期刊文献+
共找到2,700篇文章
< 1 2 135 >
每页显示 20 50 100
H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
1
作者 屈小天 王雅楠 +4 位作者 许倩茹 李雪洋 张申立 张二芹 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第3期125-132,共8页
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将... 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 ha蛋白 水稻胚乳表达 蛋白质纯化
下载PDF
2022-2023年山东省A(H1N1)pdm09流感病毒HA、NA基因变异特征分析
2
作者 吴巨龙 张淑 +4 位作者 何玉洁 孙林 宋绍霞 孙文魁 刘倜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期471-477,共7页
目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取1... 目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取14株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株,以WHO推荐的当季疫苗株为参考进行全基因组测序,并采用荧光法开展神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition,NI)实验以评估药物敏感性。结果 山东省2022-2023年度分离的A(H1N1)pdm09流感病毒属于6B.1A分支中的5a.2a进化簇,核苷酸序列比对分析显示,HA和NA基因与2021-2023年度北半球疫苗株A/Victoria/2570/2019的亲缘关系较为接近,同源性分别为98.5%~98.7%和98.8%~99.1%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白有20个位点发生了氨基酸序列变异,并发现1株病毒可能发生抗原漂移,有3株病毒发生了HA蛋白糖基化位点的缺失。NA酶相关重要位点未发生变异。NI实验显示,所测流感毒株均对抗流感病毒药物敏感。结论 所监测毒株与疫苗株整体同源性很高,但氨基酸存在一定程度变异,今后有必要持续开展流感病毒基因变异特征监测以了解流感流行的风险,以及评价基因变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。 展开更多
关键词 甲型h1n1pdm09流感 ha基因 nA基因 基因变异
下载PDF
2024年美国奶牛H5N1亚型高致病性禽流感疫情分析
3
作者 蒋文明 刘朔 +1 位作者 彭程 刘华雷 《中国动物检疫》 CAS 2024年第6期1-7,共7页
2024年3月以来,美国报告了多例奶牛H5N1亚型高致病性禽流感病例,引发全球广泛关注。本文对本次疫情进行了系统梳理,分析了疫情流行情况和分布规律,提出了风险防范建议。现有数据表明,引发奶牛感染的H5N1亚型高致病性禽流感病毒属于2.3.4... 2024年3月以来,美国报告了多例奶牛H5N1亚型高致病性禽流感病例,引发全球广泛关注。本文对本次疫情进行了系统梳理,分析了疫情流行情况和分布规律,提出了风险防范建议。现有数据表明,引发奶牛感染的H5N1亚型高致病性禽流感病毒属于2.3.4.4b分支,与美国同期在家禽和野禽中流行的毒株高度同源。初步分析表明,感染奶牛的病毒可能来源于野生候鸟。疫情发生后,美国采取了限制移动、调运检测等综合防控措施。本次疫情可能对美国奶牛产业造成一定程度的负面影响,但从目前来看对我国影响较小。建议持续进行国外疫情监视,国内加强野禽风险监测,强化家禽强制免疫,积极宣传引导,做好应急储备等,降低本次疫情对我国的影响。 展开更多
关键词 h5n1 高致病性禽流感 奶牛
下载PDF
Highly pathogenic avian influenza A(H5N1)virus outbreak in Peru in 2022-2023
4
作者 Nieves Sevilla Wendy Lizarraga +7 位作者 Victor Jimenez-Vasquez Veronica Hurtado Iris S.Molina Lilian Huarca Priscila Lope-Pari Ivan Vargas Gloria Arotinco Carlos Padilla-Rojas 《Infectious Medicine》 2024年第2期113-118,共6页
Background:An epizootic of highly pathogenic avian influenza A(H5N1)has spread worldwide since 2022.Even though this virus has been extensively studied for many decades,little is known about its evolution in South Ame... Background:An epizootic of highly pathogenic avian influenza A(H5N1)has spread worldwide since 2022.Even though this virus has been extensively studied for many decades,little is known about its evolution in South America.Methods:Here,we describe the sequencing and characterization of 13 H5N1 genomes collected from wild birds,poultry,and wild mammals in Peru during the genomic surveillance of this