从大数据到大知识:HACE+BigKE

本报告主要包括：1）大数据研究背景与动机;2）5V,5R,4P与HACE定理;3）大数据知识工程;4）大知识的挑战与前景展望4个方面的内容。1大数据的研究背景与动机20世纪90年代,＂数据仓库之父＂Bill Inmon开始关注大数据（海量数据）。简而言之,大数据是无法在合理的时间内利用现有的数据处理手段进行诸如存储、管理、抓取等分析和处理的数据集合。

HACE1和LIN28B基因单核苷酸多态性与中国汉族儿童神经母细胞瘤易感性的关联研究

目的 探讨HACE1和LIN28B基因多态与中国汉族儿童神经母细胞瘤的相关性。方法 采用病例对照研究,收集246例中国汉族神经母细胞瘤患儿和328例中国汉族健康儿童标本,提取外周血DNA,通过PCR扩增目的基因片段,随后应用Sequenommassarray对目的片段进行测序分型。并采用卡方检验、校验后Logistic回归分析等统计学方法,比较各SNP位点与NB肿瘤发生发展相关性。结果 HACE1基因rs45521835位点携带AA基因型的患儿以及rs6927608位点携带CC基因型的患儿其NB肿瘤始发于肾上腺较多,OR值分别为5.20（95%CI：1.06~25.56,P：0.047）和5.00（95%CI：1.02~24.55,P=0.052）。LIN28B基因SNP位点rs7759938（CC基因型）、rs314280（TTT基因型）、rs314276（AA基因型）和rs314263（CC基因型）主要与GNB密切相关,OR值分别2.94（95%CI：1.06~8.20,P=0.047）、2.94（95%CI：1.06~8.20,P=0.047）、2.95（95%CI：1.06~8.24,P=0.047）和3.02（95%CI：1.08~8.41,P=0.042）。结论 在中国汉族儿童中,HACE1基因（rs45521835,rs6927608）和LIN28B基因（rs7759938,rs314280,rs314276,rs314263）SNPs与原发于肾上腺的神经母细胞瘤或者节细胞性神经母细胞瘤（GNB）密切相关。

HACE1的生物学特性及其在恶性肿瘤的研究进展

HACE1不仅是一种重要的肿瘤抑制基因,通过介导细胞自噬、Rac1的泛素化等多种作用机制发挥重要的肿瘤抑制作用,而且还涉及到众多的生物学功能,在心脏保护、抗氧化应激和细胞学动力学等方面发挥着关键作用。HACE1基因表达下调或突变在人类多种恶性肿瘤的发生、侵袭转移等过程中扮演重要角色,且与预后密切相关。因此,HACE1可能成为肿瘤治疗的一个新靶标,为恶性肿瘤的治疗提供新的方向和机遇。

中药对中晚期肝癌患者HACE后外周血WBC及AFP的影响

我们自1996年5月～1999年4月对60例中晚期肝癌患者进行了肝功能化疗栓塞术(HACE)治疗,其中30例患者在HACE治疗的同时应用中药,以观察中药联合HACE对其外周血WBC及AFP的影响。现报道如下。

转染HACE1基因过表达或敲降病毒质粒对急性氧化应激损伤心肌细胞活性、凋亡及HO-1表达的影响

目的观察转染HACE1基因过表达或敲降病毒质粒对急性氧化应激损伤心肌细胞H9C2细胞活性、凋亡及急性氧化应激过程中血红素加氧酶(HO-1)表达的影响。方法取H9C2细胞分成对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组,HACE1过表达组、HACE1敲降组H9C2细胞分别转染HACE1基因过表达病毒质粒HACE1-OE、HACE1基因敲降慢病毒质粒HACE1 shRNA。三组细胞继续培养72 h后,应用缺氧小室将细胞缺氧培养4 h后复氧2 h模拟心肌细胞急性氧化应激损伤过程,构建急性氧化应激损伤心肌细胞模型。采用CCK-8法测算各组细胞活性,采用Hoechest33342染色法测算各组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测各组细胞中氧化应激指标HO-1蛋白。结果对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组细胞活性分别为67.0%±4.4%、75.2%±4.2%、56.7%±3.0%,组间相比,P均<0.05。对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组细胞凋亡率分别为18.90%±1.02%、13.30%±0.86%、28.70%±0.67%,组间相比,P均<0.05。对照组、HACE1过表达组、HACE1敲降组细胞中HO-1蛋白相对表达量分别为1.00±0.17、0.71±0.19、1.96±0.28,组间相比,P均<0.05。结论转染HACE1基因过表达病毒质粒可提高急性氧化应激损伤心肌细胞H9C2的细胞活性,抑制其凋亡及氧化应激指标HO-1蛋白的表达;转染HACE1基因敲降病毒质粒可降低急性氧化应激损伤心肌细胞H9C2的细胞活性,促进其凋亡及氧化应激指标HO-1蛋白的表达。

稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析

该研究旨在利用hACE2真核表达载体,通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的稳定表达hACE2的293T细胞株。将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞,经潮霉素B筛选后,利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2的表达,S-RBD蛋白和SARS-CoV-2假病毒分析细胞功能活性。利用250 μg/mL潮霉素B筛选获得了稳定高表达hACE2的细胞系293T-hACE2-D4。在该细胞中,RT-PCR检测到了大量hACE2基因的mRNA,Western blot、间接免疫荧光和流式分析法检测细胞表面hACE2蛋白表达情况(阳性细胞率为86.86%)。功能分析中,293T-hACE2-27-D4细胞不仅能够与SARS-Cov-2 S-RBD蛋白相结合(结合率达84.26%),并且能够成功感染新型冠状病毒假病毒。该研究构建的稳定表达hACE2的293T细胞不仅能与S-RBD蛋白结合,还对新冠假病毒具有易感性,是探究病毒感染机制的有利工具。

HACE1-mediated NRF2 activation causes enhanced malignant phenotypes and decreased radiosensitivity of glioma cells

HACE1,an E3 ubiquitin-protein ligase,is frequently inactivated and has been evidenced as a putative tumor suppressor in different types of cancer.However,its role in glioma remains elusive.Here,we observed increased expression of HACE1 in gliomas related to control subjects,and found a strong correlation of high HACE1 expression with poor prognosis in patients with WHO grade III and IV as well as low-grade glioma(LGG)patients receiving radiotherapy.HACE1 knockdown obviously suppressed malignant behaviors of glioma cells,while ectopic expression of HACE1 enhanced cell growth in vitro and in vivo.Further studies revealed that HACE1 enhanced protein stability of nuclear factor erythroid 2-related factor 2(NRF2)by competitively binding to NRF2 with another E3 ligase KEAP1.Besides,HACE1 also promoted internal ribosome entry site(IRES)-mediated mRNA translation of NRF2.These effects did not depend on its E3 ligase activity.Finally,we demonstrated that HACE1 dramatically reduced cellular ROS levels by activating NRF2,thereby decreasing the response of glioma cells to radiation.Altogether,our data demonstrate that HACE1 causes enhanced malignant phenotypes and decreased radiosensitivity of glioma cells by activating NRF2,and indicate that it may act as the role of prognostic factor and potential therapeutic target in glioma.

稳定表达人ACE2的Huh-7细胞系的建立及应用

为了构建稳定表达人血管紧张素转换酶2(human angiotensin converting enzyme 2,hACE2)的Huh-7细胞系,本研究构建了不带荧光的pWPXL-neo-hACE2慢病毒载体,并利用psPAX2和pMD2.G-VSVG共同转染HEK293T细胞获得慢病毒;将包装好的慢病毒感染Huh-7细胞后,利用潮霉素B筛选获得可表达hACE2的Huh-7细胞;通过间接免疫荧光法和蛋白质印迹法检测Huh-7细胞中hACE2蛋白的表达;采用流式细胞术分析Huh-7-hACE2细胞与严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)刺突(spike,S)蛋白受体结合结构域(receptor-binding domain,RBD)的结合情况,并用SARS-CoV-2假病毒进一步测定Huh-7-hACE2细胞对SARS-CoV-2的易感性,最后利用鉴定过的Huh-7-hACE2细胞测定SARS-CoV-2中和抗体REGN10987对假病毒的中和效价。结果显示,hACE2蛋白在Huh-7细胞中成功表达,且表达的hACE2蛋白能与SARS-CoV-2 S蛋白RBD结合;相较于Huh-7细胞,Huh-7-hACE2细胞对假病毒的易感性显著提高,且假病毒中和效价测定结果与文献报道的真病毒中和效价相似。总之,本研究成功构建了稳定表达hACE2的Huh-7细胞系,并且其能应用于新型冠状病毒感染(corona virus disease 2019,COVID-19)治疗性单抗的活性评价,是研究SARS-CoV-2的致病机制、开发抗病毒药物及疫苗的有利工具。

肝动脉化疗栓塞后肝脓肿形成的原因及治疗

目的 探讨肝动脉化疗栓塞 (HACE)后正常肝实质并发脓肿的原因及治疗。方法 6例肝癌患者经HACE术后 ,正常肝实质内形成脓肿。明确诊断后 ,在B超引导下行经皮穿刺脓肿引流和对脓腔进行抗菌素灌洗。结果 4例患者脓肿愈合 ,2例患者脓腔明显缩小。结论 分析肝内脓肿形成的主要原因为 :(1)胆道损伤 ;(2 )门静脉内癌栓形成 ;(3)胆囊动脉及胆道周围动脉丛的栓塞。

