COMPARATIVE STUDY OF PHOSPHOTYROSYL PROTEIN PHOSPHATASE OF MICE NORMAL LIVER, REGENERATING LIVER, AND MICE H22A HEPATOMA ASCITES CELL

In regenerating liver of mice, marked increase of the activity of phosphotyrosyl protein phosphatase (PTPP) in cytosol was observed. The PTPP activity varied with time and reached the highest level between 24 to 48 hours after partial hepatectomy. In H22a cells the PTPP activity found in every subcellular fraction was lower than that of the normal liver. The PTPP activity was mostly concentrated in lysosomes of normal liver, but mainly distributed in nucleus, cytosol and microsome of regenerating liver. In H22a cells PTPP activity seemed distribute evenly. Five similar major PTPP peaks (I-V) were obtained on DEAE cellulose chromatography of cytosols from all three of liver cells studied. However, two additional PTPP peaks, a and b, were also obtained from cytosol of liver.

隐丹参酮对肝癌H22荷瘤小鼠放射增敏作用的影响

背景与目的:醌类化合物可使肿瘤细胞周期发生变化,影响放疗的敏感性。本研究旨在探讨隐丹参酮(cryptotanshinone)对荷H22肝癌小鼠的放射增敏作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法:建立小鼠H22肝癌模型,分为空白对照组、单照射(irradiation,IR)组、高浓度隐丹参酮组及低、中、高浓度隐丹参酮联合IR组。经照射后,观察荷瘤鼠肿瘤生长状况,记录肿瘤照射后生长时间,计算肿瘤生长延缓时间和增敏系数。照后22 d处死小鼠,剥瘤称重,计算抑瘤率。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果:不同浓度的隐丹参酮联合放疗均能抑制肿瘤生长,并具有较好的放射增敏作用,其增敏比分别为1.22、1.43和2.19。隐丹参酮可使肝癌H22细胞周期的构成发生明显的变化,使S期的细胞比例降低,出现明显的G2/M期阻滞,并诱导细胞凋亡。结论:隐丹参酮对肝癌H22荷瘤小鼠具有较高的抑瘤作用和放射增敏作用。其增敏效应使细胞生长停滞在G2/M期并诱导细胞凋亡,使S期细胞比例降低,从而加强射线对肿瘤细胞的杀伤能力。

褪黑素对H22肝癌小鼠的免疫调节及抗肿瘤作用

目的：观察褪黑素（ＭＬＴ）对荷瘤小鼠的免疫调节及抗肿瘤作用。方法：以Ｈ２２肝癌小鼠为模型，采用流式细胞仪技术及四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法测定荷瘤小鼠的各项免疫指标。结果：ＭＬＴ能提高荷瘤小鼠ＣＤ４＋／ＣＤ８＋值，协同ＩＬ－２提高外周血淋巴细胞及嗜酸性粒细胞数量，增强脾细胞ＮＫ及ＬＡＫ活性，促进ＩＬ－２的诱生，并且ＭＬＴ能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长，延长其存活时间，与ＩＬ－２存在明显协同性。ＭＬＴ在体外对Ｈ２２细胞无直接影响。结论：ＭＬＴ可作为一种生物反应调节剂（ＢＲＭ）在肿瘤的免疫治疗中发挥作用。

小柴胡汤对H22肝癌小鼠癌细胞的增殖抑制作用及其作用机制研究

目的:探讨小柴胡汤对改善H22肝癌小鼠免疫功能及其抑制肿瘤增殖的效果,为H22肝癌临床治疗提供实验依据。方法:优选昆明小鼠30只为研究对象,通过腹腔注射H22瘤株建立H22肝癌小鼠模型。随机将其分为健康对照组、低剂量小柴胡、中剂量小柴胡、高剂量小柴胡、5-FU组以及H22肝癌模型组,每组小鼠各5只。对比分析治疗组各组用药前后体重、抑瘤率、血清肿瘤标记物以及炎症因子水平的差异。结果:①体重分析:小柴胡中、高剂量组用药后小鼠体重与正常对照组无统计学意义(P>0.05),5-FU组小鼠与对照组相比体重显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。②抑瘤率:5-FU组抑瘤率高于其他治疗组,而小柴胡中、高剂量组抑瘤率高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。③血清肿瘤标记物:柴胡中、高剂量组血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)低于低剂量组及5-FU组,而铁蛋白(SF)高于低剂量组及5—FU组。④炎症因子水平:小柴胡中、高剂量组NK细胞活性、IL—2、INF—γ水平显著高于低剂量组及5—FU组,而TNF—α水平显著低于低剂量组及5—FU组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一定剂量的小柴胡汤能有效抑制H22肝癌小鼠癌细胞的生长,并能改善机体免疫水平。