outbreak.Results:The samples belonged to the highly pathogenic avian influenza(H5N1)2.3.4.4b clade.Chilean and Peruvian samples clustered in the same group and therefore share a common ancestor.An analysis of the hemag-glutinin and neuraminidase genes detected new mutations,some dependent upon the host type.Conclusions:The genomic surveillance of highly pathogenic avian influenza is necessary to promote the One Health policy and to overcome the new problems entailed by climate change,which may alter the habitats of resident and migratory birds. 展开更多
关键词 Avian influenza A h5n1 hPAI Clade 2.3.4.4b Sequencing 2022-2023 outbreak
原文传递
基于HCR放大的无标记型荧光传感器的构建及H5N1 DNA检测
5
作者 龚亮 单秀芝 +2 位作者 朱琳 徐琳 汤力 《包装学报》 2024年第3期52-60,共9页
对于高致病性H5N1禽流感病毒,构建检测该病毒的高灵敏生物传感器,并与智能包装相结合用于实时监测,这对禽流感的防控具有重要意义。基于杂交链式反应(HCR)信号放大策略,以AgNCs作为荧光信号基团,构建了一种无标记“turn on”型荧光生物... 对于高致病性H5N1禽流感病毒,构建检测该病毒的高灵敏生物传感器,并与智能包装相结合用于实时监测,这对禽流感的防控具有重要意义。基于杂交链式反应(HCR)信号放大策略,以AgNCs作为荧光信号基团,构建了一种无标记“turn on”型荧光生物传感器用于检测代表H5N1病毒的H5N1基因序列。该传感器以H5N1 DNA作为触发剂引发HCR过程,使AgNCs产生强的荧光信号变化。研究表明,当H5N1 DNA浓度在0.2~800.0 nmol/L内,该传感器具有良好的响应信号,且在0.2~200.0 nmol/L之间的荧光强度与H5N1 DNA浓度呈线性相关,线性方程为y=10.982C+567.435(R^(2)=0.99273),检测限为176 pmol/L。核酸传感体系具有通用性,通过简单调整目标序列,可实现对不同目标物的特异性灵敏检测。该研究有望为高灵敏分析禽流感病毒标志物的通用传感平台设计提供思路。 展开更多
关键词 杂交链式反应 银纳米簇 荧光生物传感器 禽流感病毒标志物h5n1 DnA
下载PDF
Stop H5N1 influenza in US cattle now
6
作者 Nicola Lewis 《四川生理科学杂志》 2024年第7期1639-1639,共1页
The relentless march of a highly pathogenic avian influenza virus(HPAIV)strain,known as H5N1,to become an unprecedented panzootic continues unchecked.The leap of H5N1 clade 2.3.4.4b from Eurasia and Africa to North Am... The relentless march of a highly pathogenic avian influenza virus(HPAIV)strain,known as H5N1,to become an unprecedented panzootic continues unchecked.The leap of H5N1 clade 2.3.4.4b from Eurasia and Africa to North America in 2021 and its further spread to South America and the Antarctic have exposed new avian and mammalian populations to the virus and led to outbreaks on an unrivaled scale.The virus has infected wild birds across vast geographic regions and caused wildlife deaths in some of the world's most biodiverse ecosystems. 展开更多
关键词 h5n1 checked InFLUEnZA
下载PDF
Dairy cows inoculated with highly pathogenic avian influenza virus H5N1
7
作者 Amy L Baker 《四川生理科学杂志》 2024年第10期2275-2275,共1页
