CCL 4与BDL致大鼠肝损伤中α-SMA、Hab18G/CD147表达的差异

探究CCL 4腹腔注射和胆总管结扎(Bile Duct Ligation,BDL)致大鼠肝损伤中α-SMA、Hab18G/CD147表达的差异,为法医学鉴定药物性肝损伤提供科学参考。选取雄性SD大鼠60只,随机分为CCL 4对照组(N)、BDL对照组(S)、CCL 4肝损伤组(C)、BDL肝损伤组(B),每组各15只。各组分别在实验1 w、3 w、5 w时断颈处死5只大鼠,采血检测谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Aspertate aminotransferase,AST),总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBIL),检测α-SMA、Hab18G/CD147mRNA的表达情况。qRT-PCR检测结果显示,C组α-SMAmRNA、Hab18G/CD147mRNA的表达量在1 w、3 w、5 w同时间段相比均高于B组(P<0.05)。与对照组相比较,C组、B组血清中ALT、AST、DBIL、TBIL含量均增加,说明大鼠肝脏均有不同程度的损伤;CCL 4与BDL肝损伤有不同特点,在肝损伤过程中α-SMA、Hab18G/CD147mRNA的表达随着损伤时间的延长表达量逐渐增加。

HAb18G的表达与乳腺癌的进展及预后的关系

背景与目的研究HAb18G在乳腺癌中的表达及其与肿瘤进展和预后的关系。 方法采用免疫组织化学（LSAB）的方法检测90例正常、33例肿瘤样良性病变、111例良性肿瘤、44例不典型增生、112例导管内癌和1247例浸润性乳腺癌中HAb18G的表达，分析HAb18G的表达与乳腺癌病理学特征、进展及预后的关系。并随机选取癌旁伴有不典型增生的44例乳腺癌进行原位杂交（ISH），观察HAb18G在乳腺癌基因水平上的改变。

HAb18G/CD147在多种恶性肿瘤中的表达及其临床意义

目的探讨HAb18G/CD147表达与食管癌、结肠癌、宫颈癌、肺癌、卵巢癌和肝细胞癌的临床相关性。方法应用免疫组织化学SP染色法分析上述6种恶性肿瘤及其癌旁组织和淋巴结转移灶标本中CD147基因表达和定位,并对CD147表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况进行分析。结果相对于癌旁组织,CD147在6种肿瘤中的表达均明显生升高。CD147表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和淋巴结转移均显著正相关。结肠癌、宫颈癌以及食管癌中,CD147在浸润深的组织中的表达显著升高(P<0.05);宫颈癌、食管癌、肺癌以及卵巢癌中,CD147在淋巴结转移灶中的表达显著升高(P<0.05),但在结肠癌中差别不显著;结肠癌、宫颈癌、食管癌以及肺癌中,CD147在分化差的组织中的表达显著升高(P<0.05)。结论CD147表达在分化差、浸润深以及淋巴结转移的组织中明显升高,提示CD147可能是恶性肿瘤的预后指标。

抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定

目的 :克隆抗人肝癌单抗HAb18Fd及轻链基因 ,并对其可靠性和准确性进行验证。方法 :从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA ,利用RT PCR扩增抗体Fd及轻链基因 ,连入 pMD18T载体后 ,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析。然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体 pComb3中 ,转化大肠杆菌XL1 blue并利用辅助噬菌体M 13K0 7进行挽救 ,收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性。结果 :扩增的HAb18全长轻链和Fd基因大小分别为 6 6 5bp和 6 6 8bp ,序列分析显示 :VH及VL均含有 2个特征性的半胱氨酸 ,CH1属于IgG1亚类 ,CL属于κ亚型。ELISA证实 ,Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论 :成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因 ,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础。

HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨

目的 探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法 应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果 HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论 全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。

