COMPARATIVE STUDY OF PHOSPHOTYROSYL PROTEIN PHOSPHATASE OF MICE NORMAL LIVER, REGENERATING LIVER, AND MICE H22A HEPATOMA ASCITES CELL

In regenerating liver of mice, marked increase of the activity of phosphotyrosyl protein phosphatase (PTPP) in cytosol was observed. The PTPP activity varied with time and reached the highest level between 24 to 48 hours after partial hepatectomy. In H22a cells the PTPP activity found in every subcellular fraction was lower than that of the normal liver. The PTPP activity was mostly concentrated in lysosomes of normal liver, but mainly distributed in nucleus, cytosol and microsome of regenerating liver. In H22a cells PTPP activity seemed distribute evenly. Five similar major PTPP peaks (I-V) were obtained on DEAE cellulose chromatography of cytosols from all three of liver cells studied. However, two additional PTPP peaks, a and b, were also obtained from cytosol of liver.

褪黑素对H22肝癌小鼠的免疫调节及抗肿瘤作用

目的：观察褪黑素（ＭＬＴ）对荷瘤小鼠的免疫调节及抗肿瘤作用。方法：以Ｈ２２肝癌小鼠为模型，采用流式细胞仪技术及四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法测定荷瘤小鼠的各项免疫指标。结果：ＭＬＴ能提高荷瘤小鼠ＣＤ４＋／ＣＤ８＋值，协同ＩＬ－２提高外周血淋巴细胞及嗜酸性粒细胞数量，增强脾细胞ＮＫ及ＬＡＫ活性，促进ＩＬ－２的诱生，并且ＭＬＴ能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长，延长其存活时间，与ＩＬ－２存在明显协同性。ＭＬＴ在体外对Ｈ２２细胞无直接影响。结论：ＭＬＴ可作为一种生物反应调节剂（ＢＲＭ）在肿瘤的免疫治疗中发挥作用。

从细胞自噬角度探讨紫草多糖抑制H22肝癌实体瘤细胞增殖的作用机制

目的:探讨紫草多糖是否通过诱导自噬而抑制H_(22)肝癌实体瘤细胞的增殖。方法:将40只KM小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组(阳性药物,30 mg/kg,ip,每4 d给药1次)和紫草多糖低、高剂量组(100、300 mg/kg,ig,每天给药1次),每组10只。各组小鼠均腋下接种H_(22)细胞株复制H_(22)肝癌实体瘤模型,造模同时各给药组小鼠给予相应药物,模型组小鼠ig等体积生理盐水。末次给药后,记录并测定小鼠体质量、瘤质量系数和胸腺、脾脏指数;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法测定小鼠瘤组织中自噬相关基因Atg5、Beclin1 m RNA表达水平;Western blot法测定瘤组织中自噬微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)蛋白表达水平。结果:紫草多糖可显著降低H_(22)实体瘤小鼠的瘤质量系数,抑瘤率达34.7%;可显著上调瘤组织中自噬相关基因Atg5、Beclin1 m RNA的表达和LC3A/B蛋白的表达,较模型组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:紫草多糖通过促进肝癌细胞的自噬,从而抑制H_(22)肝癌实体瘤细胞的增殖、延缓肿瘤生长。

放射性^(32)P-磷酸铬胶体治疗H22移植瘤的实验研究

目的 :探讨不同剂量的3 2 P 磷酸铬 (Cr3 2 PO4)胶体局部注射对小鼠H2 2移植瘤和区域淋巴结转移灶的治疗作用。方法 :建立小鼠H2 2移植瘤模型 14d后分别给予高、中、低剂量的Cr3 2 PO4胶体瘤体局部注射 ,观察Cr3 2 PO4胶体的治疗作用及对肿瘤组织和细胞的形态学影响。结果 :不同剂量Cr3 2 PO4胶体注射后瘤体局部依次出现红肿、表面苍白、囊性变 ,水肿消退后爪垫坏死。光镜下瘤体癌细胞呈多边形 ,大小不一 ,核大 ,可见病理分裂像并侵袭达肌层 ,同侧月国窝和腹股沟淋巴结均出现淋巴结结构破坏 ,呈现大量癌细胞浸润。治疗早期瘤体和月国窝淋巴结转移灶呈现局灶性坏死 ,后期移植瘤和淋巴结转移灶肿瘤组织完全坏死 ,结构破坏 ,并可见出血灶。电镜下 ,治疗早期淋巴结转移灶和瘤体中癌细胞线粒体空化 ,内质网和细胞器少见。治疗后期细胞结构消失 ,呈现大量细胞碎片、脂肪滴和空泡。结论 :Cr3 2

