CCL 4与BDL致大鼠肝损伤中α-SMA、Hab18G/CD147表达的差异

探究CCL 4腹腔注射和胆总管结扎(Bile Duct Ligation,BDL)致大鼠肝损伤中α-SMA、Hab18G/CD147表达的差异,为法医学鉴定药物性肝损伤提供科学参考。选取雄性SD大鼠60只,随机分为CCL 4对照组(N)、BDL对照组(S)、CCL 4肝损伤组(C)、BDL肝损伤组(B),每组各15只。各组分别在实验1 w、3 w、5 w时断颈处死5只大鼠,采血检测谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Aspertate aminotransferase,AST),总胆红素(Total bilirubin,TBIL)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBIL),检测α-SMA、Hab18G/CD147mRNA的表达情况。qRT-PCR检测结果显示,C组α-SMAmRNA、Hab18G/CD147mRNA的表达量在1 w、3 w、5 w同时间段相比均高于B组(P<0.05)。与对照组相比较,C组、B组血清中ALT、AST、DBIL、TBIL含量均增加,说明大鼠肝脏均有不同程度的损伤;CCL 4与BDL肝损伤有不同特点,在肝损伤过程中α-SMA、Hab18G/CD147mRNA的表达随着损伤时间的延长表达量逐渐增加。

HAb18G/CD147刺激人肝癌细胞分泌基质金属蛋白酶的机制探讨

目的 探讨HAb18G/CD14 7诱导肝癌细胞基质金属蛋白酶 (MMP)分泌和活化的机制。方法 应用明胶酶谱分析方法观察HAb18G/CD14 7分子及其细胞内、外片段高表达对人SMMC 772 1肝癌细胞分泌MMP(MMP 2和MMP 9)及其活化的影响 ,以及细胞内Ca2 +信号调控在此过程的作用。结果 HAb18G/CD14 7分子的高表达明显诱导MMP 2和MMP 9的分泌和活化 ,分泌总量升高 ( 30 .4 5± 3.4 1) % (P <0 .0 1) ,而细胞内、外各片段的表达均不能有效刺激MMP的分泌与活化。细胞内Ca2 +库释放诱导剂Thapsigargin(Tg)在未转染 772 1细胞可有效诱导MMP 2和MMP 9的分泌与活化 ,较对照组升高 ( 5 8.6 3± 31.0 4 ) % (P <0 .0 5 ) ,其诱导作用可受到细胞内Ca2 +调节抑制剂S 亚硝基 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetylpenicillamine,SNAP)的明显抑制 ,而HAb18G/CD14 7的高表达则抑制了以上细胞内Ca2 +信号通路对MMP分泌和活化的调节作用 ,使转染的T772 1细胞MMP的分泌与活化始终处于高水平稳定状态。结论 全长的HAb18G/CD14 7分子可通过抑制细胞内Ca2 +信号调控通路诱导肝癌细胞稳定高表达和活化MMP。

HAb18G/CD147拮抗肽抗肝癌转移作用的体外实验

目的:筛选获得HAb18G/CD147高亲和性拮抗肽中具有体外抗肝癌细胞转移作用的拮抗肽.方法:对于采用HAb18G/CD147纯抗原筛选噬菌体随机12肽库所获得的9条高亲和性的12肽(AP-1-AP-9).分别采用:MTT法测定AP-1-AP-9的对肝癌细胞(HHCC)的直接毒性;明胶酶谱法分析AP1-AP-9对基质金属蛋白酶(MMPs)产生及其激活过程的影响;重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭抑制实验测定AP-1-9对肝癌细胞(HHCC)侵袭力的的影响;观察AP-1-AP-9对HHCC与细胞外基质蛋白(Matrigel,FN,LN,CollogenⅣ)、HHCC与间质细胞(成纤维细胞fb)黏附能力;以及AP1-9对HHCC运动能力的影响.结果:拮抗肽AP-1-AP-9对HHCC无明显细胞毒性作用;AP-1,6,9对HHCC刺激fb细胞产生MMP-2其激活过程具有明显的抑制作用;AP-1,3,6,7,8,9对HHCC侵袭力有明显的抑制作用(P<0.05),抑制率分别为78.22%,90.1%,62.83%,56.44%,68.32%和81.19%;9条拮抗肽对HHCC与细胞外基质蛋白Matrigel,FN无明显的抑制作用,但AP-3,9对HHCC与CollogenⅣ,LN的黏附有抑制作用;AP-1,6,9对HHCC与fb细胞之间的黏附有抑制作用;AP-6可抑制HHCC的运动能力,抑制率54%,但统计学上差异无显著性(P>0.05).结论:HAb18G/CD147拮抗肽(AP-1-AP-9)对肝癌的侵袭转移相关的多个环节有明显的抑制作用,为研究开发新的抗肿瘤转移多肽药物开辟了新途径.