HAb18G/CD147拮抗肽抗肝癌转移作用的体外实验

目的:筛选获得HAb18G/CD147高亲和性拮抗肽中具有体外抗肝癌细胞转移作用的拮抗肽.方法:对于采用HAb18G/CD147纯抗原筛选噬菌体随机12肽库所获得的9条高亲和性的12肽(AP-1-AP-9).分别采用:MTT法测定AP-1-AP-9的对肝癌细胞(HHCC)的直接毒性;明胶酶谱法分析AP1-AP-9对基质金属蛋白酶(MMPs)产生及其激活过程的影响;重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭抑制实验测定AP-1-9对肝癌细胞(HHCC)侵袭力的的影响;观察AP-1-AP-9对HHCC与细胞外基质蛋白(Matrigel,FN,LN,CollogenⅣ)、HHCC与间质细胞(成纤维细胞fb)黏附能力;以及AP1-9对HHCC运动能力的影响.结果:拮抗肽AP-1-AP-9对HHCC无明显细胞毒性作用;AP-1,6,9对HHCC刺激fb细胞产生MMP-2其激活过程具有明显的抑制作用;AP-1,3,6,7,8,9对HHCC侵袭力有明显的抑制作用(P<0.05),抑制率分别为78.22%,90.1%,62.83%,56.44%,68.32%和81.19%;9条拮抗肽对HHCC与细胞外基质蛋白Matrigel,FN无明显的抑制作用,但AP-3,9对HHCC与CollogenⅣ,LN的黏附有抑制作用;AP-1,6,9对HHCC与fb细胞之间的黏附有抑制作用;AP-6可抑制HHCC的运动能力,抑制率54%,但统计学上差异无显著性(P>0.05).结论:HAb18G/CD147拮抗肽(AP-1-AP-9)对肝癌的侵袭转移相关的多个环节有明显的抑制作用,为研究开发新的抗肿瘤转移多肽药物开辟了新途径.

HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G的亲和性

目的 :研究HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD14 7抗原的亲和性。方法 :利用流式细胞仪测定人肝癌细胞 (HHCC ,SMMC772 1)上HAb18G抗原的表达。分别在HAb18G/CD14 7拮抗肽AP 1、AP 2和AP 6的N端标记生物素 ,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定AP 1、AP 2和AP 6与HHCC或SMMC772 1的结合能力。结果 :HAb18G抗原在HHCC和SMMC772 1细胞上均呈高表达。AP 6对HHCC的亲和力最强 ,AP 2次之 ,AP 1最弱。AP 6对与SMMC772 1的亲和力也最强 ,AP 1次之 ,AP 2未检测到。结论 :HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G/CD14

肝癌DSA血供类型与经肝动脉灌注^(131)Ⅰ-HAb18F(ab')_2治疗后瘤体大小变化的关系探讨

目的探讨不同血供类型的原发性肝癌(简称肝癌)经肝动脉灌注131Ⅰ-HAb18F(ab')2的疗效差异。方法使用Seldinger技术,超选择性肝动脉插管灌注0.75mCi/kg131Ⅰ-HAb18F(ab')2注射液,CT随访治疗前后的瘤体大小变化。按照DSA造影表现,将30例患者分为多、中等、少血供3型,分析不同类型患者瘤体缩小的差异。结果DSA显示多、中等血供型肝癌肿瘤缩小的比率分别为60%、37.5%,2例少血供型肝癌治疗后1例瘤体显著缩小。结论131Ⅰ-HAb18F(ab')2免疫内照射治疗对不同血供类型的肝癌均有一定的缩小瘤体的效果。

非小细胞肺癌组织中HAb18G、MMP-9和MMP-2表达与预后的相关性

目的探讨HAb18G、MMP-9和MMP-2的表达与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)转移和预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测121例NSCLC组织中HAb18G、MMP-9和MMP-2的表达,并对NSCLC患者术后5年生存期进行追踪随访。结果HAb18G表达与患者性别、年龄和病理类型无关(P>0.05),与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05);MMP-9和MMP-2的表达与患者性别、年龄和分化程度无关(P>0.05),与肿瘤大小、组织类型、TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05);HAb18G表达与MMP-9和MMP-2表达均呈正相关;HAb18G、MMP-9和MMP-2高表达组NSCLC患者术后5年生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。结论HAb18G、MMP-9和MMP-2的表达水平与NSCLC的转移和预后密切相关,可作为早期诊断和预后判断的参考指标。

不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较

目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果。方法: 以原核表达的GST -HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3 /HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、DNA肌肉免疫及pcDNA3 /HAb18G -HCCbooster(DNA -cellbooster)免疫接种BALB/c小鼠。采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEFIgG抗体的滴度和Ig亚类。用Westernblot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性。用免疫荧光法验证DNA- cellbooster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性。结果:以GST- HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcD -NA3 /HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA -cellbooster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生。结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础。

^（131）I－HAb18肝癌单克隆抗体对荷肝癌裸鼠的导向治疗药效研究

￣（１３１）Ｉ－ＨＡｂ１８肝癌单克隆抗体对荷肝癌裸鼠的导向治疗药效研究米力，陈志南，曲萍，边惠洁，刘成刚（第四军医大学国家８６３肝癌导向药物项目组，西安７１００３２）单克隆抗体对肿瘤相应抗原具有高度的亲和性，用放射性核素标记ＭＣＡｂ．可选择性地杀伤瘤...