罗勒多糖对H22肝癌荷瘤小鼠化疗增效药效学研究

目的:研究罗勒多糖对H22荷瘤小鼠化疗增效的影响。方法:通过对H22荷瘤小鼠瘤质量及生存率的检测,观察罗勒多糖与紫杉醇合用对H22荷瘤小鼠的增效作用;通过检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及尿素氮,观察罗勒多糖联合化药对H22荷瘤小鼠肝肾的影响。结果:罗勒多糖能在一定程度上增强紫杉醇的抑瘤作用以及提高小鼠生存率,并对肝肾无损伤作用。结论:罗勒多糖对荷瘤小鼠具有一定的化疗增效及提高生存率的作用。

Aglaroxin C对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用及对其脏器的影响

目的:探讨楝酰胺衍生物Aglaroxin C对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的影响及在实验剂量下对小鼠各脏器有无影响。方法:建立BALB/C小鼠H22腋下实体瘤模型,并随机分为Ⅰ组(尾静脉给药对照组)、Ⅱ组(尾静脉给药组,0.1 mg每只)、Ⅲ组(瘤内给药对照组)、Ⅳ组(瘤内给药组,0.05 mg每只)、Ⅴ组(瘤内给药组,0.1 mg每只),每组各5只。隔天给药(Aglaroxin C)一次,共4次。每日测量小鼠体重。末次给药24小时后切除肿瘤及各组小鼠主要脏器并称重,计算抑瘤率、脏器系数。用各组肿瘤及各脏器制作病理切片,苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE染色),并在光镜下观察其细胞形态学变化。结果:Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组的瘤体质量分别为(2.11±0.50)g、(1.59±0.14)g、(2.30±0.64)g、(1.66±0.12)g、(1.06±0.14)g,Ⅱ组瘤体质量明显小于Ⅰ组(P<0.01),Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组比较差异有统计学意义(P<0.01)。Ⅴ组的抑瘤率最高达53.91%。显微镜下观察肿瘤病理切片,给药组坏死肿瘤细胞明显增多,对照组肿瘤细胞坏死轻微;各组小鼠体质量组间变化无明显统计学意义(P>0.05);显微镜下观察各脏器病理切片,各给药组与对照组相比,无明显异常;脏器系数各剂量组与对照组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Aglaroxin C对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的生长有抑制作用,在实验剂量下对小鼠各脏器无明显影响。

阳虚荷H22肝癌小鼠的中医辨证辨病治疗实验研究

目的:通过对阳虚荷瘤小鼠不同治疗措施的干预结果观察,研究并探讨辨病、辨证、辨证辨病结合治疗对阳虚荷瘤小鼠的作用及其机理。方法:以氢化可的松和肝癌H22瘤株复制阳虚荷瘤小鼠复合模型,实验分模型对照组、辨证组、辨病组和辨证+辨病组,并设不加处理的空白对照组。各组分别在造模结束后第1至15天对其进行生存状态学观察;实验结束后检测各组动物抑瘤情况、IL-1、TNF-α水平。结果:①生存状态学观察结果显示:辨证组辨证辨病结合组动物的生存状态改善明显好于其他两组。②在抑肿瘤生长方面,辨证辨病结合组与对照组比较P<0.01,差异为极显著性;辨病组与对照组比较0.01<P<0.05,差异为显著性;而辨证组与对照组比较P>0.05,无统计学意义。③IL-1和TNF-α以辨证辨病结合组的上升幅度最大,辨证组居其次,但两者之间无统计学意义(P>0.05)。辨病组的上升幅度最小,且与前两组均有统计学意义(P<0.05)。结论:阳虚荷H22肝癌小鼠的复合动物模型是可以成功建立的。辨证结合辨病治疗是目前较为理想的中医治疗模式。从不同角度探索证型的实质,进一步丰富了证型的内涵,为证型治疗开拓了新思路。