Highly pathogenic avian influenza(HPAI)H5N1 hemagglutinin clade 2.3.4.4b was detected in the United States in 2021.These HPAI viruses caused mortality events in poultry,wild birds,and wild mammals.On March 25,2024,HPA... Highly pathogenic avian influenza(HPAI)H5N1 hemagglutinin clade 2.3.4.4b was detected in the United States in 2021.These HPAI viruses caused mortality events in poultry,wild birds,and wild mammals.On March 25,2024,HPAI H5N1 clade 2.3.4.4b was confirmed in a dairy cow in Texas in response to a multi-state investigation into milk production losses.1 Over 200 positive herds were identified in 14 U.S.states.The case description included reduced feed intake and rumen motility in lactating cows,decreased milk production,and thick yellow milk.2,3 The diagnostic investigation revealed viral RNA in milk and mammary tissue with alveolar epithelial degeneration and necrosis and positive immunoreactivity of glandular epithelium.A single transmission event,likely from birds,was followed by limited local transmission and onward horizontal transmission of H5N1 clade 2.3.4.4b genotype B3.13.4 We sought to experimentally reproduce infection with genotype B3.13 in Holstein yearling heifers and lactating cows.Heifers were inoculated by aerosol respiratory route and cows by intramammary route.Clinical disease was mild in heifers,but infection was confirmed by virus detection,lesions,and seroconversion.Clinical disease in lactating cows included decreased rumen motility,changes to milk appearance,and production losses.Infection was confirmed by high levels of viral RNA detected in milk,virus isolation,lesions in mammary tissue,and seroconversion.This study provides the foundation to investigate additional routes of infection,pathogenesis,transmission,and intervention strategies. 展开更多
关键词 h5n1 COWS FIR
下载PDF
长春市2016—2020监测年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征分析 被引量:4
8
作者 崔薇 初秋 +5 位作者 李晨光 龚云伟 赵春艳 孙宇 隋天卓 孙炳欣 《中国实验诊断学》 2023年第6期690-695,共6页
目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和... 目的分析长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因特征,了解其变异情况及遗传进化特征。方法选取2016—2020年度甲型H1N1流感病毒分离株109株,PCR扩增HA基因并进行序列测定;利用生物信息学软件对分离株的HA基因进行进化和变异分析。结果长春市109株分离株与疫苗株A/California/07/2009的HA蛋白相比均有S84N、S162N和I216T共同的氨基酸位点变异,且有1株发生了HA蛋白D222N位点突变,提示此毒株可引起患者下呼吸道症状。109株病毒株的HA基因之间核苷酸同源性为96.9%~100%,氨基酸同源性为97.2%~100%。在进化树分析上,都属于6B.1大分支,并且随着时间的推移,HA在基因进化树上离早期疫苗株A/California/7/2009越来越远,同一年份里也有毒株位于不同的小分支内。结论长春市2016—2020年度甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因在不断的变异中,应持续进行监测,为预防甲型H1N1流感大流行提供参考。 展开更多
关键词 甲型h1n1流感病毒 血凝素(ha) 基因特征
下载PDF
青海湖一株野鸟源H5N1亚型禽流感病毒核酸检测及其基因组序列特性分析
9
作者 田野 崔明仙 +7 位作者 颜焰 简莹娜 王光华 王戈平 李秀萍 胡勇 廖敏 马利青 《青海畜牧兽医杂志》 2023年第4期39-46,共8页
2022年8月,青海省刚察县野鸭出现异常死亡。采集死亡野鸭的组织提取核酸,经禽流感病毒(AIV)M基因引物初步鉴定定样品中含有AIV,随后H5/H7/H9分型引物鉴定。进一步二代测序后获得了AIV的8片段基因序列。序列比对分析表明,除了NS基因,其... 2022年8月,青海省刚察县野鸭出现异常死亡。采集死亡野鸭的组织提取核酸,经禽流感病毒(AIV)M基因引物初步鉴定定样品中含有AIV,随后H5/H7/H9分型引物鉴定。进一步二代测序后获得了AIV的8片段基因序列。序列比对分析表明,除了NS基因,其余基因与以往报道或H5亚型AIV标准毒株的内部基因同源性较高,HA基因裂解位点具有高致病性(HPAI)AIV的特征,故将感染野鸭的毒株命名为A/Wigeon/Qinghai/2022(H5N1)。从HA基因的遗传进化分析中发现,A/Wigeon/Qinghai/2022(H5N1)与最近几年在野鸟中流行的H5N1和H5N8同在2.3.4.4b分支,而与2005—2015年在青海湖地区流行的毒株遗传距离较远,表明青海湖野鸟源H5亚型AIV遗传多样性丰富,需要持续对该地区野鸟中携带的AIV进行监测。 展开更多
