新霉素对大鼠前庭的损伤及复制缺陷型腺病毒前庭导入的研究

目的研究新霉素对大鼠前庭毛细胞的毒性作用并探索前庭基因导入的方法和途径,为药物性前庭功能损伤动物模型的制备和基因治疗的相关研究提供参考。方法将25只成年Wistar大鼠分为正常对照组、新霉素鼓阶给药组、新霉素前庭阶给药组、腺病毒(缺失E1、E3基因且构建有绿色荧光蛋白报告基因的复制缺陷型腺病毒,Ad-EGFP)鼓阶导入组、腺病毒(Ad-EGFP)前庭阶导入组,每组各5只动物。新霉素组大鼠在右耳通过耳蜗底回鼓阶(鼓阶组)或前庭阶打孔(前庭组)的方法在耳蜗内注入0.1%新霉素5μl,Ad-EGFP组则以同法导入物理滴度为2.1×1011vp/ml的Ad-EGFP 5μl,正常对照组大鼠不做任何处理。处理3天后对动物进行颈髓硬膜外短声诱发电位(click-evoked potentials on the surface of the cervical dura mater,CDM-CEP)检查和游泳试验,评价前庭功能,然后将动物处死,进行组织学和形态学观察。结果3天后新霉素组大鼠的前庭毛细胞即出现严重破坏,并出现严重的前庭功能损伤。正常对照组、新霉素鼓阶给药组、新霉素前庭阶给药组、Ad-EGFP鼓阶导入组、Ad-EGFP前庭阶导入组的游泳时间分别为4.0±0.71、10.2±1.64、9.8±1.48、4.8±0.84、5.0±0.71 s;正常对照组CDM-CEP的阈值为85±3.54 dB SPL,潜伏期为6.59±0.41 s;新霉素组120 dB SPL未引出CDM-CEP;Ad-EGFP鼓阶导入组CDM-CEP阈值为91±5.48 dB SPL,潜伏期为6.76±0.26 s,Ad-EGFP新霉素前庭阶导入组CDM-CEP的阈值为89±6.52 dB SPL,潜伏期为6.78±0.26 s。3天后,Ad-EGFP前庭阶导入组的前庭终末器官均出现Ad-EGFP的转染;而Ad-EGFP鼓阶导入组未见前庭终末器官的表达。结论新霉素对前庭毛细胞具有极强的破坏作用,新霉素耳蜗内注射的方法可以制备理想的前庭功能障碍动物模型,耳蜗底回前庭阶打孔可以作为基因导入前庭的有效途径。

阳离子对豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性电流的调制

本文旨在探讨哺乳动物前庭胆碱能传出神经系统的作用机制,应用全细胞膜片钳技术研究新鲜分离的豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性电流的特性以及细胞内外的阳离子对ACh-敏感性电流的调制作用。结果显示,Ⅱ型前庭毛细胞对细胞外ACh敏感,ACh激活缓慢持久的外向性电流,室温下此电流的再次完全激活时间约为(60±10)s。ACh-敏感性电流的反转电位为(-66±8)mV,提示此电流主要由K+参与形成,其直接作用是使毛细胞超极化。ACh-敏感性电流对较高浓度的四乙胺(tetraethylammonium chloride,TEA)敏感,提示细胞外ACh激活钙依赖性钾电流。进一步检测细胞内外阳离子对 ACh-敏感性电流的调制作用发现,细胞外Na+和细胞内Ca2+释放不参与此电流的激活过程,而细胞外K+、细胞外Ca2+和细胞内Mg2+对ACh-敏感性电流具有重要的调制作用。进一步提示,ACh是哺乳动物前庭传出神经系统重要的神经递质。 Na+不参与ACh-敏感性电流的激活过程提示,ACh-敏感性电流可能由非α9-N型胆碱能受体(α9-nAChR)介导。ACh诱导的Ⅱ型前庭毛细胞超极化作用受细胞外Ca2+浓度和细胞内Mg2+浓度调制。

