虫草素抑制Ras蛋白表达并诱导非小细胞肺癌H358细胞凋亡研究

目的:研究虫草素在体外对K-Ras突变型非小细胞肺癌H358细胞的抑制作用及其相关机制。方法:用MTT法检测虫草素对H358细胞增殖的影响;以流式细胞术检测虫草素诱导H358细胞凋亡情况和对细胞周期的影响;用活性检测试剂盒检测Caspase3、8、9的活性变化;采用Western Blot方法检测K-Ras蛋白的表达情况。结果:不同浓度的虫草素对于H358细胞增殖均有一定的抑制作用,并以浓度依赖的方式诱导H358细胞凋亡和引起G1期周期阻滞;Caspase3、8、9均被不同程度激活;虫草素能够抑制H358细胞K-Ras的表达。结论:虫草素能够在体外有效诱导H358细胞凋亡并抑制H358细胞增殖,为进一步应用于临床治疗K-Ras突变型非小细胞肺癌等肿瘤疾病奠定了实验基础。

槲寄生碱影响Ras蛋白表达抑制肺癌H358细胞增殖

目的研究槲寄生碱对非小细胞肺癌H358细胞的抑制作用及其相关作用机制。方法采用MTT法检测槲寄生碱对H358细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测槲寄生碱对H358细胞凋亡的影响;采用Western blot方法检测槲寄生碱对K-Ras、Bcl-2和Bax等蛋白表达的影响;测定caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性;检测槲寄生碱在体内的抑瘤活性。结果槲寄生碱以质量浓度依赖的方式抑制H358细胞增殖,并能有效地诱导H358细胞凋亡;caspase 3、caspase 8和caspase 9受到了不同程度的激活;同时,槲寄生碱抑制K-Ras和Bcl-2的表达,而对Bax没有明显抑制作用;槲寄生碱在体内也表现出明显的抑瘤活性。结论槲寄生碱在体外能够抑制H358细胞增殖并诱导H358细胞凋亡,为K-Ras突变型非小细胞肺癌等肿瘤疾病的治疗奠定了实验基础。

人参皂苷Rg3协同TRAIL促进肺癌H358细胞凋亡的机制

目的:探讨人参皂苷Rg3联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肺癌H358细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:肺癌H358细胞培养完成后,0、50、100、200 ng/ml TRAIL或0、25、50、100μmol/L Rg3作用H358细胞48 h,按照实验方法分为对照组、50μmol/L Rg3组、100 ng/ml TRAIL组及50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组。MTT法检测Rg3和/或TRAIL对肺癌H358细胞增殖的影响,DAPI染色荧光倒置显微镜观察Rg3和/或TRAIL对肺癌H358细胞形态学变化的影响,流式细胞术检测Rg3和/或TRAIL对肺癌H358细胞凋亡的影响,WB实验检测Rg3和/或TRAIL对各组肺癌H358细胞内死亡受体(DR5)及caspase-8表达的影响。结果:50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组与其他各组比较,肺癌H358细胞的增殖抑制最明显(P<0.05);DAPI染色后显示,50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组多数胞核皱缩,染色质凝集,荧光强度增加,并出现饱和碎裂等晚期凋亡形态学改变;50μmol/L Rg3+100 ng/ml TRAIL组与其他各组比较,细胞凋亡率升高最明显,细胞内DR5及caspase-8表达增强最明显(均P<0.05)。结论:人参皂苷Rg3联合TRAIL能够协同抑制肺癌H358细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其作用机制可能与人参皂苷Rg3协同促进DR5及caspase-8的表达上调有关。

一种海洋来源ETP类化合物GQQ-ZML-2抑制H358细胞增殖作用与机制的研究

目的探究化合物GQQ-ZML-2对H358细胞(KRAS^(G12C))的增殖抑制作用并初步研究其作用机制。方法采用磺酰罗丹明B法(SRB法)测定GQQ-ZML-2对不同KRAS突变的肿瘤细胞的细胞毒;采用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;利用荧光探针DCFH-DA检测细胞内总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;蛋白质印迹法(western blotting,WB)检测相关信号蛋白的表达水平。结果GQQ-ZML-2选择性抑制H358细胞增殖,以浓度依赖的方式抑制克隆形成并将细胞周期阻滞于G2/M期而诱导细胞凋亡。机制研究表明GQQ-ZML-2引起KRAS^(G12C)依赖的ROS产生,抑制AKT/mTOR和JAK2/STAT3信号通路。结论GQQ-ZML-2是一种新型的具有选择性抑制H358细胞增殖作用的海洋来源化合物,其作用机制可能与诱导KRAS^(G12C)依赖的ROS增加相关。为开发新型的拮抗具有KRAS^(G12C)突变肿瘤的药物提供了实验依据。