关键词 青海湖 野鸟 h5n1 特性
下载PDF
HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响 被引量:7
10
作者 唐应华 吴培培 +7 位作者 孙庆 彭大新 张文俊 李彦芳 汪文斌 龙进学 张评浒 刘秀梵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期340-344,共5页
A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),32... A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),329位是Lys(K329)。根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力。可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升。结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力。 展开更多
关键词 h5n1 ha基因 麻鸭 反向遗传 致病力
下载PDF
H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因的表达及纯化 被引量:9
11
作者 李清州 郝惠芳 +5 位作者 王丽 赵绪永 朱礼倩 张丽萍 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第8期127-130,共4页
利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60... 利用PCR方法从含禽流感病毒HA基因的质粒T-HA上扩增HA基因,再将其克隆到原核表达载体pET28a中,用E.coliBL21(DE3)原核表达,SDS-PAGE和Western-blot对表达蛋白进行鉴定。Western-blot结果表明,表达产物具有免疫学活性,蛋白的分子量约为60kD,位于包涵体中。包涵体经变性、复性处理,表达蛋白能与H5亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。ELISA检测结果表明,用此纯化蛋白作为包被抗原检测H5N1亚型AIV血凝素抗体具有良好的灵敏性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 h5n1亚型 血凝素(ha) 原核表达
下载PDF
表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因重组腺病毒的构建及其免疫原性 被引量:5
12
作者 吴运谱 乔传玲 +4 位作者 杨焕良 陈艳 展小过 辛晓光 陈化兰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1363-1369,共7页
RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基... RT-PCR扩增猪流感病毒A/Swine/Fujian/1/2001(H5N1)株的HA基因,构建重组腺病毒穿梭质粒pDC315-H5 HA-EGFP。采用Ad-Max同源重组系统和共转染技术,构建了表达H5N1亚型猪流感病毒HA基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-H5 HA-EGFP)。经目的基因PCR检测及序列测定,结果表明:HA基因已经正确地插入到腺病毒的基因组中;通过RT-PCR检测与Western blot分析,结果表明:HA基因能够进行正确转录,并且所表达的蛋白具有相应的生物学活性。子代重组腺病毒rAd-H5 HA-EGFP经增殖、纯化后感染性滴度可达2.26×1010TCID50mL-1。rAd-H5 HA-EGFP免疫BALB/c小鼠能够诱导特异性的HI抗体产生,有效阻止病毒在体内的复制。 展开更多
关键词 猪流感病毒 h5n1亚型 ha基因 重组腺病毒
下载PDF
1981~2005年中国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征 被引量:13
13
作者 张家淮 徐红 +4 位作者 张烨 赵翔 郭俊峰 蓝雨 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期350-355,共6页
为了解1981~2005年我国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征,选取H1N1甲型流感病毒370株,提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应扩增HA1并测序,测定的序列用生物信息软件分析,与GenBank中相关序列比较,并对推导的编码氨基酸... 为了解1981~2005年我国H1N1甲型流感病毒血凝素基因的HA1演变特征,选取H1N1甲型流感病毒370株,提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应扩增HA1并测序,测定的序列用生物信息软件分析,与GenBank中相关序列比较,并对推导的编码氨基酸序列进行基因特性分析。结果表明:HA1氨基酸的变异表现为抗原决定簇4个区均有变异,Sb区和Ca区变化较大;HA1受体结合位点(RBS)的前壁130环的第134位赖氨酸从1991年起在部分毒株HA1序列上开始缺失,以后缺失株逐步增多,自2000年起测定的所有毒株上该氨基酸全部缺失,同时这些缺失株的第137位氨基酸也全部由苏氨酸替换为丝氨酸;糖基化位点从增多到减少,最后稳定在7个;1981~2004年我国H1N1甲型流感病毒血凝素HA1编码的氨基酸在种系发育树上同年代基本呈现集中分布,与时间和地域无关,2005年毒株分成两个分支在时间上有明显差异。 展开更多