CBA小鼠内耳感觉上皮的参考数据

目的测量成年CBA小鼠耳蜗和前庭的有关数据,为内耳感受器定量分析提供参考依据。方法将6只出生后3个月左右的成年CBA小鼠(12耳)的耳蜗和前庭各终器取出并制备成全耳蜗基底膜铺片和全前庭终器铺片。测量全耳蜗基底膜的总长度,以及基底膜和Corti器在耳蜗不同部位的宽度。观察并记录全耳蜗毛细胞的总数和基底膜上不同区间的毛细胞密度。观察并记录椭圆囊斑和球囊斑毛细胞的总数及其微纹区和周边区的毛细胞密度,记录壶腹嵴上的毛细胞密度。结果正常成年CBA小鼠的耳蜗基底膜长度为(5.76±0.196)毫米(平均数±标准差,下同),基底膜的宽度在耳蜗底部距起始端约1.5毫米处为(339.1±9.87)微米,在耳蜗中部距起始端约3毫米处为(304.5±11.82)微米,在耳蜗顶部距起始端约5毫米处为(300.1±7.22)微米,说明小鼠耳蜗基底膜的宽度从底回到顶回逐渐变窄。Corti器的宽度在耳蜗底部距起始端1.5毫米处为(37.80±2.24)微米,在耳蜗中部距起始端约3毫米处为(45.00±2.67)微米,在耳蜗顶部距起始端约5毫米处为(52.20±3.16)微米,可见Corti器的宽度从底回到顶回逐渐变宽。CBA小鼠全耳蜗毛细胞的总数为(3116.41±151.91)个,其中内毛细胞总数为(680.67±17.50)个,而外毛细胞的总数是(2435.8±143.46)个。耳蜗内、外毛细胞的平均密度为(541.1±9.36)个/毫米,其中内毛细胞的平均密度为(118.3±2.68)个/毫米,外毛细胞的平均密度为(422.8±11.87)个/毫米,耳蜗毛细胞在耳蜗基底膜上不同区间的毛细胞密度无明显差异(P>0.05)。小鼠椭圆囊斑上的毛细胞总数为(3300±177.51)个,球囊斑上的毛细胞总数为(3045±361.57)个。前庭球囊斑和椭圆囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度基本相同(P>0.05),两个囊斑微纹区的平均毛细胞密度为(40.2±6.59)个/0.0025mm2,两个囊斑周边区的平均毛细胞密度为(53.2±7.18)个/0.0025mm2,可见囊斑微纹区的毛细胞密度低于周边区。尽管小鼠上半规管和后半规管壶腹嵴的毛细胞区被位于嵴中央的上皮细胞分隔为两个区域,但三个壶腹嵴上的毛细胞密度基本相同,其平均密度为(44.7±7.15)个/0.0025mm2。结论本实验所得CBA小鼠耳蜗和前庭测量数据,为进一步定量观察CBA小鼠内耳病理学改变提供了重要的参考依据。

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素所致豚鼠前庭损害的保护作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)对庆大霉素所致活体豚鼠前庭损害的保护作用。方法 豚鼠皮下注射庆大霉素连续 10天 ,造成内耳损伤。实验组同时腹腔注射bFGF ,对照组则注射生理盐水。检测两组豚鼠的前庭功能 ,前庭终器行扫描电镜观察。结果 对照组前庭损伤明显重于实验组。

