蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠疗效及毒副作用的实验研究

目的:探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对H22肝癌细胞的抑制作用及其毒副作用,为进一步分离纯化蟾酥和开发抗肿瘤新药提供动物实验基础。方法:采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化乙醇溶解的蟾蜍分泌物原浆,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(ethanolextractofChinesetoadvenom,EET),分别将其作用于H22实体瘤和腹水瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率和生命延长率,判断疗效;同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用。结果:与对照组比较,5mg/kg和0.5mg/kg的EET对H22荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是51.6%和41.2%,t=2.346,P=0.028;t=2.109,P=0.045。对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是34.7%和27.7%,t=3.346,P=0.002;t=2.312,P=0.035。同时,0.5mg/kg的EET可明显升高白细胞达(11.6±2.3)×109L-1,t=3.326,P=0.002。但EET在5mg/kg时可引起总胆红素升高达(46.5±14.8)μmol/L,t=2.347,P=0.036。结论:0.5～5mg/kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内H22肿瘤细胞的生长,且远远低于华蟾素的有效剂量范围;但EET的剂量达到5mg/kg时可以损伤肝脏。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响

[目的]探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响。[方法]用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用光、电镜法观察H22肝癌细胞凋亡的变化。[结果]蟾蜍毒素组和氟脲嘧啶组的肿瘤抑制率分别是25.6%和30.8%(P<0.05),与对照组比较,肿瘤团块较小,细胞体积较小,异型性不明显,病理性核分裂较少,间质血管较少,坏死现象较轻。电镜下可见凋亡小体形成。[结论]蟾蜍毒素可通过诱导H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。

贝参茱萸方抑制H22肝癌模型小鼠肿瘤生长的作用及其分子机制

目的探讨贝参茱萸方抑制H22肝癌模型小鼠肿瘤生长的作用及其分子机制,为贝参茱萸方的临床应用及开发用于治疗和改善原发性肝癌患者生存质量的中成药制剂提供理论依据。方法建立小鼠肝癌H22移植性肿瘤模型。将40只昆明小鼠分为5组:空白组、模型组、贝参茱萸方低、中、高浓度(0.25g·mL-1、0.5g·mL-1、1g·mL-1)组,每组各8只。于造模后第二天开始灌胃给药,每日一次,每次0.4 mL/只,连续给药30天。给药期间对H22荷瘤小鼠体重、饮食量及肿瘤大小进行测量;HE染色法观察肿瘤细胞形态的变化;免疫组化法检测肿瘤增殖标志物Ki67的阳性表达水平;Western blot法检测caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平。结果(1)与模型组相比,贝参茱萸方高、中浓度组的小鼠肿瘤体积在第28天时均明显减小(P<0.05);(2)与模型组相比,贝参茱萸方高、中、低浓度组肿瘤细胞的坏死和凋亡更明显;(3)与空白组比较,模型组小鼠体内Ki67的阳性表达明显(P<0.05)。与模型组相比,小鼠体内Ki67的阳性表达率在贝参茱萸方高、中、低浓度组下降,其中贝参茱萸方高浓度组和中浓度组具有统计学意义(P<0.05);(4)与空白组相比,caspase-3、caspase-9在模型组中的表达降低,具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,促凋亡因子caspase-3在贝参茱萸方高、中浓度组的表达均升高(P<0.05),而促凋亡因子caspase-9在贝参茱萸方高浓度组蛋白水平的表达升高(P<0.05)。结论贝参茱萸方能促进肿瘤细胞的坏死和凋亡,抑制肿瘤的生长,其可能是通过促进促凋亡因子caspase-3、caspase-9蛋白水平的表达发挥作用。

加味血府逐瘀汤抗肿瘤作用的实验研究

目的:研究加味血府逐瘀汤对小鼠腹水型H22移植性肿瘤模型的抗肿瘤作用和对VEGF的影响。方法:昆明种雄性小鼠100只,接种H22肝癌细胞,建立小鼠腹水型H22移植性肿瘤模型,随机分为10组,分别给予生理盐水、卡培他滨、加味血府逐瘀汤(高、中、低剂量)灌胃,连续10天,第11天处死,观察抑瘤率、生命延长率的变化;用免疫组化方法检测VEGF在肿瘤中的表达,SPSS13.0软件作统计学分析。结果:卡培他滨、加味血府逐瘀汤(高、中、低剂量)组的抑瘤率分别为60%、49%、41%、35%,生命延长率分别为1.68%、157.98%、70.58%、49.57%。结论:加味血府逐瘀汤能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖,明显延长荷瘤小鼠的生存时间,降低肿瘤组织和瘤周组织中的VEGF表达。

