒿琥酯与 5 氟尿嘧啶有协同抗肿瘤作用。青蒿琥酯体外对人肝癌细胞有明显细胞毒作用 ,其IC50 为 2 .0 7μg·ml-1,同时抑制人肝癌SMMC 772 1克隆原细胞形成集落 ,其IC50 为 2 .48μg·ml-1。结论

甲胎蛋自对H－22腹水肝癌小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

用抗甲胎蛋白（ａｎｔｉ－ＡＦＰ）的单克隆抗体亲和层析柱从脐带血中提纯ＡＦＰ。通过ＭＴＴ法体外观察人ＡＦＰ对Ｈ－２２腹水肝癌小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。结果表明，Ｈ－２２小鼠脾淋巴细胞经不同浓度ＡＦＰ（１２．５－１００μｇ／ｍｌ）处理后，对刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）诱导的增殖反应明显减弱，抑制率达３９．８％－６６％，并有一定的浓度依赖关系；而用不同浓度的人血清白蛋白（ＨＳＡ，３．１～１００μｇ／ｍｌ）体外处理，则无明显抑制作用。另外，我们用反证法证实，ＡＦＰ抗体（５５、１１０μｇ／ｍｌ）能明显阻断人ＡＦＰ（５０、１００μｇ／ｍｌ）对Ｈ－２２小鼠脾淋巴细胞增殖的抑制作用。

凯息平口服液对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤生长作用及抑瘤机理探讨

凯息平口服液对小鼠移植性H2 2 实体瘤有明显的抑瘤生长作用 ,2 7.0、18.0、9.0g/kg剂量的抑瘤率分别 4 7.6 %、4 7.8%和 33.8% ;对H2 2 腹水癌小鼠有一定的延长生存期的作用 ,强于阳性对照药复方天仙胶囊 ,且没有氟尿嘧啶 (5 FU)所表现的毒副作用。对体外培养的H2 2 细胞有一定程度的抑制作用 ,最低有效药物浓度可达 2 5mg/L ,抑制作用可维持 4 8h以上。但对培养的脾T细胞 ,其剂量达 80 0mg/L时才表现出抑制增殖的作用。表明凯息平口服液对肿瘤细胞有独特的抑制作用 ,绝非细胞毒所致。实验还表明 :凯息平口服液能增强荷瘤鼠的T、B淋巴细胞增殖能力 ;对自然杀伤细胞 (NK)的活性也有明显的促进作用 ,同时明显增强腹腔巨噬细胞 (MΦ)的吞噬活性 ,显示了其在抗肿瘤免疫中具有重要的作用。

中药复方Ⅰ号对荷瘤鼠肿瘤生长抑制作用的实验研究

目的 研究中药复方Ⅰ号对移植性肿瘤的抑制作用。方法 运用人工形成的肿瘤模型 ,观察中药复方Ⅰ号单用、联用其它化疗药物后的抗癌效果及其相互作用。结果 中药复方Ⅰ号 7 5、15、3 0g/kg灌胃给药 ,对S1 80 、H2 2 荷瘤小鼠和大鼠W2 56 肉瘤有抑制作用 ,瘤重抑制率分别达 2 6%～ 47%、18%～ 47%、13 %～ 43 %。对大剂量环磷酰胺引起白细胞减少的毒副作用有对抗效果 ,用药后能使外周血白细胞和骨髓有核细胞显著回升。此外 ,中药复方Ⅰ号与环磷酰胺、顺铂等化疗药配伍用于小鼠移植性肿瘤的试验性治疗 ,有增效、减毒的功效。结论 中药复方Ⅰ号能抑制多种肿瘤细胞的生长 ,与环磷酰胺。

榄香烯复合瘤苗主动免疫抗瘤效应增强途径的比较研究

将ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠的Ｈ２２ 腹水型肝癌和６１５ 系小鼠的Ｌ６１５ 白血病细胞经榄香烯或／和热休克等不同处理制成瘤苗， 进行体内主动免疫实验和致敏脾细胞的体外细胞毒活性实验。结果表明： 热休克和榄香烯复合瘤苗比单一因素处理的瘤苗免疫效果好， 经Ｈ２２和Ｌ６１５ 复合瘤苗免疫、攻击后两个月动物存活率分别达６０－０％ 、８５－０％ （ Ｐ＜０－０１）， 并且能够明显提高死亡小鼠的平均存活天数。瘤苗免疫动物脾细胞的细胞毒活性分别达５８－８％ 、６９－７％ （ Ｐ ＜ ０－０１） 。在制备复合瘤苗时先加入榄香烯后再热休克的免疫效果较好， 这在Ｌ６１５ 瘤苗更为明显， 从而为今后瘤苗免疫在临床上的应用提供了进一步的实验依据。

肿瘤基质成纤维细胞模型的建立及生物学特性研究

目的 建立肿瘤基质成纤维细胞模型并探讨其恶性生物学特性 ,为研究其恶性转化机制、开发靶向肿瘤基质的抗癌药物提供有价值的细胞模型。方法 用小鼠肝癌细胞H2 2 培养上清液诱导小鼠成纤维细胞L92 9,获得能稳定生长的L92 9 H2 2 细胞。用光镜、电镜观察其形态改变 ,MTT法检测其生长情况 ,免疫细胞化学测定其PCNA、bcl 2、MMP 9、TN表达变化 ,RT PCR测定其端粒酶活性 ,并分析其核型、蛋白合成能力、对常用抗癌药物的反应性及其条件培养基 (conditionedmedium ,CM)对H2 2 细胞生长的影响。结果 L92 9 H2 2 细胞出现多核和畸形核 ,染色体众数略有增加。细胞群体倍增时间较亲代细胞缩短 (t=2 65 41,P <0 0 5 ) ,分裂指数增高 (χ2 =4 5 2 5 ,P <0 0 5 ) ,PCNA、bcl 2、MMP 9、TN表达增强 (t≥ 3 3 0 5 5 ,P<0 0 1)。端粒酶活性增高 (t=-4 0 4163 ,P <0 0 0 1)。L92 9 H2 2 细胞对作用于S期或S期和M期或细胞骨架的抗癌药物较L92 9敏感 (q≥ 3 0 15 2 ,P <0 0 5 )。蛋白质合成能力增强 (q =-5 90 11,P <0 0 0 1)。其CM促进H2 2 细胞生长。结论 L92 9 H2 2 细胞较亲代细胞增殖快 ,核型发生变化 ,存活能力强 ,功能活跃 ,表达并分泌促进肿瘤细胞生长与侵袭的因子增强 。