C57BL/10J小鼠内耳形态学观察

目的 探讨不同月龄C57BL／10J小鼠内耳形态学变化。方法 取C57BL/10J小鼠2月龄3只（6耳）、8月龄3只（6耳）、12月龄2只（4耳）、27月龄2只（4耳），采用耳蜗铺片和耳蜗图技术，观察耳蜗和前庭毛细胞的变化。结果 2月龄鼠在耳蜗底回和顶回可见有少量的外毛细胞缺失，内毛细胞正常。8月龄鼠外毛细胞缺失主要由耳蜗底回向顶回发展，少量内毛细胞缺失主要在耳蜗底回，对应于20kHz的基底膜区域显示外毛细胞缺失在20％左右。12月龄鼠外毛细胞缺失明显加重，耳蜗底回部分几乎完全缺失，外毛细胞损失区域发展到基底膜中部，并且蜗尖区域外毛细胞缺失达到40％，耳蜗底回内毛细胞缺失达到60％～80％，蜗尖部分内毛细胞基本正常，对应于20kHz的基底膜区域显示外毛细胞缺失近80％，内毛细胞缺失近30％。27月龄鼠耳蜗外毛细胞从基底膜中部至底回完全缺失，顶回缺失60％～80％，内毛细胞缺失逐渐向蜗尖扩展，对应于20kHz的基底膜区域显示外毛细胞完全缺失，内毛细胞缺失超过50％。前庭选取球囊斑，椭圆囊斑和壶腹嵴三个部位进行观察，不同月龄的C57BL／10J鼠前庭毛细胞均正常。结论 本研究首次对C57BL／10J小鼠的内耳形态学进行观察，发现该鼠同C57BL／6J小鼠比较在外毛细胞缺失规律和时间上有明显的差别，明确了内耳毛细胞的变化规律；同时首次观察了前庭毛细胞，为C57BL／10J小鼠作为遗传性和老年性聋研究的动物模型提供了形态学理论依据。

新霉素对大鼠前庭毛细胞损伤作用的实验研究

目的研究新霉素对大鼠前庭毛细胞的毒性作用,为药物性前庭功能障碍动物模型的制备和相关研究提供参考。方法将15只成年Wistar大鼠分为正常对照组(n=5)、新霉素组(n=5)和人工外淋巴液组(n=5),新霉素组大鼠在右耳通过耳蜗底转鼓阶打孔的方法在耳蜗内注入0.1%(g/100ml)新霉素5!l,人工外淋巴液组按同样方法注入人工外淋巴液5!l。正常对照组大鼠不做任何处理。处理3天后对动物进行颈髓硬膜外短声诱发电位(click-evoked potential on the surface of the cervical dura mater,CDM-CEP)检查和游泳试验以评价前庭功能;然后将动物处死,进行形态学观察。结果3天后新霉素组大鼠的前庭毛细胞即出现严重破坏,并出现严重的前庭功能损伤。正常对照组大鼠的游泳时间为(4.0±0.71)s(3～5s,n=5),新霉素组大鼠的游泳时间为(10.2±1.64)s(8～12s,n=5),人工外淋巴液组大鼠的游泳时间为(4.4±1.14)s(3～6s,n=5);在短音(click)刺激下,正常大鼠引出CDM-CEP的阈值为(85±3.54)dBSPL(80￣90dBSPL,n=5),阈值时的潜伏期为(6.59±0.41)s(6.05￣7.05s,n=5);新霉素组大鼠120dBSPL仍无法引出CDM-CEP;人工外淋巴液组大鼠引出CDM-CEP的阈值为(90±5.0)dBSPL(85￣95dBSPL,n=5),阈值时的潜伏期为(6.68±0.31)s(6.35～7.02s,n=5)。结论新霉素对大鼠前庭毛细胞具有极强的破坏作用,新霉素耳蜗内注射的方法可以制备理想的前庭功能障碍动物模型。

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ｖｅｓｔｉｂｕｌａｒ ｈａｉｒｃｅｌｌｓ，ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ，６ μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ３ 染色，利用激光扫描共聚焦显微镜（ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ，ＬＳＣＭ） 记录静息状态下、加入高Ｋ＋ 液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ２＋ ］ｉ 的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ２＋ 存在时，７５ ｍｍｏｌ／ＬＫ＋ 可引起所观察５ 个ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ均升高，细胞体和皮板区的［Ｃａ２＋］ｉ 变化一致；在细胞外无Ｃａ２＋ 的情况下，所观察的５ 个ＶＨＣ 中，高Ｋ＋ 并不能引起细胞内［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高。在细胞外存在Ｃａ２ ＋ 时，不同浓度（１ ．０ ｍｍｏｌ／Ｌ，０．１ ｍｍｏｌ／Ｌ）ＡＴＰ可引起绝大多数（１８／１９）ＶＨＣ 内［Ｃａ２＋ ］ｉ 迅速升高，达高峰后下降，恢复至静息时的水平；细胞外无Ｃａ２ ＋ 时，ＡＴＰ仅引起极少数（１／１０）ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ 升高；而对照组加入与ＡＴＰ等体积的Ｈａｎｋ 液，不引起ＶＨＣ