HAb18G及MMP-2与肝癌细胞分化的关系

研究肝癌细胞膜新分子ＨＡｂ１８Ｇ与ＭＭＰ－２在肝癌组织中的表达以及二者与肝癌组织分化的相关性。对３５例肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织进行了ＨＡｂ１８Ｇ及ＭＭＰ—２免疫组织化学检测，并用常规组织学ＨＥ染色确定肝癌的病理分级。ＨＡｂ１８Ｇ定位于肝癌细胞膜和胞浆．ＭＭＰ－２定位于肝癌细胞胞浆内，二者的表达与肝癌分级呈正相关。ＨＡｂ１８Ｇ作为一种细胞外基质金属蛋白酶诱导因子，同ＭＭＰ－２在肝癌组织的表达与肝癌细胞分化程度密切相关．

^(131)I-肝癌单抗片段HAb18F(ab')_2注射液药盒的制备

选择Mather高效碘标法(NBS法)制备应用于肝癌治疗的131I-肝癌单抗片段HAb18F(ab')2注射液药盒,确定并优化了冷药盒各组分的剂型、标记条件和纯化方法。制备出的药盒抗体标记物的放化纯度大于95%,整个标记过程可在10min内完成,10℃以下干燥处可保存两年以上,适于临床应用。

肝癌膜相关抗原Hab18g为CD147分子的鉴定

目的 从蛋白水平验证肝癌膜相关抗原Hab18g为CD147分子 ,并探讨单抗Hab18和抗CD147mAb识别抗原表位的异同。方法 间接免疫荧光染色 ,免疫组化ABC法 ,斑点杂交及FCM加成试验。结果 抗CD147mAb与Hab18两者识别抗原的阳性反应结果一致 ,先后加用两种单抗所测的平均荧光强度值高于单独用任一种单抗所测的值。结论 Hab 18g应称为CD147分子 ,Hab 18和抗CD147两株单抗识别抗原不同表位。

HAb18G/CD147在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨HAb18G基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系。方法:应用免疫组化SP染色法分析了108例食管鳞状细胞癌标本中HAb18G基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后3年随访。结果:HAb18G基因产物在有淋巴结癌转移和预后差的食管鳞状细胞癌病例中高表达;HAb18G的高表达与食管鳞状细胞癌的浸润转移、分化程度均相关(P<0.05);淋巴结转移和HAb18G表达可作为食管鳞状细胞癌患者预后独立指标。结论:HAb18G在食管鳞状细胞癌中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标。

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab')_2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18F(ab')2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18F(ab')2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(<3%)、复溶时间(<10s)、纯度(>95%)及稳定性没有影响。研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18F(ab')2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据。

人鼠嵌合Fab抗体通用表达载体的构建和抗人肝癌相关抗原HAb18G嵌合Fab抗体的表达

目的:构建一个在大肠杆菌中表达人鼠嵌合Fab抗体的通用载体,并用于抗人肝癌相关抗原HAb18G人鼠嵌合Fab抗体的表达.方法:利用特异引物PCR扩增人IgG3的CHl和Cκ基因,分别克隆到表达载体pComb3中,从而构建成人-鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体pComb3C.然后将扩增的mAbHAb18的VL和VH基因分别组装到通用表达载体中,酶切去除gⅢ片段后,连接成为HAb18嵌合Fab抗体的分泌型表达载体pComb3C/cFab.转化大肠杆菌后诱导其表达,通过ELISA检测产物的表达和定位.最后,利用亲合层析纯化表达产物,进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,同时采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的亲和力和特异性.结果:测序及酶切鉴定表明,人IgG3的CHl和Ck基因正确插入到pComb3中.大小分别为324bp和333bp,同时mAbHlAb18的嵌合Fab基因也分别获得正确组装和表达.表达产物的分子质量约为45ku,主要位于周质腔中.另外,ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物含有人的抗体片段,并具有与相应抗原特异结合的活性,亲和力约为亲本抗体的10%.结论:成功构建了人鼠嵌合Fab抗体的通用表达载体并制备了抗人肝癌小分子嵌合Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础.

肝癌相关抗原HAb18G反义RNA表达质粒的构建及克隆鉴定

目的 构建 HAb1 8G反义 RNA表达质粒载体 .方法 用 DNA重组技术将人 HAb1 8G基因反向克隆到真核表达质粒 PCI- neo中 ,构建成 HAb1 8G反义 RNA表达质粒PCI- as HAb1 8G.用阳离子脂质体介导转染人肝癌细胞系HHCC,经 G41 8筛选后获得的克隆进行鉴定 .结果 HAb1 8G反义 RNA表达质粒载体 PCI- as HAb1 8G经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确 .流式细胞仪及免疫组化 SP法染色均证实 :转染细胞 HHCC/as HAb1 8G中HAb1 8G表达为阴性 ,而转染空载体的 HHCC/neu及 HHCC均为强阳性 .结论 成功构建了 HAb1 8G反义 RNA表达质粒载体 PCI- as HAb1 8G.为进一步研究 HAb1