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤T淋巴细胞的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤鼠瘤体T淋巴细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞,采用HSP70单抗封闭技术分为白花蛇舌草和党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组;观察各组CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况。结果与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+、封闭组CD4+表达明显上调;党参封闭组CD4+表达也明显上调;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+T淋巴细胞表达明显上调。结论白花蛇舌草诱导恶性肿瘤瘤体HSP70的高表达,增强机体对肿瘤的免疫作用,其机理可能与提高瘤体CD4+、CD8+CTL表达有关。

从细胞自噬角度探讨紫草多糖抑制H22肝癌实体瘤细胞增殖的作用机制

目的:探讨紫草多糖是否通过诱导自噬而抑制H_(22)肝癌实体瘤细胞的增殖。方法:将40只KM小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(阳性药物,30 mg/kg,ip,每4 d给药1次)和紫草多糖低、高剂量组(100、300 mg/kg,ig,每天给药1次),每组10只。各组小鼠均腋下接种H_(22)细胞株复制H_(22)肝癌实体瘤模型,造模同时各给药组小鼠给予相应药物,模型组小鼠ig等体积生理盐水。末次给药后,记录并测定小鼠体质量、瘤质量系数和胸腺、脾脏指数;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定小鼠瘤组织中自噬相关基因Atg5、Beclin1 m RNA表达水平;Western blot法测定瘤组织中自噬微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)蛋白表达水平。结果:紫草多糖可显著降低H_(22)实体瘤小鼠的瘤质量系数,抑瘤率达34.7%;可显著上调瘤组织中自噬相关基因Atg5、Beclin1 m RNA的表达和LC3A/B蛋白的表达,较模型组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草多糖通过促进肝癌细胞的自噬,从而抑制H_(22)肝癌实体瘤细胞的增殖、延缓肿瘤生长。

苏木抗癌有效成分抗移植性肝癌H22的实验研究

目的 研究苏木抗癌有效成分 (CAE -B)抗移植性肝癌H2 2的效果 ,以及CAE -B对小鼠微核和TSGF的影响。方法 建立小鼠H2 2肝癌腹水及实体模型 ,测定CAE -B对荷瘤小鼠生命延长率、抑瘤率、微核率及小鼠血清中TSGF含量的变化。结果 CAE -B具有很强的抗移植性肝癌H2 2的作用 ,经治疗荷瘤鼠生命延长率达 1 45 .4% ,抑瘤率达 47.7% ,微核率显著低于阳性对照环磷酰胺 (P〈0 .0 0 1 ) ,治疗组小鼠血清中TSGF含量明显低于H2 2对照鼠 ,且接近正常鼠含量。结论 CAE -B抗癌作用显著 ,致畸率低 ,明显阻碍恶性肿瘤特异性生长因子的产生。CAE -B将是一种新的抗肿瘤中药。

培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长的抑制作用

目的:观察培元抗癌汤联合替加氟对小鼠H22肝癌细胞生长抑制作用以及对癌相关成纤维细胞(CAFs)调节作用和对细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8的影响。方法:制备H22肝癌细胞腹水型瘤株悬液,在健康小鼠腋下接种瘤细胞悬液造模,造模成功后随机分为模型组、替加氟组、中西结合组,分别予0.9%的氯化钠溶液、替加氟、培元抗癌汤联合替加氟进行药物干预。观察各组小鼠一般情况,连续用药两周后处死小鼠取瘤组织称重,并计算抑瘤率;Western blot法检测转移瘤中α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达水平。结果:干预后,中西结合组较其他两组比较,一般情况较好,小鼠进食、饮水状况良好,体重有所增加,对外部刺激反应敏感,活动无明显异常。替加氟组、中西结合组的瘤体重量明显低于模型组;中西结合组瘤体重量较替加氟组低,差异有统计学意义(P<0.05)。替加氟组、中西结合组小鼠α-SMA、Vimentin、CXCL1、CXCL2、CXCL8蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05);中西结合组的上述指标均低于替加氟组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:培元抗癌汤联合替加氟能调节肿瘤微环境中CAFs及细胞因子CXCL1、CXCL2、CXCL8,抑制小鼠H22肝癌细胞生长。