腺相关病毒Anc80L65转染成年小鼠椭圆囊的实验研究

目的探索腺相关病毒载体Anc80L65对正常和不同程度损伤的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮的转染特性。方法将6周龄小鼠分为以下三组。1)正常对照组:将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的Anc80L65病毒液(Anc80L65-GFP),经后半规管注射途径导入小鼠内耳;2)中度损伤组:行水平半规管注射导入150μg链霉素,术后2周通过后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液;3)重度损伤组:行水平半规管注射导入400μg链霉素,术后2周行后半规管注射导入Anc80L65-GFP病毒液。导入病毒后4周取椭圆囊行免疫荧光染色,观察椭圆囊的形态及GFP在椭圆囊感觉上皮的表达情况。结果正常对照组:Anc80L65-GFP病毒液注射后,正常椭圆囊毛细胞无明显缺失,纤毛形态正常,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。中度损伤组:椭圆囊前庭毛细胞数量明显减少,支持细胞仍存活,GFP广泛分布于整个感觉上皮区域。高倍镜下见前庭支持细胞和毛细胞被转染。重度损伤组:椭圆囊的前庭毛细胞和支持细胞均被损伤,前庭感觉上皮演化为细胞大小不一、形态不规则的扁平上皮结构。在前庭扁平上皮中,GFP阳性细胞数量与对照组及中度损伤组相比明显减少。结论Anc80L65能高效转染正常和中度损伤后的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮,但对重度损伤后形成的前庭扁平上皮的转染效率较低,这可能与其细胞属性发生改变有关。在未来的前庭基因治疗研究中,须根据前庭感觉上皮的不同损伤程度来选择合适的载体。

豚鼠前庭单个毛细胞的分离

从７只豚鼠前庭中取出壶腹嵴、位觉斑，放置在胶原酶溶液中孵育５０ｍｉｎ～６０ｍｉｎ后行机械分离。可获得均含有皮板和纤毛的两种类型活性毛细胞８３（±２３）个，其中Ⅰ型毛细胞呈烧瓶状，细胞中部有明显的颈；Ⅱ型毛细胞呈圆形或椭圆形，胞体比Ⅰ型毛细胞小；Ⅰ、Ⅱ型毛细胞的比例是６２１９；分离后５ｈ仍有４０％的毛细胞具有活性。另外，笔者还观察到失活的早期变化是胞内出现颗粒。实验结果表明，酶消化后辅以机械分离，可获得大量单个、离体的活性毛细胞，并且能够进行哺乳动物前庭的生理学研究。

豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性BK电流

目的研究豚鼠球囊和椭圆囊Ⅱ型前庭毛细胞乙酰胆碱(ACh)-敏感性钾电流的特性。方法应用全细胞膜片钳技术检测新鲜单离的豚鼠球囊和椭圆囊Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性钾电流的离子特性及其药理学特点。结果①细胞外ACh激活一缓慢持久的外向性电流,其效应呈浓度依赖性,半数激活浓度为45μmol.L-1。②ACh-敏感性钾电流对钾通道阻断剂TEA(tetraethylammon ium)、IBTX(ibe-riotoxin)和Cs+敏感,而对4-AP(4-am inopyride)和apam in不敏感。③细胞内应用钙离子螯合剂BAPTA[b is(2-am inophe-noxy)ethane-N,N,N,′N-t′etra-acetic ac id],ACh-敏感性钾电流的幅值迅速被抑制。④ACh-敏感性钾电流对细胞外液中钙离子浓度变化敏感,0.2 mmol.L-1低钙外液中ACh-敏感性钾电流被抑制,电流最大值由0~10 mV向-20 mV^-30 mV超极化方向移动。结论细胞外ACh激活豚鼠球囊和椭圆囊Ⅱ型前庭毛细胞产生大电导钙依赖性钾电流(BK)。ACh-敏感性BK电流在豚鼠Ⅱ型前庭毛细胞超极化保护机制中具有重要的作用。