不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较

目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果。方法: 以原核表达的GST -HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3 /HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、DNA肌肉免疫及pcDNA3 /HAb18G -HCCbooster(DNA -cellbooster)免疫接种BALB/c小鼠。采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEFIgG抗体的滴度和Ig亚类。用Westernblot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性。用免疫荧光法验证DNA- cellbooster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性。结果:以GST- HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcD -NA3 /HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA -cellbooster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生。结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础。

HAb18G/CD147在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨HAb18G基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系。方法:应用免疫组化SP染色法分析了108例食管鳞状细胞癌标本中HAb18G基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后3年随访。结果:HAb18G基因产物在有淋巴结癌转移和预后差的食管鳞状细胞癌病例中高表达;HAb18G的高表达与食管鳞状细胞癌的浸润转移、分化程度均相关(P<0.05);淋巴结转移和HAb18G表达可作为食管鳞状细胞癌患者预后独立指标。结论:HAb18G在食管鳞状细胞癌中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标。

肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路关键分子的筛选

目的筛选肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路中差异表达的关键分子。方法提取SMMC-7721细胞和T7721细胞(SMMC-7721经稳定转染并高表达HAb18G/CD147的肝癌细胞),应用信号转导相关基因芯片筛选两种肝癌细胞内差异表达的关键分子。结果基因芯片结果显示共有13个差异表达的基因,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞系中,表达下调的基因包括:骨形成蛋白(BMP)家族的BMP-2、BMP-5,内皮素1(ET-1),结缔组织生长因子-富含半胱氨酸血管生成诱导物61-肾母细胞瘤过表达基因(CCN)蛋白家族的WISP-2(Wnt1-induced signaling proteins-2/CCN5)和富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61/CCN1),前列腺干细胞抗原(PSCA);表达上调的基因包括:白细胞介素10受体α(IL-10Rα),趋化因子家族的IL-6、IL-8和CXC趋化因子配体2(CXCL2/GROβ),线粒体超氧化物歧化酶2(SOD2),B因子(B factor)和转化生长因子β(TGF-β)诱导基因克隆3(βig-h3)的表达。结论共筛选出HAb18G/CD147信号转导通路相关的13个差异表达基因,这些基因与肝癌细胞免疫微环境重塑、血管形成、增殖、侵袭和迁移等生物学过程相关。

红景天对大鼠肝纤维化肝脏中HAb18G/CD147的表达

目的:探讨红景天对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化肝组织中HAb18G/CD147基因表达的影响。方法:健康♂SD大鼠60只随机分组:(1)对照组(20只),腹腔给予橄榄油和生理盐水ig;(2)模型组(20只),以CCl4ip法诱导大鼠肝纤维化;(3)干预组(20只),在造模的同时给予红景天ig。8 wk实验结束时处死动物,留取部分肝脏组织做HE,部分应用半定量RT-PCR检测HAb18G/CD147mRNA的表达情况,部分用免疫组化检测肝组织中HAb18G/CD147的表达。结果:干预组大鼠肝组织中HAb18G/CD147mRNA及蛋白阳性表达阳性率明显均低于模型组(P<0.05);肝组织HAb18G/CD147蛋白表达与HAb18G/CD147mRNA水平变化成正相关。结论:中药红景天能有效抑制CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏中HAb18G/CD147表达。

大黄酸和红景天对肝纤维化大鼠α-SMA、Hab18G/CD147表达的影响

目的:探究大黄酸联合红景天用药对CCl4腹腔注射所致肝纤维化的治疗作用研究.方法:雄性SD大鼠共40只,随机分为空白对照组(A)、模型组(B)、大黄酸组(C)、大黄酸联合红景天组(D),每组10只.CCl4腹腔注射3次/周;CCl4给药一周后,各组在造模的同时进行大黄酸和红景天中药灌胃.实验进行6周后断颈处死大鼠,取肝脏进行取材固定,病理切片观察、免疫组织化学法检测α-SMA、Hab18G/CD147蛋白的特异性表达的情况.结果:与模型组比较,在大黄酸组中,大鼠肝脏中α-SMA、Hab18G/CD147表达减少(P<0.05),但高于对照组;与大黄酸组相比较,大黄酸和红景天联合用药组α-SMA、Hab18G/CD147蛋白含量降低、两组有显著性差异(P<0.05).结论:大黄酸和红景天联合用药能够有效降低大鼠肝纤维化中α-SMA、Hab18G/CD147的表达,对肝纤维化具有一定的治疗作用.

HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G的亲和性

目的 :研究HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD14 7抗原的亲和性。方法 :利用流式细胞仪测定人肝癌细胞 (HHCC ,SMMC772 1)上HAb18G抗原的表达。分别在HAb18G/CD14 7拮抗肽AP 1、AP 2和AP 6的N端标记生物素 ,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定AP 1、AP 2和AP 6与HHCC或SMMC772 1的结合能力。结果 :HAb18G抗原在HHCC和SMMC772 1细胞上均呈高表达。AP 6对HHCC的亲和力最强 ,AP 2次之 ,AP 1最弱。AP 6对与SMMC772 1的亲和力也最强 ,AP 1次之 ,AP 2未检测到。结论 :HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G/CD14

Inhibitory effects of antisense RNA of HAb18G/CD147 on invasion of hepatocellular carcinoma cells in vitro

AIM: To study the inhibitory effects of antisense RNA of HAb18G/CD147 on invasion of hepatocellular carcinoma (HCC) cells in vitro.METHODS: Antisense RNA of HAb18G/CD147 vector PCIasHAb18G was constructed by reversely inserting HAb18G/CD147 cDNA to eukaryotic expression vector PCI-neo. The HCC cell line HHCC was transfected by PCI-asHAb18G via cation liposome. Expression of HAb18G/CD147 of transfected cells selected by G418 (geneticin) was observed by immunohistochemical SP staining and FACS (fluorescence activated cell sorting). Gelatin zymography was used to determine the effect of PCI-asHAb18G on reducing secretions of MMP2 and MMP-9 of the transfected cells. Boyden chamber was employed to test the invasion of HCC cells in vitro.RESULTS: The construction of antisense RNA vector PCIasHAb18G was verified correct by partial nucleotide sequencing and restricted endonuclease digestion. The expression of HAb18G/CD147 in transfected HHCC was inhibited by PCI-asHAb18G. Secretions of MMP-2 and MMP9 of transfected HHCC were reduced and the invasion of transfected HHCC was inhibited compared to HHCC,respectively.CONCLUSION: Invasion of HCC cells can be inhibited by antisense RNA of HAb18G/CD147. HAb18G/CD147 may be used as a potential target of drugs for anti-invasion and metastasis of HCC.

HAb18G/CD147拮抗肽对荷瘤裸鼠的实验性治疗作用

目的 研究肝癌转移相关因子HAb18G /CD14 7的合成拮抗肽 (APs)对荷人肝癌裸鼠的实验性治疗作用。方法 采用皮下接种人肝癌细胞系HHCC和肝脏原位接种人高转移肝癌细胞系MHCC97 H形成瘤块的BALB /C裸鼠模型 ,静脉给予APs :2 .5mg /kg ,皮下组 :隔日 1次 ,共 12次 ;原位组 :每日 1次 ,共 15次。皮下组 :观察接种HHCC细胞后皮下肿瘤生长情况 ,从d 10开始 ,每 4d测定 1次肿瘤体积 ;观察 15 0d裸鼠生存情况。原位组 :接种MHCC97 H后 ,d 2 1杀裸鼠 ,观察肝脏各叶肿瘤播散情况 ,计数灶数 ;观察肺脏和腹腔淋巴结转移情况 ;肝脏、肺脏和淋巴结结合病理学切片检查。结果 皮下荷HHCC实验 :在d 30AP I治疗组瘤体积 2 15 .0± 2 5 9.5mm3 ,对照组 4 71.4± 187.5mm3 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。AP 1和AP 6治疗组与对照组比较 ,15 0d生命延长率分别为 4 9.8% (P <0 .0 1)和 4 3.7% (P <0 .0 5 )。肝脏原位荷MHCC97 H实验 :AP 1和AP 6治疗组 ,肝内播散灶数少于对照组 ;肺脏、淋巴结转移也少于对照组。结论 HAb18G /CD14 7拮抗多肽AP 1和AP 6对裸鼠皮下和肝脏原位接种人肝癌的生长抑制和延长生命有明显的作用。

HAb18G/CD147真核荧光蛋白的表达及鉴定

构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22—50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用。通过PCR及OverlappingPCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJM109,构建含有肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及E51的真核荧光蛋白表达载体。并经限制性酶切及序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS-7细胞,进行瞬时表达;荧光显微镜观察EGFP表达,通过流式细胞术检测蛋白的表达情况,明胶酶谱法鉴定其功能。成功地构建了真核荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,并经限制性酶切及序列分析证明外源基因插入正确;流式细胞术鉴定该蛋白表达正确;功能实验证实缺失片段E51不具有诱导成纤维细胞分泌MMPs的功能。结果显示HAb18G/CD147基因第22—50位氨基酸与其刺激成纤细胞分泌MMP和功能有密切关系。实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础。