急性高原病合并多脏器功能障碍综合征(附9例报告)

目的 :评估急性高原病 (AHD)合并多脏器功能障碍综合征 (MODS)的诊断标准和依据。方法 :参照平原MODS诊断标准对高原现场救护和转院的AHD病例进行回顾性调查 ,锁定原发病因为高原脑水肿 (HACE)、高原肺水肿 (HAPE)为调查对象 ,重点收集与心、肺、脑、肾、肝、血液、肠、代谢八个脏器相关的功能指标 ,按庐山 (1995) ,Marshall(1995) ,兰州 (1999)有关MODS/ARDS评分诊断对各脏器损害程度进行综合评分。结果 :9例均在急进高原 450 0～ 470 0m后急性发病 ,发病至诊治时间平均≥ 2 0 .6h。全组均在发生AHD后进行现场救护 ,其中 6例无效转入上一级医院 5～ 9d死于MODS。 9例中原发病因为HACE 5例 ,HAPE4例。可明确脏器损害者共有 44个脏器 ,平均每例 4.9个脏器受损 ;其中达到脏器衰竭标准共有 3 4个脏器 ,平均为3 .8个脏器衰竭。 9例中 5例进行APACHE -Ⅱ评分 ,分值最低为 15分 ,最高 2 7分 ,平均 2 1.7分。结论 :①HACE或HAPE不是单一脏器受损 ,而是多脏器受损 ,MODS是导致死亡的最危险因素 ;②及时有效地现场救治可能是阻断病情发展。

模拟高原低氧环境下大鼠HPA轴的应激性变化及脑组织水肿病理学观察

目的探讨不同海拔梯度低氧环境下下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴、血管内皮生长因子（VEGF）分泌规律及与高原脑水肿的相关性。方法将96只大鼠随机分为四组，即海拔1500m、3500m、5000m及6000m组，各组进一步分为缺氧12、24及48h，每组8只，共12组。1500m组置于我院动物实验科（1500m，兰州海拔）饲养，各缺氧组大鼠分别置于模拟不同海拔低压氧舱内，分别放置12、24及48h后取出，经心脏采集血液后处死；分离脑组织，用干湿质量法测定大鼠脑含水量；HE染色观察大鼠脑组织改变；ELISA法测定血清促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、糖皮质激素（GC）及VEGF含量；RT—PCR法测定缺氧诱导因子-1（HIF-1）mRNA、VEGF mRNA。结果与平原对照组比较，大鼠体质量减轻；高原缺氧模型组大鼠脑组织出现不同程度水肿，大鼠脑含水量增加，HPA轴分泌的CRH、ACTH、GC激素及VEGF含量随海拔高度上升而升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；HIF—1 mRNA、VEGF mRNA随海拔高度升高呈上升趋势（P〈0.05）。结论随着海拔梯度的升高，HPA轴功能应激性调节增强，VEGF含量亦升高，并与脑组织水肿密切相关，提示HPA轴的应激调节机制在高原脑水肿的发病及预测中起到重要的作用。

经肝动脉化疗栓塞治疗老年原发性肝癌的临床疗效分析

目的研究经肝动脉化疗栓塞(HACE)对老年原发性肝癌(PHC)的治疗效果。方法回顾性分析2002年3月～2006年3月间采用HACE治疗的153例老年PHC病例,并以同期189例HACE治疗非老年PHC病例作为对照。结果老年组PHC相对于非老年组具有一定的临床特点,和非老年组的HACE治疗具有相似的近期疗效和生存率。结论HACE对不能手术切除的老年PHC是安全有效的微创治疗。

经腹肝动脉栓塞化疗加微波固化行肝细胞癌的两步切除(附2例报告)

报告2例巨大难切肝癌,经肝动脉栓塞化疗(HACE)、微波固化后,行两步切除,2例病人存活4年以上。肝癌经HACE及肿瘤微波固化后,使肿瘤的动、门脉血供破坏,肿瘤缩小后两步切除,是巨大难切的肝癌较理想的术式之一。

双重栓塞术治疗老年人中晚期肝癌(附16例报告)

我院1989年9月～1995年5月共行双重栓塞术治疗肝癌88例，其中行同步双栓治疗老年人中晚期肝癌16例，其半年生存率为93．75％，1年62．5％，2年25％，3年6.2％。同步双栓既破坏肝癌的动脉血供，也破坏肝癌的门静脉血供较单栓疗效佳。本组病人在治疗时无1例发生肝衰，说明此疗法安全可靠，是治疗老年人中晚期肝癌较为理想的方法。