小鼠Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性BK通道特性及其钙调制

目的:研究小鼠球囊Ⅱ型前庭毛细胞乙酰胆碱(ACh)-敏感性钾电流的药理学特性以及钙离子对ACh-敏感性钾电流的调制作用。方法:应用全细胞膜片钳技术研究新鲜分离的小鼠球囊Ⅱ型前庭毛细胞ACh-敏感性钾电流的药理学特性以及细胞内外钙离子对ACh-敏感性钾电流的影响。结果:(1)细胞外ACh激活一缓慢持久的外向性电流。ACh-敏感性电流对钾通道阻断剂四乙胺(TEA,tetraethylammonium)和卡律布德蝎毒素(CTX,charybdotoxin)敏感,而对4-氨基吡啶(4-AP,4-aminopyride)不敏感。(2)细胞内应用钙离子螯合剂EGTA(ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N,N,N,N-tetra-acetic acid),ACh-敏感性钾电流的幅值逐渐被抑制;细胞内预先应用肝素(heparin)阻断三磷酸肌醇-依赖性钙离子释放,ACh-敏感性钾电流的幅值不受影响。(3)ACh-敏感性钾电流对钙通道阻断剂Cd2+和Ni2+敏感。结论:细胞外ACh激活小鼠球囊Ⅱ型前庭毛细胞产生大电导钙依赖性钾电流(BK)。ACh-敏感性BK电流的活动依赖于细胞外钙离子通过膜上钙通道的内流,而三磷酸肌醇-依赖性细胞内钙离子释放机制不参与ACh-敏感性BK电流的激活过程。

建立大鼠前庭器官体外培养模型及观察佛波酯作用下的超微结构变化

目的：建立大鼠前庭器官的原代体外培养模型，并通过透射电镜观察前庭上皮细胞在佛波酯（PMA）作用前后的超微结构变化．方法：无菌条件下取出生2d大鼠的椭圆囊上皮，体外培养1～7d；从第2日开始用倒置显微镜观察、照相，试验组加入PMA30min，2h和6h，固定，透射电镜观察．结果：体外培养椭圆囊1wk，12h时可见成纤维细胞沿移植物边缘游出，2d后内皮细胞聚集，呈铺路石样，透射电镜观察细胞无肿胀，胞膜、胞核完整，线粒体嵴无肿胀，纤毛无脱落；PMA各试验组细胞形态正常，核糖体密集，高尔基体较前发达，内质网轻度扩张．结论：大鼠前庭器官体外培养方法可行，为今后进一步研究提供了实验模型．

激光共聚焦显微镜在耳科学研究中的应用

激光扫描共焦显微镜(Laser scanning confocal micmscope,LSCM)结合荧光探针技术测定了生理和病理条件下耳蜗、前庭毛细胞,螺旋神经节细胞内游离钙离子[Ca^(2+)]i及其变化,为在细胞水平上研究听觉和平衡的生理病理机制提供了新的手段。