猫爪草不同提取物对移植性肝癌H_(22)小鼠的抗肿瘤作用

目的:探讨猫爪草不同提取物对移植性肝癌H_(22)小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用系统溶剂法提取分离猫爪草获得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水5个提取物。建立移植性肝癌H_(22)小鼠模型后,检测各提取物灌胃给药10 d后的抑瘤率、生命延长率、肺脏指数、肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数等。结果:石油醚提取物高、中、低剂量组对H_(22)小鼠的肿瘤生长均无明显的抑制作用。氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物高、中、低剂量组的抑瘤率(%)依次分别为51．78,48．80,33．33;55．51,45．10,31．36;32．71,25．08,24．64;生命延长率(%)分别为10．58,60．09, 58．23;-1．05,56．91,45,09;60．98,59．76,50．84;水提物高、中、低剂量组的生命延长率(%)分别为74．98,74．76, 50．05。水提物可以增加脾脏指数和胸腺指数。结论:猫爪草氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物具有一定体内抗肿瘤作用,而水提取物具有一定的免疫调节作用。

杜梨果实热水提取物对H_(22)小鼠的抗肿瘤作用

目的探讨杜梨果实热水提取物对H22小鼠的抗肿瘤作用。方法以H22(肝癌实体型)移植小鼠为模型研究杜梨果实热水提取物体内抗肿瘤作用,以及对脾脏、胸腺指数的影响。结果杜梨果实热水提取物对H22有显著的抑制作用,使荷瘤小鼠的脾脏、胸腺指数明显升高。结论杜梨果实热水提取物具有一定的抗肿瘤活性。

热休克蛋白gp96-肽复合物的提取及纯化

目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96肽复合物的方法。方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConASepharose亲和层析、SephadexG25更换缓冲液及DEAESephacel离子交换层析分离纯化。③gp96肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot进行蛋白分子量及性质鉴定,Lowry法测定蛋白浓度。结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带,分子量为96kD;Westernblot结果证实为HSPgp96。每20ml压积H22细胞最终获得1mg的HSPgp96。结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSPgp96肽复合物。

芝麻素对H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的观察芝麻提取物芝麻素对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨其作用机制。方法将移植H22肝癌瘤株的64只昆明种小鼠随机分成4组:模型组、环磷酰胺组、芝麻素高浓度组及芝麻素低浓度组,连续用药10d。比较各组抑瘤率、胸腺指数、脾指数及增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平。结果低浓度的芝麻素在体内对H22肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,使动物的免疫器官重量增加,并对肿瘤组织PCNA的表达有显著的抑制作用。结论芝麻素抑制H22细胞的机制可能是通过促进宿主免疫功能、抑制肿瘤细胞内PCNA表达来实现的。

三种治法方药对肝癌H_(22)荷瘤小鼠免疫功能影响的比较研究

目的:观察比较活血化瘀方、清热祛湿方和养阴柔肝方三种不同治法中药复方对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:采用皮下接种肝癌H22细胞的方法建立荷瘤小鼠模型,分别用上述三种中药复方水煎液灌胃处理11d,称量各组脾脏重量,计算脾指数;应用双抗体夹心ABC-ELISA法检测荷瘤小鼠血清IL-2、TNF-α含量的变化。结果:活血化瘀、清热祛湿、养阴柔肝方对H22小鼠脾指数无显著影响(P>0.05);与正常对照组相比,模型对照组血清IL-2的含量显著降低(P<0.05),各用药组与模型对照比较显著升高(P<0.05),三个用药组之间两两比较,也具有显著性差异(P<0.05);与正常对照组相比,各组血清TNF-α的含量均显著升高(P<0.05),与模型对照比较,各用药组显著降低(P<0.05)。结论:三种治法均可有效提高移植性H22荷瘤小鼠的IL-2水平,提高小鼠的免疫力,从而对机体起到保护作用,这可能是其有效抗肝癌的疗效机制之一;三种治法(尤其是清热祛湿组)具有抑制荷瘤鼠机体TNF-α水平异常升高的作用,使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫功能等积极作用。