HAb18G/CD147的表达与卵巢上皮性恶性肿瘤侵袭转移及意义的研究进展

卵巢恶性肿瘤死亡率居妇科恶性肿瘤之首,由于早期症状隐匿,缺乏早期诊断方法,故多数临床病患发现时已属晚期。卵巢上皮性恶性肿瘤最为常见,由多因素参与、多步骤完成的发生、转移过程一直是学者研究的焦点。HAb18G/CD147广泛存在肿瘤组织中,通过诱导生成基质金属蛋白酶(MMP-s)促进肿瘤生长,C-Jun氨基末端激酶(JNK)途径过度激活等,参与卵巢恶性肿瘤的侵袭转移。作为一种新型肿瘤抗原,HAb18G/CD147可能成为一种早期诊断、综合评估卵巢上皮性恶性肿瘤的有效指标。

不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较

目的:制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清,比较不同免疫方案的免疫效果.方法:以原核表 达的GST HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3/HAb18G及HCC细胞为免疫原,分别采用蛋白常规免疫、DNA肌 肉免疫及pcDNA3/HAb18G HCCbooster(DNA cellbooster)免疫接种BALB/c小鼠.采用间接ELISA和细胞ELISA,同时测定免 疫血清中抗变性和天然HAb18GEFIgG抗体的滴度和Ig亚类.用Westernblot检测各免疫方案制备的抗血清,与变性 HAb18GEF抗原结合的特异性.用免疫荧光法验证DNA cellbooster免疫接种法制备的抗血清,与细胞膜上天然HAb18G抗原的 结合特异性.结果:以GST HAb18GEF常规免疫后,可诱导高滴度的IgG1抗体产生,但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表 位;以pcDNA3/HAb18G肌肉免疫后,可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生,但滴度较低;以DNA cellbooster免疫后,可 诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生.结论:不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的 多克隆抗血清,为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础.

HAb18G/CD147胞外近膜区与integrin β1亚基MIDAS位点结合调节肝癌细胞恶性表型

肝癌相关抗原HAb18G／CD147分子与整合素integrin α3β1、integrin α6β1之间存在着相互作用，但其作用机制还未得到阐明。

HAb18G/CD147在激活的人脐静脉内皮细胞表达上调促进肿瘤血管生成

以前的研究证实HAb18G/CD147分子是一个在多种恶性肿瘤细胞表面高表达的质膜糖蛋白，与肿瘤的恶变显著相关。但该分子在内皮细胞的作甩尚未被揭示。本研究发现，HAh18G／CD147在激活的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）表达显著增强。

新型标志物HAb18G/CD147在大样本胃癌组织中的表达研究

目的:探讨新型标志物HAb18G/CD147在胃癌组织中的表达及其与临床病理学的关系。方法:收集手术切除的胃癌样本552例,构建组织芯片,并以100例癌旁正常胃黏膜组织作为对照。利用免疫组化方法检测2组HAb18G/CD147的抗原表达和定位,并追踪随访胃癌组患者12～72个月。结果:HAb18G/CD147抗原定位于细胞膜,在胃癌组织中表达阳性率高于癌旁正常胃黏膜组织(63%比55%)。肿瘤组织中HAb18G/CD147的高表达与肿瘤大小、Borrmann分型、Lauren组织学分型、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P<0.05),但与患者的年龄、性别、肿瘤生长部位、肿瘤分化程度、有无脉管浸润及远处转移间无相关性(P>0.05)。HAb18G/CD147阳性表达与患者术后近期生存率显著相关(P=0.023)。结论:HAb18G/CD147在胃癌中的表达与胃癌的发展、侵袭性行为及预后均相关,可作为临床评估胃癌生物学行为不良的一项分子标志。

HAb18G/CD147拮抗肽的筛选及对肝癌细胞侵袭力的抑制

目的 筛选能与HAb18G/CD14 7相结合的多肽 ,从中寻找该因子的肽类拮抗剂 ,抑制肝癌的恶性转移。方法 利用亲和层析法获得HAb18G/CD14 7抗原 ,在此基础上通过筛选噬菌体 12肽库得到与HAb18G/CD14 7相结合的多肽 ,以固相法合成这些多肽并用质谱仪进行鉴定。最后利用侵袭力抑制实验从中筛选拮抗肝癌细胞转移的功能多肽。结果 经纯化的HAb18G/CD14 7分子量为6 5 0 0 0 ,Westernblot验证结果阳性。用此纯化分子筛选噬菌体肽库 ,得到 9条多肽。经体外功能验证 ,9条肽抑制肝癌细胞侵袭力的活性不一 ,其中 3条有显著活性 (P <0 .0 1) ,活性最好的一条肽能使穿过Boyden小室膜的肝癌细胞数量较对照减少 90 .1%。结论 以亲和层析法和噬菌体随机肽库法相结合 ,筛选获得了有抗肝癌细胞侵袭力功能的多肽 ,此结果为抗肝癌转移肽类药物的研制奠定了基础。