关键词 h1n1甲型流感病毒 ha1 种系发生树
下载PDF
H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株的全基因克隆及序列分析 被引量:13
14
作者 龙进学 王曲直 +2 位作者 卢建红 刘玉良 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期690-696,共7页
应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷... 应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷酸全序列与18株网上公布的禽流感基因序列进行比较和分析,结果与4株鸭源H5N1的5~7个基因具99%以上的同源性;与14株H5N1有至少一个以上内部基因同源性在95%以上.与H9亚型AIV代表株A/Quail/Hongkong/G1/97(简称G1株)和A/Chicken/Beijing/1/94(简称BJ94)比较,除了非结构基因(Nonstructural gene,NS)与G1株的同源性为95.3%外,其余基因均在36.6%~92.1%之间.说明A/D/SD/04没有H9N2基因的直接整合,是H5N1毒株在自然界的重组株.推导的HA氨基酸序列分析,A/D/SD/04 的血凝素(Heamgglutinin,HA)裂解位点与比较的16株AIV的序列一致,是高致病性禽流感的分子特征(PQRERRRKKR/G),第226位氨基酸是对禽类和哺乳细胞均具有亲嗜性的蛋氨酸(Met).神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)在第48位氨基酸(颈部)后有20个氨基酸的缺失,但非结构蛋白(NS)没有在79~84氨基酸发生缺失.碱性聚合酶2(PB2)的627位氨基酸是亲禽类细胞的谷氨酸(Glu,E).结合生物学特性和分子特征,A/D/SD/04对小鼠的致病力是由多种因素决定,其可能是一株对鸡高度致病,并逐渐获得对哺乳动物致病能力的中间重组病毒. 展开更多
关键词 h5n1亚型禽流感病毒 通用引物 全基因组序列 序列分析
下载PDF
密码子优化的人H5N1流感病毒HA基因在哺乳动物细胞中获得高效表达 被引量:2
15
作者 李魁彪 张晓光 +6 位作者 马晶 贾晓俊 王敏 董婕 张晓梅 徐红 舒跃龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期101-105,共5页
为了提高人禽流感病毒血凝素HA的表达量,应对流感大流行疫苗的需求,按照人的偏爱密码子将H5N1(A/Anhui/1/2005)流感病毒的HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入到真核表达载体pDC315中,构建了真核表达质粒pDC315-Mod·HA;将此质... 为了提高人禽流感病毒血凝素HA的表达量,应对流感大流行疫苗的需求,按照人的偏爱密码子将H5N1(A/Anhui/1/2005)流感病毒的HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入到真核表达载体pDC315中,构建了真核表达质粒pDC315-Mod·HA;将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pDC315-Wt·HA分别转染293T细胞,比较HA蛋白的表达量。结果表明:经间接免疫荧光实验及Western blot实验比较和鉴定,密码子优化后,HA蛋白在293T细胞中的表达水平显著提高,为流感大流行疫苗的研究打下了基础。 展开更多
关键词 h5n1 ha 密码子优化 真核表达
下载PDF
表达H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白的重组鼠白血病病毒的特性 被引量:9
16
作者 刘华雷 Rong Li-Jun +3 位作者 周斌 魏建超 郑其升 陈溥言 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期47-51,共5页
通过反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒 (AIV)完整的血凝素 (HA)基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果已经登陆GenBank ,登陆号为AY6 394 0 5。序列分析表明所扩增的HA基因开放性阅读框架 (ORF)由170 7个... 通过反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)扩增了H5N1亚型鹅源禽流感病毒 (AIV)完整的血凝素 (HA)基因并进行了克隆与鉴定。序列测定结果已经登陆GenBank ,登陆号为AY6 394 0 5。序列分析表明所扩增的HA基因开放性阅读框架 (ORF)由170 7个核苷酸组成 ,共编码 5 6 8个氨基酸 ,裂解位点的氨基酸组成为RKKR↓GLF ,含连续的碱性氨基酸 ,具有高致病性AIVHA基因裂解位点的特征。构建了含HA基因的真核表达载体pcDNA HA ,通过与鼠白血病病毒 (MuLV)假病毒构建体系的两种质粒pHIT6 0和pHIT111共转染人胚肾细胞 2 93T ,4 8h后收集假病毒上清 ,超离后通过Western blot证明HA蛋白能够在假病毒颗粒表面表达 ,表明HA能够整合到此病毒粒子表面。通过感染 2 93T、COS 7和NIH3T3三种不同的靶细胞 ,证实所构建的假病毒粒子具有感染性和泛嗜性。本研究成功构建了具有感染性的MuLV HA假病毒体系 ,为研究鹅源禽流感病毒侵入细胞的机理及其组织嗜性的变异提供一种新方法。 展开更多
关键词 鼠白血病病毒 禽流感病毒 h5n1亚型 血凝素基因 假病毒
下载PDF
人高致病性禽流感病毒H5N1安徽株HA、M2蛋白双顺反子表达载体的构建及表达研究 被引量:5
17