肿瘤细胞接种数对建立小鼠肝癌移植瘤模型的影响

目的：本研究将通过观察不同肿瘤细胞接种数于不同品系小鼠后的生物学状态、肿瘤进展状况及小鼠生存期等指标，分析肿瘤细胞接种数对建立小鼠肝癌移植瘤模型的影响，为今后小鼠肿瘤模型的建立提供参考。方法：将收集种鼠腹水H22细胞按比例稀释，调整细胞浓度约为1．7×10^7／mL、5．1×10^7／mL、2．5×10’／mL、1．0×10^7／mL，接种至KM小鼠、ICR小鼠右腋皮下。观察小鼠生物学状态、肿瘤体积变化及小鼠生存率等指标。结果：各组ICR及KM小鼠基本情况与接种数负相关，出瘤时间与肿瘤细胞接种数成正比，荷瘤小鼠预后及小鼠生存率与接种数负相关。结论：KM小鼠与ICR小鼠在荷瘤小鼠基本情况、肿瘤生长与进展及生存期方面无明显差异。将种鼠腹水按1：10比例稀释，接种浓度为10^7／mL时，瘤体发展较为平稳，生存率较高，更利于监测和评估小鼠给药前后变化情况。

倍他司汀对荷瘤肝癌小鼠生存时间及肉瘤瘤重的影响

目的研究倍他司汀对荷瘤肝癌小鼠生存时间及肉瘤瘤重的影响。方法采用小鼠移植性肿瘤肝癌H22、肉瘤S180的体内试验方法,以环磷酰胺为阳性对照药,观察倍他司汀不同剂量组对荷瘤肝癌H22小鼠生存天数、生命延长率及荷瘤S180小鼠瘤重、抑瘤率、胸腺和脾脏系数的影响。结果6.67mg/kg、13.33mg/kg、26.67mg/kg倍他司汀组的肝癌H22小鼠生命延长率分别为5.48%、8.22%、16.44%,与剂量呈一定的正相关,26.67mg/kg倍他司汀组的生存天数显著延长(与生理盐水组比较,P<0.05);6.67mg/kg、13.33mg/kg、26.67mg/kg倍他司汀组的S180小鼠抑瘤率分别为6.83%、9.13%、18.05%,与剂量呈一定的正相关,26.67mg/kg倍他司汀组的S180小鼠瘤重显著减少(与生理盐水组比较,P<0.05)。结论倍他司汀对荷瘤肝癌H22小鼠有延长生存时间的作用,对S180肉瘤有抑制作用。

蜂房提取物对荷瘤鼠放化疗的增效作用

目的:观察蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠的放化疗增效作用。方法:移植H22肝癌的小鼠模型,给予蜂房乙醇提取物与化疗和放疗联合,计算抑瘤率及增效率。结果:蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠放化疗的抑瘤率分别达60.5%和61.2%,增效率分别为33.3%和32.6%。结论:蜂房乙醇提取物对荷H22肝癌小鼠的放化疗均有明显的增效作用。

参芪五味子颗粒对肝癌荷瘤小鼠免疫抑制调节的影响

目的探讨参芪五味子颗粒(SQW)对H22肝癌荷瘤小鼠免疫抑制调节的影响。方法运用昆明种小鼠腋下荷瘤模型,称量荷瘤小鼠体重、肿瘤、脾脏、胸腺,计算抑瘤率与脏器指数。采用流式细胞术分析荷瘤小鼠脾淋巴免疫细胞荧光表达情况。ELISA法检测血清中TNF-α水平。结果参芪五味子颗粒治疗后荷瘤小鼠肿瘤缩小,对体重、胸腺指数无影响;但脾脏指数增加,脾脏中的CD3~+CD8~+阳性T细胞、CD19~+阳性B细胞、CD3~+CD4~+NK1.1~+阳性NK细胞比例以及血清中TNF-α水平显著增加(P<0.05或0.01),CD4~+CD25~+Foxp3~+阳性Treg细胞比例呈微弱的减少趋势。结论参芪五味子颗粒可增加H22荷瘤小鼠免疫器官重量,激活机体的细胞免疫和非特异性免疫,增强T细胞介导的抗肝癌免疫反应。

