溴氰菊酯诱导H4神经胶质瘤细胞凋亡机制研究

目的研究溴氰菊酯(deltamethrin,DM)诱导H4神经胶质瘤细胞凋亡的神经毒作用机制。方法将H4神经胶质瘤细胞分为对照组(给予1/1000体积的DMSO)、DM组(给予10-5mol/L的DM)、Ac-DEVD-CHO+DM组(给予2.0μmol/L的Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO和10-5mol/L的DM)。应用FACS420型流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,以四肽化合物Ac-DEVD-pNa为底物检测Caspase-3活力,以免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达。结果对照组凋亡及坏死细胞极少;DM组细胞凋亡率为(14.3±4.51)%,明显升高(P<0.01);Ac-DEVD-CHO+DM组的细胞凋亡率[(8.8±2.13)%]高于对照组而低于DM组(均P<0.05)。与对照组比较,DM组Caspase-3活力为0.304±0.025,蛋白表达为0.151±0.035,均明显增强(均P<0.01);而Ac-DEVD-CHO+DM组未见改变(P>0.05)。结论DM对H4神经胶质瘤细胞具有细胞毒作用,使H4神经胶质瘤细胞Caspase-3活力增加,蛋白表达增加,促进细胞凋亡。

软骨藻酸对H4细胞血红素氧化酶-1的诱导

[目的 ]研究软骨藻酸对H4细胞血红素氧化酶 1(hemeoxygenase 1,HO 1)的诱导。 [方法 ]流式细胞仪检测0、0 .0 64、0 .64、6.4μmol/L软骨藻酸作用细胞 2 4h后HO 1蛋白表达、HO 1mRNA转录和HO 1酶活性。[结果 ]HO 1蛋白表达 :0 .0 64、0 .64、6.4μmol/L浓度组的荧光强度分别为 ( 68.0 7± 7.0 7)、( 81.3 4± 8.64 )和 ( 81.95± 8.3 0 ) ,与对照组 ( 60 .60± 5 .3 6)比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1)。HO 1mRNA转录 :0 .0 64 μmol/L组相对表达量为 ( 0 .43 9± 0 .0 0 7) ,与对照组( 0 .411± 0 .0 0 8)比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;0 .64 μmol/L和 6.4μmol/L组分别为 ( 0 .5 0 6± 0 .0 13 )和 ( 0 .63 1± 0 .0 3 6) ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。HO 1酶活性 :0 .0 64mol/L组为 ( 3 89.3 2± 3 4.75 )pmol/(mg·h) ,与对照组 ( 3 2 6.75±2 7.0 5 )pmol/(mg·h)相比 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;0 .64和 6.4μmol/L组分别为 ( 4 61.75± 2 7.84)和 ( 687.5 0± 3 5 .93 )pmol/(mg·h) ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。前述 3指标结果均有随剂量浓度增加而逐渐升高的趋势。 [结论 ]软骨藻酸能诱导H4细胞HO 1蛋白表达、HO 1mRNA转录和HO

六溴环十二烷(HBCD)对H4细胞和SK-N-AS细胞脱碘酶2和3表达的影响

六溴环十二烷(hexabromocyclododecane,HBCD)与多溴联苯醚(polybrominated diethyl ethers,PBDEs)复合污染体系,对人类健康尤其神经系统所造成的潜在危害及其机制一直是笔者课题组的研究方向。HBCD是广泛使用的溴化阻燃剂,与PBDEs一样,会通过干扰内分泌系统、影响甲状腺激素分泌及损伤神经系统,对生物体产生发育神经毒性。作为系列研究之一,本研究以H4人脑神经胶质瘤细胞和SK-N-AS人神经母细胞瘤细胞为体外生物模型,通过观察HBCD对H4细胞Ⅱ型脱碘酶(Dio2)和SK-N-AS细胞Ⅲ型脱碘酶(Dio3)表达的调控,初步探讨了HBCD对神经系统局部甲状腺激素水平的潜在影响。H4细胞和SK-N-AS细胞分别暴露于0、1、3和9μmol·L^-1HBCD24h后,采用MTT法检测细胞活力,Western Blot和RT-PCR法分别分析Dio2和Dio3蛋白和基因的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测H4细胞脑源性神经细胞营养因子(BDNF)的分泌。结果表明,HBCD以剂量依赖方式降低H4细胞和SK-N-AS细胞生存率,引起H4细胞Dio2蛋白和基因表达下调,而致SK-N-AS细胞Dio3蛋白和基因表达上调。此外,HBCD还降低H4细胞BDNF的分泌。这表明,HBCD很可能通过影响神经和胶质细胞脱碘酶的表达,影响脑局部甲状腺激素水平,从而引起神经系统损伤及发育神经毒性。

苍耳子药物血清对H4细胞毒性作用的实验研究

目的探讨苍耳子药物血清对人脑神经胶质瘤细胞(H4细胞)的毒性作用。方法将日本大耳白兔分别于给药前灌胃生理盐水5ml/kg(给药前对照组)及灌胃苍耳子药物血清3.6g/kg(低浓度组)、7.3g/kg(中浓度组)和15.0g/kg(高浓度组),2h后从心脏抽血2ml/kg,离心取血清冻存。对H4细胞给予给药前对照组血清、不同浓度苍耳子药物血清及5-氟尿嘧啶(阳性对照组)培养48h后,用MTT法根据光密度值(OD)计算其对H4细胞的生长抑制率,用流式细胞仪检测其对H4细胞凋亡的影响。结果对H4细胞分别给予低、中、高浓度苍耳子药物血清和5-氟尿嘧啶,细胞生长抑制率分别为43.21%、49.38%、69.13%和61.72%;其各OD值与给药前对照组OD值相比,差异均有统计学意义(P均<0.01)。流式细胞仪检测发现,在对H4细胞给予低、中、高浓度苍耳子药物血清后,H4细胞的凋亡率随给药浓度的增加而升高,分别为15.1%、22.6%和25.4%。结论苍耳子药物血清对H4细胞分裂增殖具有明显的毒性和抑制作用。