实验动物前庭感觉毛细胞的定量观察

目的测量常用实验动物内耳前庭感觉区的实际面积和量化分析前庭各个感觉区的毛细胞总数或密度。方法①制作CBA/CaJ小鼠、裸鼠、SD大鼠、豚鼠、南美栗鼠、新西兰白兔和非洲黑长尾猴的球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片及壶腹嵴铺片,所有铺片样品来自每种受试动物的6个颞骨,在放大100倍的光学显微镜下拍摄2个囊斑铺片的整体照片;②应用Image J软件的图像测量程序,测量了上述7种常用实验动物球囊斑和椭圆囊斑的实际面积;③用网格将球囊斑铺片和椭圆囊斑铺片照片上的前庭感觉区划分为一个个方块区域。在放大400倍的光学显微镜下准确计数每个方格内的毛细胞数量,然后将每个方格的毛细胞计数结果相加以获得每种受试动物球囊斑和椭圆囊斑上的毛细胞总数;④应用前庭小视野定量观察技术计算出前庭各个感觉区小视野范围内的毛细胞密度。结果①从小鼠、裸鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔到猴的球囊斑面积依次为(0.193±0.009)、(0.216±0.008)、(0.323±0.010)、(0.528±0.035)、(0.687±0.065)、(1.237±0.075)、(1.371±0.032)mm 2;椭圆囊斑的面积依次为(0.193±0.020)、(0.208±0.013)、(0.321±0.011)、(0.526±0.034)、(0.795±0.017)、(1.224±0.082)、(1.388±0.048)mm 2;②从小鼠、裸鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔到猴的球囊斑毛细胞的总数依次为(2476.3±64.4)、(2389.8±47.8)、(3135.3±191.6)、(4882.2±208.7)、(6128.5±242.9)、(10572.2±464.4)、(10992.7±397.4)个;椭圆囊斑毛细胞的总数依次为(2491.4±54.8)、(2368.0±46.1)、(3218.8±82.9)、(4925.3±271.1)、(7794.0±386.1)、(11347.4±435.7)、(11114.5±410.6)个;③从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的球囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为101.0±5.79(微纹区)/120.8±4.15(周边区),95.5±3.91(微纹区)/109.2±5.26(周边区),78.4±6.54(微纹区)/94.8±4.38(周边区),60.0±4.74(微纹区)/84.6±2.61(周边区),57.2±3.83(微纹区)/80.0±3.54(周边区),53.8±4.21(微纹区)/68.0±4.18(周边区)。从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的椭圆囊斑微纹区和周边区的毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为103.8±5.02(微纹区)/119.2±3.70(周边区),91.2±2.49(微纹区)/106.4±4.16(周边区),74.1±3.54(微纹区)/90.8±3.56(周边区),60.4±4.98(微纹区)/81.6±2.07(周边区),57.8±1.92(微纹区)/77.8±3.70(周边区),54.0±2.74(微纹区)/66.4±2.51(周边区)。从小鼠、大鼠、豚鼠、南美栗鼠、白兔和猴的壶腹嵴毛细胞密度(毛细胞数量/0.03 mm 2)依次为112.4±6.38,105.5±3.51,95.2±3.42,84.0±7.16,78.2±2.86,70.8±2.39。可见由于体型较小动物毛细胞的细胞体比体型较大动物毛细胞的细胞体小,因而体型较小动物的前庭毛细胞密度高于体型较大动物的前庭毛细胞密度。另外,每种实验动物球囊斑和椭圆囊斑微纹区的毛细胞密度相似,周边区的毛细胞密度也大致相同,但是同种实验动物囊斑微纹区的毛细胞密度却低于周边区的毛细胞密度。此外,壶腹嵴毛细胞的密度与球囊斑和椭圆囊斑周边区的毛细胞密度几乎相同。鉴于某些损害因素往往具有选择性破坏囊斑微纹区毛细胞的表现,因此囊斑微纹区的毛细胞密度应该与囊斑周边区的毛细胞密度区分开来进行统计,必要时甚至需要把Ⅰ型毛细胞和Ⅱ型毛细胞也区分开来分别予以病理学改变的定量评估。结论本研究采用的前庭测量方法和获得的前庭各个感觉区的测量数据和毛细胞总数及毛细胞密度,为前庭病理学研究的定量分析提供了有益的参考经验和必要的参考数据。

牛蛙前庭毛细胞A型钾离子流的实验研究

为了进一步探讨前庭细胞膜上通道的类型及动力学特征,采用全细胞式膜片钳技术在牛蛙前庭毛细胞侧膜上研究了钾通道电流。结果表明阻断内向电流后,当钳制电位为-100mV,阶跃从-70mV至+20mV时,随着膜电位的去极化,可记录到快速瞬时的A型通道电流,激活电压为（-53±13）mV,4-Ap对其有特异性阻断作用;A型钾通道的数量在牛蛙毛细胞间存在差异;除A型钾通道外,细胞膜上还含有其它类型的通道,这种通道能被TEA阻断,其性质待定。

