当归红芪超滤物对重离子12C6+辐射肝癌细胞DNA损伤修复的影响

将人肝癌H22细胞分成4组,分别为对照组、药物组(100 mg/L)、辐射组(2 Gy)及联合组(100 mg/L药物+2 Gy照射),采用CCK-8法、单细胞凝胶电泳、γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术以及Western Blotting印迹法,研究当归红芪超滤物(Radix Angelicae Sinensis and Radix Hedysari, RAS-RH)对重离子12C6+辐射引起人肝癌H22细胞DNA损伤修复的影响和其可能的机制。结果表明,在0~72 h和给药剂量为5~200 mg/L范围内,RAS-RH对人肝癌H22细胞的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其20%抑制浓度IC20为(117.6±2.15)mg/L;单细胞凝胶电泳显示联合组头部DNA含量低于辐射组,而尾部DNA含量、尾距TM、Olive尾距OTM均高于辐射组;γ-H2AX免疫荧光原位杂交技术发现RAS-RH不增加重离子12C6+辐射引起的DNA损伤,但在2-12 h,DNA双链断裂的γ-H2AX foci修复作用被RAS-RH抑制,DNA损伤持续存在;Western Blotting显示RAS-RH通过下调Ku70/80及Rad51的蛋白表达,抑制γ-H2AX的聚集。以上结果说明RAS-RH对人肝癌H22细胞的辐射增敏作用可能是下调DNA损伤修复相关因子Ku70/80及Rad51的表达。

IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价

用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。

中药仙鹤复方水提取物对肝癌H22细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的：观察中药仙鹤复方水提取物（aqueousextract of Xian-he Compound，XHC）对肝癌H22细胞增殖与凋亡的影响度对炎症因子COX-2的影响。方法：栗用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度的H22肝癌细胞增殖情况;Hoechst33342染色观察细胞形态学变化；western blot检测COX-2蛋白质表达；RT-PCR法检测COX-2mRNA水平表达的变化。结果：XHC各剂量组较空白对照组对肝癌H22细胞均有明显的抑制作用，以作用24h后的1．8g／mL XHC组作用最显著，抑制率为71．25％±0．32％；与空白对照组相比，LPS诱导后加1．8g／m LXHC组有较显著的凋亡率．凋亡率由1．91％±0．45％增加至8．53％±0．13％；同样作用条件下与空白对照组及阳性对照组相比COX-2蛋白质及mRNA的表达明显下调。结论：XHC的抑瘤作用与下调COX-22蛋白质及mRNA的表达有密切关系。

云树果实醋酸乙酯提取物对H22荷瘤小鼠抑瘤作用及机制研究

目的研究云树果实醋酸乙酯提取物(EGCF)对H22实体移植瘤的抑制活性及作用机制。方法皮下接种H22瘤株建立小鼠H22实体移植瘤模型,随机分为模型组、环磷酰胺(20 mg/kg,阳性对照,ip给药)组和EGCF高、中、低剂量(400、200、100 mg/kg,ig给药)组,连续给药10 d,另设一对照组。检测小鼠体质量变化、抑瘤率及脾脏指数,ELISA法测定血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量,HE染色法观察肿瘤组织病理学改变,免疫组化法检测肿瘤组织p-STAT3及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果与模型组比较,EGCF高、中、低剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低(P<0.01、0.001),脾脏指数均无显著性差异;高、低剂量组小鼠血清中IL-6水平显著降低(P<0.05),各剂量组TNF-α含量显著增加(P<0.05、0.01);各剂量组瘤组织均出现较多红染、碎片状的干酪样坏死区域,且伴有大量空泡形成;各剂量组均显著减少肿瘤组织VEGF表达,高剂量组显著抑制STAT3磷酸化(P<0.05、0.01)。结论 EGCF能够抑制H22实体移植瘤生长,其机制可能与阻断STAT3相关信号通路有关。

羟基喜树碱双嵌段共聚物纳米粒的抗肿瘤作用

目的研究羟基喜树碱双嵌段共聚物纳米粒(MePEG-PLGA-HCPT-NPs)的抗肿瘤作用。方法选择人肝癌细胞株Bel-7402为体外模型,采用MTT法观察体外肝癌细胞的生长和增殖抑制情况,评价MePEG-PLGA-HCPT-NPs对肝癌细胞的毒性作用;采用激光共聚焦荧光显微镜技术观察其对肝癌细胞摄取药物的影响;采用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验观察荷瘤动物的生长情况,测定肿瘤生长抑制率。结果 MePEG-PLGA-HCPT-NPs能抑制肝癌细胞的生长增殖,且随羟基喜树碱浓度的升高而增强;激光共聚焦荧光照片显示载药纳米粒能有效地被Bel-7402细胞摄取;MePEG-PLGA-HCPTNPs对小鼠的H_(22)实体瘤生长具有明显的抑制作用,低、中、高剂量组的生长抑瘤率分别为37.62%、50.31%和70.25%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MePEG-PLGA-HCPT-NPs具有较强的体外、体内抗肿瘤作用。与羟基喜树碱注射剂相比,MePEG-PLGA-HCPT-NPs的抑瘤率更高,且与剂量有关,并对肿瘤生长的抑制更为持久。

榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H_(22)细胞增殖与诱导凋亡作用的研究

[目的]研究中药莪术提取物榄香烯制剂(Elemene)对小鼠肝癌H22细胞增殖的抑制及诱导凋亡的作用。[方法]体内实验,通过建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。体外进行细胞培养,采用MTT法检测榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡。[结果]不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,5-氟脲嘧啶组抑制肿瘤生长最明显,榄香烯高剂量组较低剂量组抑瘤效果明显;MTT检测到榄香烯对H22细胞株具有抑制作用,呈剂量和作用时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI法检测到早期凋亡细胞;TUNEL法检测到凋亡细胞。[结论]榄香烯可有效抑制小鼠肝癌H22细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡而完成的。