^(32)P-磷酸铬胶体局部给药在肝癌淋巴道转移小鼠的体内分布

目的 研究3 2 P 磷酸铬胶体 (3 2 P 胶体 )局部给药在腹水型肝癌淋巴道转移小鼠的体内分布。方法 在 3 0只KM小鼠爪垫下注射H2 2腹水型肝癌细胞 ,建立淋巴道转移模型 ,动态观察3 2 P 胶体瘤体内注射后在小鼠局部、区域淋巴结和全身各器官组织内的分布情况 ,以及3 2 P 胶体在局部淋巴结内的活度与给药剂量的关系。结果 在分期处死的小鼠中观察到 ,3 2 P 胶体主要聚集在注射局部和区域淋巴结内 ,肝、脾、肺等分布活度较低。区域淋巴结聚集的活度随给药剂量的增加而增高。结论 3 2 P 胶体局部注射后可经淋巴道转运 ,并聚集在区域淋巴结 。

头顶一颗珠对肝癌小鼠免疫功能影响的实验研究

目的研究头顶一颗珠(TTM)注射液对肝癌模型小鼠免疫功能的影响。方法建立H22小鼠肝癌模型,将造模成功的肝癌小鼠依据随机数字表法分为模型组、氟尿嘧啶(5-FU)组、5-FU+TTM组和TTM组,每组10只。模型组、5-FU组每日按10 mg/kg腹腔注射生理盐水及5-FU,5-FU+TTM组在注射5-FU的同时每日腹腔按7.2 g/kg注射TTM,TTM组按7.2 g/kg注射TTM。给药5 d后测定各组胸腺、脾脏指数,检测外周血中白细胞、淋巴细胞及CD3、CD4、CD8细胞的百分比,血清中白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果 5-FU组和TTM组的胸腺指数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),而5-FU+TTM组显著高于模型组(P<0.05)。与模型组比较,5-FU组外周血白细胞与淋巴细胞数量明显减少(P<0.05),TTM组显著增加(P<0.05);5-FU+TTM组白细胞数与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);与5-FU组比较,TTM组白细胞与淋巴细胞数量显著增加(P<0.05),5-FU+TTM组白细胞数量明显增多(P<0.05),但淋巴细胞数量变化差异无统计学意义(P>0.05)。相对于模型组,TTM组、5-FU+TTM组及5-FU组CD3、CD4百分比显著增加(P<0.05),CD8百分比变化差异无统计学意义(P>0.05);与较5-FU+TTM组比较,TTM组、5-FU组CD3、CD4百分比差异无统计学意义,但CD8百分比显著增加(P<0.05)。相对于模型组,TTM组、5-FU+TTM组及5-FU组IL-2、TNF-α水平显著增加(P<0.05);与TTM组比较,5-FU+TTM组、5-FU组IL-2水平差异无统计学意义(P>0.05),但5-FU组TNF-α水平显著增加(P<0.05),5-FU+TTM组差异则无统计学意义(P>0.05)。结论 TTM可以促进T细胞的成熟与迁移,提高肝癌小鼠IL-2、TNF-α水平,增强机体免疫力,具有抗肿瘤功能。

美花风毛菊的抗肝癌活性研究

本研究探究美花风毛菊[Saussurea pulchella(Fisch.)Fisch]对肝癌的抑制作用。采用CCK-8法检测美花风毛菊醇提取物的乙酸乙酯萃取部位(EtOAc extract from Saussurea pulchella,ESP)对人肝癌HepG2细胞株增殖的抑制作用;继而建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,灌胃给予ESP(100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg),连续给药14 d。以肿瘤重量、脏器指数、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、肿瘤和肝肾病理学检查等为评价指标,测定ESP的抗肝癌作用。结果显示,ESP具有抑制HepG2细胞株增殖的作用;ESP还可抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,增加TNF-和IL-2含量,减少VEGF含量,回调ALT、AST、BUN以及CRE含量,缓解荷瘤小鼠肝肾功能损伤。从而得出结论:美花风毛菊乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位具有较好的抗肝癌活性。