佐剂增强的肿瘤细胞裂解物疫苗抗小鼠H22肝癌作用

以鼠源肝癌H22全细胞裂解物为抗原,通过化学偶联白喉毒素(DT)和串联重复的T辅助表位mH-SP70407-426肽段,混合OK432(链球菌A群)制成肿瘤全细胞疫苗H22-DT-M2-OK432(HDTMOK)。治疗性免疫结果显示,疫苗激发的免疫应答对H22肿瘤起到了有效的抑制作用。为进一步提高该疫苗的抗肿瘤效果,用偶联的疫苗制备免疫刺激复合物(ISCOM),并验证其抑瘤效果。治疗性免疫结果显示,与PBS组相比,ISCOM疫苗组平均瘤重和瘤体积显著降低(P<0.01),同时有效地抑制了小鼠皮内肿瘤模型中的血管新生(P<0.01);ELISA法从血清中检测到高滴度的抗体。且与HDTMOK疫苗相比,ISCOM疫苗抑瘤作用提升显著(P<0.05)。HDTMOK能有效抑制小鼠肝癌实体瘤生长,佐剂配伍后的疫苗对H22的抑制更为显著,能够有效提升肿瘤全细胞疫苗的抗肿瘤能力。

反应停对小鼠肝癌细胞H22移植瘤生长的影响

背景与目的:反应停因具有抗血管生成作用而可能对某些肿瘤有治疗作用。本研究旨在通过观察反应停对小鼠H22移植瘤生长的影响,探讨反应停的作用机制。方法:BALB/c小鼠皮下接种H22细胞,分别从接种当天(第一给药组)和第4天(第二给药组)开始每天腹腔注射反应停50mg/kg,每天测肿瘤直径,第12天处死动物,称瘤重。对移植瘤组织,用抗CD31单抗做免疫组化染色,测定微血管密度;流式细胞术分析CD31表达以及凋亡率;逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-ploymerasechainreaction,RT-PCR)检测血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)mRNA的表达。结果:第一给药组的瘤重为(2.27±0.33)g,小于对照组的(2.70±0.61)g,但差异没有统计学意义(P>0.05),抑瘤率为15.93%;第二给药组的瘤重为(3.32±0.47)g,小于对照组的(3.42±0.60)g,差异也无统计学意义(P>0.05),抑瘤率为2.92%。第一给药组移植瘤组织中微血管计数和CD31表达分别为(48.4±12.90)和(5.59±0.75),与对照组(81.2±26.91)和(7.04±0.50)比较均显著降低(P<0.05);第二给药组微血管计数和CD31表达分别为(46.4±9.71)和(7.29±0.48),与对照组的(74.0±32.69)和(6.80±0.68)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两给药组移植瘤组织细胞凋亡指数分别为(17.

塞来昔布对H22肝癌组织环氧合酶2及磷脂酶A2抑制作用

目的考察塞来昔布对小鼠H22肝癌细胞移植瘤生长的抑制作用,并探讨其作用机制。方法40只BALB/c小鼠腋下接种H22肝癌细胞,然后随机分为对照组和低、中、高剂量(100、200、400mg/kg)组,于接种后3天灌胃给药,连续用药15天后处死,计算肿瘤的体积和重量;Western blot法检测瘤组织中胞浆磷脂酶A2和环氧合酶2的表达。结果塞来昔布低、中、高剂量治疗组的小鼠平均瘤重均低于对照组,与对照组相比较有显著性差异(P<0.05)。塞来昔布治疗组抑瘤率均大于30%,其中高剂量治疗组的抑瘤率大于75%,作用明显。塞来昔布能够明显抑制胞浆磷脂酶A2和环氧合酶2的表达,具有剂量依赖关系。结论塞来昔布对H22肝癌具有抑制作用,其机制可能是通过抑制胞浆磷脂酶A2及环氧合酶2的表达而发挥抗肿瘤的作用,二者在此过程中具有协同效应。