冠状病毒动物模型研究进展及2019-nCoV可能的易感小动物模型

建立高致病性冠状病毒动物模型对疫苗、抗体、药物、病毒致病机制研究意义重大。非人灵长类、雪貂、叙利亚仓鼠等动物均可用于建立冠状病毒的感染和疾病动物模型。不同动物模型能从不同层面模拟重现临床感染症状。然而,从适用性、经济性、易于获取等角度综合考虑,建立冠状病毒易感的小鼠模型,并快速提供数量充足的动物,对于冠状病毒疫情防控更有现实意义。本文简述了MERS-CoV、SARS-CoV以及新型冠状病毒(2019-nCoV)3种高致病性冠状病毒小鼠模型的研究进展。基于近日发表在Nature的研究成果,即SARS-CoV和2019-nCoV均利用hACE2受体感染宿主细胞推测,我们于2018年构建的hACE2-KI/NIFDC人源化小鼠模型有望用于2019-nCoV的相关研究。

新冠病毒S蛋白RBD突变侵染性增强潜在分子作用机制

新冠病毒(SARS-CoV-2)出现越来越多侵染性更强的突变体,比较有代表性的毒株是B.1.351和B.1.617,它们的共同特点是在S蛋白484号位点有氨基酸突变。484号位点是一个与hACE2上的残基K31相互作用的位点。从分子动力学和蛋白质对接的角度入手,通过研究新冠病毒的E484K和E484Q突变,发现与hACE2直接作用的氨基酸残基(A475、N487)间的氢键键长缩短。动力学结果表明,475~489这段氨基酸序列具有高度的活跃性,是一个不应该被忽略的药物设计靶点。可以为开发新冠病毒抑制剂提供新靶点,一定程度上预测新冠病毒未来进化方向,同时也为类似的冠状病毒的突变研究提供新思路。

肝动脉塞栓化疗治疗原发性肝癌

目的 :研究肝动脉塞栓化疗治疗原发性肝癌的效果。方法 :对 380例肝癌患者实行肝动脉塞栓化疗。采用Seldinger方法经股动脉穿刺插管 ,药物选用ADM ,MMC ,5 -Fu ,DDP联合化疗。结果 :本组半年、1年、2年、3年生存率分别为 :78.3%、37.4 %、19.6%和 7.3% ,复查有明显肿块缩小( 30 %以上 )的患者达 83.3% ( 175 / 2 10 ) ,缩小 30 %以下或无变化者 2 3例 ,占 11%。结论 :肝动脉塞栓化疗对原发性肝癌有明显效果。

富马酸二甲酯对急性T淋巴细胞白血病影响的研究

目的:探讨富马酸二甲酯(DMF)对急性T淋巴细胞白血病的影响及潜在的作用机制,为临床治疗急性T淋巴细胞白血病提供实验基础和理论依据。方法:用不同浓度DMF处理Jurkat细胞24 h,然后采用流式细胞术检测Ki67^(+)的Jurkat细胞比例和绝对计数;同时采用Western blot方法检测DMF处理24 h之后,Jurkat细胞内核因子E2相关因子2(Nrf2)和E3泛素连接酶HACE1的蛋白水平变化;利用免疫共沉淀方法富集Jurkat细胞内Nrf2蛋白,然后采用Western blot方法检测HACE1蛋白水平;在HEK293T细胞中过表达Flag-Nrf2和不同梯度的Flag-HACE1质粒,48 h后采用Western blot检测Flag-Nrf2蛋白水平变化。结果:DMF能显著抑制Ki67^(+)的Jurkat细胞比例和绝对计数,即DMF抑制Jurkat细胞增殖,且呈剂量依赖性(r=0.9595,r=0.9054)。DMF能显著上调Jurkat细胞内Nrf2和E3泛素连接酶HACE1蛋白水平(P<0.01,P<0.01)。Jurkat细胞内Nrf2和HACE1蛋白存在相互作用。过表达Flag-HACE1显著上调Flag-Nrf2的蛋白水平,且呈剂量依赖性(r=0.9771)。结论:DMF抑制急性T淋巴细胞白血病细胞的增殖,其机制可能是DMF显著上调Nrf2和E3泛素连接酶HACE1蛋白水平,HACE1与Nrf2相互作用并正向调控Nrf2蛋白水平。

颌面部肿瘤外周血淋巴细胞粘附分子CD_(44)检测的临床意义

目的探讨CD44在颌面部肿瘤中变化的临床意义方法肿瘤组30例良性9例恶性21例正常组20例术前。