作者 刘源 张柯 +4 位作者 谭文杰 王慧娟 舒跃龙 胡桂学 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期415-420,共6页
将我国分离的人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和M2基因片段并克隆至DNA疫苗表达载体pVRC中,构建成真核表达质粒。为提高HA的表达量,按照人偏爱密码子将HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入真核表达载体pVRC... 将我国分离的人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和M2基因片段并克隆至DNA疫苗表达载体pVRC中,构建成真核表达质粒。为提高HA的表达量,按照人偏爱密码子将HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入真核表达载体pVRC,以β-actin蛋白为内参比证明了优化后的HA蛋白表达效果明显提高。将M2基因和优化后的HA基因共同克隆入双顺反子表达载体pIRES中,获得同时表达HA或M2的双顺反子真核表达质粒;通过Western blot和间接免疫荧光检测方法,确认构建的重组质粒在真核细胞中成功地表达了目的蛋白HA和M2。通过上述结果为进一步开展人高致病性禽流感病毒安徽株HA和M2基因的功能与致病性研究及使用表达HA和M2蛋白进行新型人用禽流感双价疫苗研发奠定基础。 展开更多
关键词 h5n1 ha M2 密码子优化pIRES
下载PDF
H5N1型禽流感病毒HA基因在烟草中的表达 被引量:6
18
作者 郭小玲 崔红 +2 位作者 王宇 张国广 陈亮 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期126-128,共3页
禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒,发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一.本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草.共获得38株潮霉素抗性植株,经PCR和Southern-b lot-ting检测,目的基因已整合... 禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒,发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一.本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草.共获得38株潮霉素抗性植株,经PCR和Southern-b lot-ting检测,目的基因已整合到转基因植株的基因组中.W estern-dotting检测结果表明,目的基因在转基因烟草中得到表达,具有免疫原性,获得了能够表达HA基因的植物口服疫苗候选植株. 展开更多
关键词 禽流感病毒 h5n1 烟草 转基因
下载PDF
H5N1亚型禽流感病毒HA基因在昆虫细胞中的表达及其生物活性鉴定 被引量:6
19
作者 张晓霁 刘明 +2 位作者 刘春国 杨涛 张云 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期42-46,共5页
经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受... 经RT-PCR扩增了H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)片段,限制性内切酶酶切后将其克隆到pFastBacHTA杆状病毒转座载体,经酶切鉴定及测序,筛选出阳性重组转座载体pFastBac-H5。将pFastBacH5转化含有杆状病毒穿梭载体(bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-H5。rBacmid-H5在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot、血凝试验和血凝抑制试验分析表明:分子量约63kDa重组血凝素蛋白(rH5)在sf9昆虫细胞中实现了高效表达。rH5具有血凝活性,而且其血凝活性能够被H5N1禽流感病毒高免血清所抑制;rH5免疫鸡诱导产生针对H5N1禽流感病毒亚型特异的血凝抑制抗体,说明表达的重组蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 杆状病毒 表达
下载PDF
2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA及NS基因进化分析 被引量:4
20
作者 张如胜 孙边成 +6 位作者 姚栋 叶文 陈静芳 黄政 刘晓蕾 欧新华 陈发明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期85-88,80,共5页
目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环... 目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对。结果从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33%),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.1b亚分支。HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295Saa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征。结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测。 展开更多
关键词 活禽市场 环境 禽流感病毒 h5n1亚型 基因 进化
下载PDF
上一页 1 2 135 下一页 到第
使用帮助 返回顶部