放射性^(32)P-磷酸铬胶体治疗H22移植瘤的实验研究

目的 :探讨不同剂量的3 2 P 磷酸铬 (Cr3 2 PO4)胶体局部注射对小鼠H2 2移植瘤和区域淋巴结转移灶的治疗作用。方法 :建立小鼠H2 2移植瘤模型 14d后分别给予高、中、低剂量的Cr3 2 PO4胶体瘤体局部注射 ,观察Cr3 2 PO4胶体的治疗作用及对肿瘤组织和细胞的形态学影响。结果 :不同剂量Cr3 2 PO4胶体注射后瘤体局部依次出现红肿、表面苍白、囊性变 ,水肿消退后爪垫坏死。光镜下瘤体癌细胞呈多边形 ,大小不一 ,核大 ,可见病理分裂像并侵袭达肌层 ,同侧月国窝和腹股沟淋巴结均出现淋巴结结构破坏 ,呈现大量癌细胞浸润。治疗早期瘤体和月国窝淋巴结转移灶呈现局灶性坏死 ,后期移植瘤和淋巴结转移灶肿瘤组织完全坏死 ,结构破坏 ,并可见出血灶。电镜下 ,治疗早期淋巴结转移灶和瘤体中癌细胞线粒体空化 ,内质网和细胞器少见。治疗后期细胞结构消失 ,呈现大量细胞碎片、脂肪滴和空泡。结论 :Cr3 2

黄芪多糖联合顺铂治疗H22肝癌的实验研究

目的:观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(DDP)对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法:复制H22肝癌小鼠移植瘤模型,将40只接种H22肝癌细胞昆明小鼠随机分成4组,其腹腔分别注射生理盐水(对照组)、ASP组、DDP组以及APS+DDP组,观察小鼠的毒副反应以及生存质量。实验19d后,处死全部小鼠,剥离皮下肿瘤,称小鼠肿瘤重量,计算出抑瘤率。结果:APS单用组的H22肝癌平均瘤重为(1.29±0.29)g,明显低于对照组的(1.86±0.73)g(t=3.9746,P<0.001)。APS+DDP组的H22肝癌平均瘤重为(0.52±0.31)g,均明显低于APS单用组(t=9.9351,P<0.001)和DDP单用组(t=4.1970,P<0.001);其抑瘤率达72.0%,明显高于APS单用组(χ2=17.3756,P<0.001)和DDP单用组(χ2=5.0794,P<0.05)。APS+DDP组小鼠毒副反应明显低于DDP组,生存质量优于DDP组。结论:黄芪多糖和顺铂合用对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用,并能降低顺铂毒副反应,提高生存质量。

消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响

目的:研究消癌解毒方对肝癌细胞株H22凋亡及Survivin表达的影响,探讨其可能的抗癌机制。方法:建立小鼠H22移植瘤模型,分对照组和XJR低、中、高剂量(10、30、90g/kg)组及顺铂(0.001g/kg)组进行治疗,流式细胞术检测各组移植瘤细胞周期及凋亡率,Western blot法检测H22移植瘤细胞Survivin蛋白表达。结果:消癌解毒方各剂量组和顺铂阳性对照组的小鼠平均凋亡率均高于模型组小鼠平均凋亡率。二者比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。FCM细胞周期显示,与模型组比较,消癌解毒方中剂量组和顺铂阳性对照组细胞G0/G1期比例相对增加,P<0.05,差别具有统计学意义,S期及G2从期比例相对下降,细胞周期于G0/G1期发生阻滞,P<0.05,差别具有统计学意义。Western blot法检测各组Survivin蛋白表达结果与模型组相比,各组Survivin蛋白表达均有下降趋势,其中DDP阳性对照组Survivin蛋白表达降低最明显,消癌解毒方10mg/kg低剂组、90mg/kg高剂组和30mg/kg中剂组Survivin蛋白表达也依次降低。结论:消癌解毒方能促进肿瘤细胞凋亡,抑制Survivin蛋白表达,是其抗癌作用机制之一。

热休克蛋白70-H22肽刺激DC诱导特异性抗肝癌免疫

目的探讨热休克蛋白70(TB.HSP70)-H22肽是否能促进树突状细胞(DC)活化成熟并诱导H22特异性抗肿瘤免疫。方法取小鼠骨髓于培养第7天分为A、B、C 3组,分别给予未刺激、TB.HSP70-H22肽(10μg/mL)、TB.HSP70-H22肽(20μg/mL)干预24h,取上清液用ELISA法检测IL-12、IL-10,用FACS法检测CD40、CD80,用混合淋巴细胞反应检测淋巴细胞增殖,用MTT法检测DC活化淋巴细胞对H22和B16肿瘤细胞杀伤率。结果与A组比较,B、C组除对B16细胞杀伤率差异无统计学意义外,B、C组IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组对B16细胞杀伤率差异无统计学意义,IL-10明显降低,CD40、CD80、IL-12、淋巴细胞增殖程度和对H22杀伤率均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TB.HSP70-H22肽能明显促进DC活化成熟,诱导H22特异性抗肿瘤免疫,为该疫苗用于肝癌免疫治疗提供了理论基础。

