小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立

以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12

附植前小鼠胚胎上H-Y抗原表达的研究

用 8～ 1 2周龄 BALB/c公鼠采取皮肤移植和脾细胞腹腔注射 2种方式免疫同日龄纯系 BALB/c母鼠 ,制备 H-Y抗血清。经精子微量细胞毒性试验 ,筛选的抗血清用于胚胎体外培养 ,以鉴定附植前小鼠胚胎上 H-Y抗原的表达。选用 8cell-早期囊胚进行体外培养 ,分别于 5～ 6、1 8和 2 4 h观察胚胎发育情况。 5～ 6h后 ,H-Y抗血清培养的胚胎退化率高达 4 0 %,且发育迟缓 ,与自然性比例差异不明显 ( P>0 .0 5)。正常血清培养的胚胎 2 4 h左右 。

H-Y抗血清的制备及检测研究

选用８ ～１２ 周龄纯系的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ Ｃ 母鼠， 用同日龄的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ Ｃ 公鼠采取皮肤移植和脾细胞注射２ 种方式免疫， 制备 Ｈ Ｙ 抗血清， 经精子微量细胞毒性试验， 筛选抗血清。皮肤移植５ 只小鼠中只有１ 只产生较好的抗血清， 脾细胞注射的４ 只小鼠都能产生较好的抗血清， 产生抗血清的小鼠占５５ ％ 。抗血清与昆明鼠正常８ｃｅｌｌ早期桑椹胚培养５ ～６ 、１８ 和２４ ｈ 后， 退化率达４３３ ％ ， 经 Ｘ２ 检验差异不显著（ Ｐ ＞ ００５） ， 符合自然性比例。

奶牛X、Y精子分离及胚胎性别鉴定技术的研究进展

近年来,奶牛胚胎移植技术的大范围推广应用,大幅度提高了国内外奶牛产业的发展速度。随着奶牛X、Y精子分离技术和性别鉴定的进一步研究,可以通过人为地干预或操作,使母牛按照人们的愿望繁殖所需的高产母牛犊,让特定品质的奶牛发挥自己的优势,对畜牧生产意义深远。笔者对该项技术的研究进展和应用前景作以总结,以供参考。

稳定pH值对猪精液液态保存效果的影响

为了研究pH值变化对猪精液液态保存效果的影响,找到适合猪精液液态保存pH值,从而改进液态保存液的配方,提高人工授精效率,试验比较了不同pH值条件下猪精液液态保存效果,通过检测精子活力、存活时间、顶体完整性和质膜完整性等参数,研究pH值变化对猪精液液态保存效果的影响,并尝试改进保存缓冲液。结果表明:采用Androhep保存时,最佳初始保存pH值为6.40。在保存的第3天稳定pH值组能够显著提高精子活力(P<0.05),用2-吗啉乙磺酸(MES)代替Androhep保存液中的4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES),在保存的第3天能显著提高精子活力、存活时间(P<0.05),同时维持更高的质膜完整性,但是顶体完整性差异不显著(P>0.05)。说明采用能够稳定pH值的保存液更有利于精液常温保存。

体外受精-胚胎移植后过夜培养精子活率与受精率关系的探讨

目的探讨过夜培养后精子活率与体外受精（IVF）受精率的关系。方法回顾性分析2007年1—12月北京大学第三医院811个常规IVF受精后精子过夜培养后的活率。分为过夜精子活率〈20％组（A组），过夜精子活率20％～80％组（B组），过夜精子活率〉80％组（C组），比较三组的受精率，可用胚胎率。结果A组受精率（47．6％）或B组受精率（57．2％）明显低于C组受精率（62．7％），差异具有统计学意义（P〈0．05），过夜精子活率〈80％组（A组＋B组）的可用胚胎率（72．1％）低于活率〉80％组（77．4％），两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论精子过夜培养对受精率的评价有一定的参考价值和意义。