肿瘤细胞接种数对建立小鼠肝癌移植瘤模型的影响

目的：本研究将通过观察不同肿瘤细胞接种数于不同品系小鼠后的生物学状态、肿瘤进展状况及小鼠生存期等指标，分析肿瘤细胞接种数对建立小鼠肝癌移植瘤模型的影响，为今后小鼠肿瘤模型的建立提供参考。方法：将收集种鼠腹水H22细胞按比例稀释，调整细胞浓度约为1．7×10^7／mL、5．1×10^7／mL、2．5×10’／mL、1．0×10^7／mL，接种至KM小鼠、ICR小鼠右腋皮下。观察小鼠生物学状态、肿瘤体积变化及小鼠生存率等指标。结果：各组ICR及KM小鼠基本情况与接种数负相关，出瘤时间与肿瘤细胞接种数成正比，荷瘤小鼠预后及小鼠生存率与接种数负相关。结论：KM小鼠与ICR小鼠在荷瘤小鼠基本情况、肿瘤生长与进展及生存期方面无明显差异。将种鼠腹水按1：10比例稀释，接种浓度为10^7／mL时，瘤体发展较为平稳，生存率较高，更利于监测和评估小鼠给药前后变化情况。

小鼠肝癌原位移植模型的建立及其研究意义

目的:建立小鼠的肝癌原位移植模型,为研究肝癌的侵袭转移机制奠定基础。方法:体外培养小鼠肝癌细胞株H22细胞并进行传代,调整细胞浓度为1×10~7/ml,接种到小鼠腹腔,进行腹腔传代培养,腹腔传代3次后,收集腹水瘤细胞,用生理盐水洗涤2遍,调整细胞浓度为2×10~7/ml,用50μl的微量注射器无菌开腹直视下向小鼠肝脏左叶注入50μl的H22细胞,术后常规饲养,14天后人道主义处死小鼠,解剖观察小鼠肝脏肿瘤形成情况,病理组织学方法鉴定肿瘤组织。结果:肉眼可见肿瘤结节形成良好,成瘤率高,病理鉴定为肝癌。结论:成功建立了小鼠的肝癌原位移植模型,为后续研究肝癌的免疫逃逸和侵袭转移提供了实验基础。

Apoptin对肝癌细胞的体内、外抑制效应

目的:探讨Apoptin对人肝癌细胞株HepG-2及C57BL/6小鼠H22移植瘤的抑制作用。方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin转染HepG-2细胞,应用Western blotting检测Apoptin蛋白在转染后HepG-2细胞中的表达,应用MTT检测Apoptin对HepG-2细胞生长的抑制作用,通过AO/EB染色法检测pVAX1-Apoptin致肿瘤细胞凋亡作用。建立C57BL/6小鼠H22荷瘤模型,瘤内注射pVAX1-Apoptin,观察pVAX1-Apoptin对体内肿瘤的抑制作用。结果:Apoptin基因可在HepG-2细胞中有效表达,pVAX1-Apoptin能够诱导HepG-2细胞凋亡,并显著地抑制其生长,48h抑制率为69.28%。pVAX1-Apoptin瘤内注射能够有效抑制移植肿瘤的生长,抑制率为46.71%;治疗后39d小鼠生存率为40%,显著高于对照组(P<0.05)。结论:Apoptin转染可抑制HepG-2细胞的生长,重组质粒pVAX1-Apoptin瘤内注射对移植肿瘤有显著的抑制作用。

加味血府逐瘀汤对H22移植性肿瘤小鼠抗肿瘤作用的研究

目的探讨加味血府逐瘀汤对腹水型H22移植性肿瘤小鼠的抗肿瘤作用和对血管内皮生长因子（VEGF）的影响。方法昆明种雄性小鼠100只，接种H22肝癌细胞，建立小鼠腹水型H22移植性肿瘤模型，按体重分层随机分为5组各10只，分别给予生理盐水、卡培他滨、加味血府逐瘀汤高、中、低剂量灌胃，连续10d，第11天处死，观察抑瘤率、生命延长率；用免疫组化方法检测VEGF在肿瘤中的表达。结果卡培他滨、加味血府逐瘀汤高、中、低剂量组的抑瘤率分别为60％、49％、41％、35％，生命延长率分别为1．68％、157．98％、70．58％、49．57％。结论加味血府逐瘀汤可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖、延长倚瘤小鼠的生存时间，降低VEGF表达。