免疫印迹技术分析树舌多糖GF对H22肝癌移植瘤PTEN蛋白表达的影响

目的探明树舌多糖(GAPS)GF对H22肝癌移植瘤PTEN蛋白表达的影响。方法昆明种小鼠随机分为两组:肿瘤组和树舌多糖组,接种后各组肌肉注射给药,分别给与生理盐水和树舌多糖GF。连续10 d,于末次给药24 h,处死小鼠,剥离肿瘤组织。Western blot技术检测各组样品PTEN蛋白的表达量。结果肿瘤组检测结果为阴性,树舌多糖组检测结果为阳性。结论树舌多糖GF抗肿瘤的作用靶点之一可能为抑癌基因PTEN。

黄芪多糖联合顺铂治疗H22肝癌的实验研究

目的观察黄芪多糖联合顺铂对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法复制H22肝癌小鼠移植瘤模型。将40只接种H22肝癌细胞昆明小鼠随机分成4组:对照组、黄芪多糖组(APS)、顺铂组(DDP)、联合组(APS+DDP)。治疗期间,观察小鼠的毒副反应以及生存质量。实验19 d后,处死全部小鼠,剥离皮下肿瘤,称小鼠肿瘤重量,计算出抑瘤率。结果APS单用组的H22肝癌平均瘤重为(1.29±0.29)g,明显低于对照组的(1.86±0.73)g(t=3.975,P<0.001)。APS与DDP合用组的H22肝癌平均瘤重为(0.52±0.31)g,均明显低于APS单用组(t=9.935,P<0.001)和DDP单用组(t=4.197,P<0.001);其抑瘤率达72.0%,明显高于APS单用组(2χ=17.376,P<0.001)和DDP单用组(2χ=5.079,P<0.05)。联合治疗组小鼠毒副反应明显低于DDP组,生存质量优于DDP组。结论黄芪多糖和顺铂对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用,并能降低顺铂毒副反应,提高生存质量。

磷酸吡哆醛对H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响

为建立DNA拓扑异构酶活性测定方法和探讨磷酸吡哆醛(PLP)抑制肿瘤细胞增殖的可能机制,本实验以DNA琼脂糖凝胶电泳EB荧光法测定了H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶I(TOPOI)的活性。结果表明维生素B6的活性形式PLP能有效地抑制TOPOI松弛负超螺旋的作用,且抑制效应与PLP剂量呈正相关。从而证实PLP能明显抑制TOPOI的活性并在分子水平上调节细胞周期活动和肿瘤细胞增殖活动。

sCD40L联合TB.HSP70-H22肽刺激树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的研究

目的探讨受sCD40L与结核杆菌HSP70(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,TB.HSP70)-H22肽联合刺激的树突状细胞(dendritic cell,DC)在体内外的特异性抗肿瘤免疫。方法取小鼠骨髓于培养第7天分为未刺激组、sCD40L组、TB.HSP70-H22肽组、sCD40L+TB.HSP70-H22肽组,共4组,分别给予相应干预,24 h后取上清,ELISA法检测IL-12、IL-10,流式细胞术检测CD40、CD80,混合淋巴细胞反应(MRL)检测淋巴细胞增殖,MTT法检测对肿瘤细胞的杀伤率;建立小鼠肝癌模型,完全随机分为5组(分别给予生理盐水和以上4种干预获得的DC干预),Ⅰ组:生理盐水对照组,Ⅱ组:未刺激DC治疗组,Ⅲ组:sCD40L DC治疗组,Ⅳ组:TB.HSP70-H22肽DC治疗组,Ⅴ组:sCD40L+TB.HSP70-H22肽DC治疗组,于第21天测瘤质量,ELISA法测血清IL-10、IFN-γ。结果sCD40L+TB.HSP70-H22肽组的各项指标与其他各组相比,IL-10显著降低,其他指标均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅴ组与其他各组相比,IL-10和瘤质量均显著降低,IFN-γ显著上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论受sCD40L与TB.HSP70-H22肽复合物联合刺激后的DC被充分激活,能诱导强有力的特异性抗肿瘤细胞免疫,对H22瘤细胞产生强大的杀伤作用,显著抑制肿瘤的生长。