卡铂损害灰鼠前庭神经元和前庭Ⅰ型毛细胞的定量观察

目的 定量观察卡铂对前庭神经系统的破坏作用 ,将前庭毛细胞的病变与前庭神经元的病变进行对比和分析 ,同时探讨其与卡铂引起的前庭性诱发眼球震颤持续时间改变的关系。方法 应用微量冰水诱发前庭性眼球震颤以观察前庭功能的改变。应用前庭终器取材料和铺片技术以及前庭终器小视野定量观察方法进行毛细胞密度的测量以证明毛细胞的损失程度。应用连续切片和神经元计数技术定量观察前庭神经元的损害。上述三项指标用于正常和卡铂耳中毒灰鼠动物模型的观察。结果 卡铂耳中毒灰鼠的前庭诱发眼震持续时间明显缩短 ;卡铂造成两个囊斑微纹区和壶腹嵴顶部的前庭Ⅰ型毛细胞缺损严重 ,但周边区毛细胞损失程度较轻 ,前庭Ⅱ型毛细胞则无明显损害 ;卡铂造成前庭神经元的数量明显减少 ,其损失程度与Ⅰ型毛细胞的损失程度相接近。结论 卡铂选择性破坏灰鼠前庭Ⅰ型毛细胞及其支配神经节 。

小鸡再生听毛细胞及其突触连接的放射自显影

目的 采用光镜放射自显影 (Lightmicroscopicautoradiography ,LM ARG)及电镜放射自显影 (Electronmicroscopicautoradiography ,EM ARG)技术 ,观察小鸡再生听毛细胞及其突触连接的特征。方法 7d龄纯种伊莎鸡 2 0只 ,实验组 (n =14) ,连续皮下注射庆大霉素 10d ;对照组 (n =6 )。皮下注射生理盐水 ,用药第 4d开始注射氚标记胸腺嘧啶核苷 ,分别于停药当天及第 7d取标本作LM ARG和EM ARG。结果 停药当天组光镜下标记细胞多为支持细胞 ,位于损伤区基底膜上至表层之间 ;电镜下有标记的毛细胞位于腔面 ,银颗粒呈卷丝状 ,准确定位于细胞核上 ,毛细胞下可见尚未成熟的神经突触 ,内含较多囊泡及线粒体 ,突触特殊结构尚不明显。停药第 7d时光镜发现受损区有标记的成熟毛细胞 ;电镜下再生毛细胞及突触特征与当天组相似。对照组未见标记的毛细胞和支持细胞。结论 :庆大霉素中毒后鸡基底乳头中细胞增殖活跃 ,基底乳头中某些支持细胞作为前体细胞 ,通过有丝分裂增殖分化为毛细胞。再生毛细胞及其突触结构尚待进一步发育成熟。

内耳前庭毛细胞再生的实验研究

本文应用庆大霉素皮下注射破坏豚鼠前庭毛细胞，连续１０天，停药后分别于当天及４、７、２８天处死。利用眼震电图检测前庭功能改变，电镜和光镜观察前庭感觉上皮损伤情况及再生增殖过程。结果表明：（１）冰水试验ＥＮＧ检查发现停药后前庭功能严重受损，无前庭功能恢复征象。（２）扫描电镜观察停药当天组前庭感觉上皮广泛破坏，以微纹区明显，４、７天组破坏加重。２８天组破坏区有新毛细胞生长。定量分析显示２８天组与对照组及当天组比较均有显著差异。（３）光镜观察发现壶腹嵴受损较椭圆囊及球囊重，定量分析结果示停药２８天组有不同程度毛细胞再生。

关注前庭系统基础研究

眩晕是一种临床常见症状,研究表明前庭系统病变是导致眩晕的重要原因。前庭毛细胞及其神经支配损伤是很多患者罹患眩晕的基础原因,充分的科学研究是解决临床问题的关键所在。虽然哺乳动物的前庭毛细胞在损伤后具有自我再生能力,但是这种能力非常有限,目前尚无有效方法使损伤后的前庭毛细胞充分再生以恢复功能。有关于神经保护和前庭基因治疗的相关研究为促进前庭系统的功能重建提供了科学依据。