利多卡因对丝裂霉素治疗肝癌H22荷瘤小鼠的增敏作用研究

目的 观察利多卡因对丝裂霉素治疗皮下肝癌H22荷瘤小鼠和腹腔H22荷瘤小鼠的增敏作用.方法 按照随机数字表法将小鼠分为皮下荷瘤组和腹腔荷瘤组,每组各15只;两组小鼠再各分为3个亚组:模型组、丝裂霉素组、丝裂霉素+利多卡因组,每个亚组5只.给药前1 d,将小鼠腹腔培养获得的H22细胞密度调整至5×106/ml,皮下荷瘤组小鼠右侧腋下接种H22细胞,腹腔荷瘤组小鼠腹腔接种H22细胞,0.2 ml/只.接种24 h后(即实验第1天)腹腔注射给药,之后第5、9天腹腔注射给药.采用单因素方差分析法及t检验分析皮下荷瘤小鼠实验第11天实体瘤质量、 抑瘤率及腹腔荷瘤小鼠实验60 d内的生存时间和生命延长率.结果皮下荷瘤小鼠中,模型组、丝裂霉素组和丝裂霉素+利多卡因组实体瘤质量分别为(3.77±1.02)g、(1.67±0.28)g、(0.74±0.19)g,三组间差异有统计学意义(F=31.753,P<0.01);与皮下模型组比较,丝裂霉素组及丝裂霉素+利多卡因组皮下实体瘤质量均下降(t=2.10,P<0.01;t=3.04,P<0.01);丝裂霉素+利多卡因组皮下实体瘤质量较丝裂霉素组下降(t=0.93,P=0.034);丝裂霉素组和丝裂霉素+利多卡因组抑瘤率分别达到55.70%、80.37%.腹腔荷瘤小鼠中,模型组、 丝裂霉素组和丝裂霉素+利多卡因组生存时间分别为(16.80±0.84)d、(28.80±6.30)d、(40.40±12.86)d,三组间差异有统计学意义(F=10.155,P=0.003);与腹腔模型组比较,丝裂霉素组及丝裂霉素+利多卡因组小鼠生存时间均延长(t=12.00,P=0.041;t=23.60,P=0.001);丝裂霉素+利多卡因组生存时间较丝裂霉素组延长(t=11.60,P=0.047);丝裂霉素组和丝裂霉素+利多卡因组生命延长率分别为71.43%和140.48%.结论 利多卡因对丝裂霉素治疗肝癌H22荷瘤小鼠有增敏作用.

阳虚荷H22肝癌小鼠的中医辨证辨病治疗实验研究

目的:通过对阳虚荷瘤小鼠不同治疗措施的干预结果观察,研究并探讨辨病、辨证、辨证辨病结合治疗对阳虚荷瘤小鼠的作用及其机理。方法:以氢化可的松和肝癌H22瘤株复制阳虚荷瘤小鼠复合模型,实验分模型对照组、辨证组、辨病组和辨证+辨病组,并设不加处理的空白对照组。各组分别在造模结束后第1至15天对其进行生存状态学观察;实验结束后检测各组动物抑瘤情况、IL-1、TNF-α水平。结果:①生存状态学观察结果显示:辨证组辨证辨病结合组动物的生存状态改善明显好于其他两组。②在抑肿瘤生长方面,辨证辨病结合组与对照组比较P<0.01,差异为极显著性;辨病组与对照组比较0.01<P<0.05,差异为显著性;而辨证组与对照组比较P>0.05,无统计学意义。③IL-1和TNF-α以辨证辨病结合组的上升幅度最大,辨证组居其次,但两者之间无统计学意义(P>0.05)。辨病组的上升幅度最小,且与前两组均有统计学意义(P<0.05)。结论:阳虚荷H22肝癌小鼠的复合动物模型是可以成功建立的。辨证结合辨病治疗是目前较为理想的中医治疗模式。从不同角度探索证型的实质,进一步丰富了证型的内涵,为证型治疗开拓了新思路。