氧化石墨烯装载白藜芦醇用于多种肺腺癌细胞的体内外治疗

目的:制备装载白藜芦醇(Resveratrol,RV)的氧化石墨烯(Graphene Oxide,GO)纳米颗粒并用于人肺腺癌细胞的体内外治疗研究。方法:紫外分光光度计检测GO装载RV前后的紫外吸收光谱;原子力显微镜和纳米粒度分析仪检测纳米颗粒的表面形态和粒径大小;细胞活性检测试剂盒CCK-8检测纳米颗粒对A549细胞活性的影响;最后构建小鼠肿瘤模型,并研究纳米药物对肿瘤的治疗效果。结果:制备GO装载的RV颗粒(NGO-RV)为片层纳米结构,平均粒径大小为98 nm。在p H为5.0时,RV的释放量达到最大。NGO-RV对A549、NCI-H358细胞的抑制作用具有浓度和时间依赖性,明显比单独的RV细胞抑制作用大。在体治疗实验发现,NGO-RV具有显著的A549肿瘤抑制作用。结论:本实验成功制备的NGO-RV药物,在体内外的肿瘤治疗中发挥显著效果。

白花蛇舌草乙醇提取物联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用

目的研究白花蛇舌草乙醇提取物(ethanol extract of Hedyotis diffusa,EEHD)联合吉非替尼对TGF-β_1诱导的肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用。方法以上皮表型人肺腺癌细胞H358为研究对象,TGF-β_1诱导构建细胞上皮间质化模型,按EEHD、吉非替尼及两药3种不同顺序联合作用分为6组:A组,EEHD作用48 h;B组,吉非替尼作用48 h;A24B24组,先EEHD作用24 h,后吉非替尼作用24 h;B24A24组,先吉非替尼作用24 h,后EEHD作用24 h;AB48组,同时加入吉非替尼和EEHD作用48 h;对照组。CCK-8法测定各组细胞坏死率,Western-blot检测各组细胞中E-cadherin、Vimentin、EGFR蛋白表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,比较组间差异。结果各组药物作用均能不同程度抑制上皮间质化肺腺癌细胞H358增殖,E-cadherin表达呈上升趋势,Vimentin表达下降。其中EEHD联合吉非替尼组的细胞生长抑制率和细胞凋亡率显著高于吉非替尼单用组,E-cadherin蛋白表达率则显著高于吉非替尼单用组,而EGFR、Vimentin蛋白表达率显著低于吉非替尼单用组(P<0.05),EEHD与吉非替尼先后顺序作用组间差异无统计学意义。结论EEHD与吉非替尼对上皮间质化的H358细胞具有联合抑制作用,白花蛇舌草可部分逆转H358细胞上皮间质化状态。

四种显像剂在NCI—H358肺癌裸鼠模型中显像效果和生物分布的比较

目的比较^18F-脱氧葡萄糖（^18F-FDG）、^99Tc^m-甲氧荩异丁基异腈（^99Tc^m-MIBI）^99Tc^m-氮-二（N-2基N-2氧基二硫代氧基甲酸盐）[^99Tc^m-N（NOET））]和^99Tc^m-RGD-4CK娃像剂任NCI—H358肺癌裸鼠中的摄取，评价4种硅像剂对低代谢肺胆瘤的诊断价值。方法建立人非小细胞肺癌NCIH358细胞裸鼠移植瘤模型20只，随机分为4组，分别经尾静脉注射^18F-FDG、^99Tc^m-MIBI、^99Tc^m-N（NOErr），和^99Tc^m-RGD-4CK移像剂，进行显像和生物分布研究。结果SPECT全身平面显像显示，^18F-FDG组倚瘤小鼠胸部放射性核素明妙浓聚，与肿瘤组织部分重叠，以敛肿瘤轮廓显示不清晰；^99Tc^m-MIBI组荷瘤小鼠右前肢肿瘤处隐约显影，轮廓不清；^99Tc^m-N（NOET）2组和^99Tc^m-RGD-4CK组荷瘤小鼠右前肢肿瘤部位硅影均清晰。^18F-FDG组、^99Tc^m-MIB组。^99Tc^m-N（NOET）：组和^99Tc^m-RGD-4CK组肺癌裸鼠模型显像的肿瘤勺肌肉放射性比值（T／NT）分别为1．85±0．07、0．99±0．16、2．78±2．26和3．40±0．27，生物分布的T／NT值分别为2．32±0．14、0．44±0．08、2．59±0．53和3．43±0．36，其^99Tc^m-RGD-4CK组的rf／NT值明显高于其他组（均P〈0．01）。结论^99Tc^m-RGD-4CK对人非小细胞肺癌NCI—H358细胞移植瘤的湿像效果好于^18F—FDG，在诊断低代谢的非小细胞肺癌时，^99Tc^m-RGD--4CK妊像町能比^18F—FDG显像更具优势。

白花蛇舌草乙醇提取物对TGF-β1诱导的人肺腺癌细胞H358上皮间质化的干预作用

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物(EEHD)对转化生长因子-β1(TGF-β1)体外诱导的人肺腺癌细胞H358间质化过程的干预作用。方法以5 ng·m L-1的转化生长因子-β1作用于H358细胞24 h,成功构建上皮间质转化模型,此后分别加入低、中、高浓度的白花蛇舌草乙醇提取物作用48 h后,通过蛋白质印迹法与定量聚合酶链反应检测各组细胞上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)及间质细胞标志物波蛋白(vimentin)的蛋白和mRNA的表达。结果 5 ng·m L-1的转化生长因子-β1可成功构建H358细胞上皮间质转化模型,在不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物干预后,随浓度升高E-钙黏蛋白表达呈上升趋势,波蛋白表达下降。结论白花蛇舌草乙醇提取物能部分干预甚至逆转转化生长因子-β1诱导的H358细胞上皮间质转化过程。