基于血清抗-HBc定量建立慢性HBV感染者显著肝组织病理学改变的无创诊断模型

目的建立慢性HBV感染者显著肝组织病理学改变的诊断模型,并评估模型的诊断价值。方法选取2011年12月—2017年12月在上海市公共卫生临床中心肝胆内科住院并进行肝活检且未经抗病毒治疗的457例慢性HBV感染者,收集患者的肝活检病理结果及常规实验室指标,并进行抗-HBc定量检测。依据Scheuer方法进行炎症分级(G)及纤维化分期(S),分为显著与非显著肝坏死性炎症、肝纤维化和肝损伤组。根据单因素分析和多因素logistic回归分析构建预测显著肝坏死性炎症、显著肝纤维化和显著肝损伤的数学模型,并与FIB-4、GPR、APRI、RPR利用ROC曲线分析评估模型的预测性能,根据ROC曲线下面积(AUC)比较诊断价值。结果457例患者中显著肝坏死性炎症(G≥2)178例,非显著肝坏死性炎症(G<2)279例,显著肝纤维化(S≥2)248例,非显著肝纤维化(S<2)209例,显著肝损伤(G≥2或/和S≥2)264例,非显著肝坏死性炎症(G<2和S<2)193例。根据单因素分析和多因素logistic回归分析结果,分别建立由抗-HBc、AST、PLT、TTR等指标组成的预测显著肝坏死性炎症的数学模型M-SHN,由抗-HBc、PLT、ChE、TTR、性别等指标组成的预测显著肝纤维化的数学模型M-SHF,及由抗-HBc、PLT、TTR、性别等指标组成的预测显著肝损伤的数学模型M-SHI,并通过ROC曲线分析各模型的预测价值,M-SHN模型的AUC为0.826(95%CI:0.788~0.860),M-SHF模型的AUC为0.776(95%CI:0.735~0.814),M-SHI模型的AUC为0.789(95%CI:0.748~0.825)。结论基于患者常规实验室指标及血清抗-HBc定量,建立了M-SHN、M-SHF、M-SHI模型,对于显著肝坏死性炎症、显著肝纤维化、显著肝损伤有较为可靠的预测价值,可帮助临床评估患者是否需要进行抗病毒治疗。

OBI感染中单独抗-HBc+和非单独抗-HBc+献血者S区变异情况分析

目的 了解本市献血人群隐匿性乙肝(OBI)感染中单独抗-HBc+和非单独抗-HBc+献血者S区变异情况。方法 采用ELISA与NAT筛查OBI标本,扩增和外送测序,获得单独抗-HBc+20份及非单独抗-HBc+25份测序标本。结果 本市献血者OBI检出率为0.10%(155/161 045),其中,抗-HBc阳性率为74.19%(115/155);OBI检出率与性别无关,随献血者年龄增高而增高(P<0.05);单独抗-HBc阳性率为22.58%(35/155),非单独抗-HBc阳性率为51.61%(80/155);45份OBI测序标本中,B基因型占比为73.33%(33/45),C型为20.00%(9/45),单独抗-HBc+组献血者突变位点多于非单独抗-HBc+组,位于MHR上的S114T和V168A变异率有差异(P<0.05)。结论 衢州市OBI感染基因型以B型为主,单独抗-HBc+组献血者突变位点高于非单独抗-HBc+组,可能更适合作为血液OBI筛查指标之一。

分泌抗-HBe和抗-HBc单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

应用具有 HBeAg 和 HBcAg 双抗原活性的基因工程菌表达产物的粗提物免疫 BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系 SP^2/0融合,分别筛选出4株抗 HBe 单克隆抗体杂交瘤细胞株(WHBe_1,WHBe_2,WHBe_3,WHBe_4)和4株抗 HBc 单克隆抗体杂交瘤细胞株( WH-Bc_1,WHBc_2,WHBC_3,WHBc_4)。经3个月连续培养,能稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体。

259例HBcAg阳性结果分析

乙肝病毒核心抗原(HBcAg)存在于乙肝病毒(HBV)颗粒内部或与乙肝核心抗体(抗HBc)以复合物的形式存在,经开壳处理可检出,它是比乙肝病毒e抗原(HBeAg)更为可靠的HBV复制和传染性的标志。我们搜集了259例HBcAg阳性资料,对其结果进行了分析,并探讨了HBcAg与HBV其它五项指标(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe和抗HBc)的关系。

抗HBc(-)/抗HBc-IgM(+)模式分析

目的 探讨 HBc(- ) /抗 HBc- Ig M(+ )模式的客观存在及其临床价值。方法 采用酶联免疫法(EL ISA)。结果 3 2 5 7份抗 HBC(- )的血清标本中 ,发现抗 HBc(- ) /抗 HBc- Ig M(+ )模式 83份 ,占 2 .5 %。结论 抗 HBc(- ) /抗 HBc- Ig M(+ )作为少见模式在临床上客观存在 ,遇此情况不应轻易判断为检验结果错误 ,而应在更新检验技术和方法 。

以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体的构建

目的 构建以HBVHBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达质粒 ,以探讨HBV基因免疫的新途径。方法 PCR扩增HBc第 1～ 72aa及 93～ 183aa编码序列并定向克隆至pcDNA3.1的NheⅠ /XhoⅠ位点 ,构建真核表达载体pHBcdM。合成HBV多表位基因并插入HBc原脊区基因位点 ,构建HBc Mep融合基因真核表达质粒。经PCR、酶切及序列测定等方法筛选阳性质粒。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约 885bp、编码HBc与HBV多表位的复合基因。结论 成功构建了以HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因真核表达载体pHBc Mep ,为研究pHBc Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。

HBC低热高抗裂大坝混凝土的开发研究

在"九五"国家科技攻关项目"高贝利特(HBC)新型胶凝材料研究"的基础上,进行了HBC低热高抗裂大坝混凝土的开发研究,通过与三峡二期大坝中热水泥(MHC)混凝土的平行对比试验,初步论证了HBC大坝混凝土具有良好的工作性、力学性能和耐久性能。HBC大坝混凝土在相同配合比下的绝热温升将降低3～5℃;抗裂性分析表明,HBC大坝混凝土具有良好的抗裂能力,是一种可以在水工大体积混凝土工程中推广应用的新型低热高抗裂大坝混凝土。

抗HBc时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的 用竞争法建立抗HBc时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)方法。方法 以基因重组HBcAg包被板 ,Eu3 + -异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 (Eu3 + DTTA)标记抗HBc IgG单克隆抗体 ,建立抗HBcTRFIA方法。数据采用Log Logit函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。结果 方法的批内和批间变异系数分别为 2 30 %和 6 30 % ,回收率为 96 72 % ,灵敏度为 0 2NCU/ml。本方法与抗HBs和抗HBe无交叉反应 ,Eu3 + 标记物稳定 6个月以上。结论 TRFIA是一种新的抗HBc免疫检测技术 ,具有灵敏度高和稳定性好等优点 ,能够用于定量测定抗HBc

蓝舌病毒HbC株与不同种系细胞相互作用及群特异性抗原特征

BTV HbC株和蓝舌病毒标准株BTV 10分别接种在不同种系细胞如猴肾传代细胞 (Vero)、人宫颈癌细胞(Hela)和小鼠神经胶质瘤细胞 (C6)等细胞株上 ,比较研究了BTV HbC在不同种系细胞上的增殖特征 ,BTV HbC与BTV 10在相同细胞上的复制增殖特征 ,病毒与细胞相互作用的显微和超微结构特征。用免疫交叉反应研究了BTV HbC株与BTV 10型标准株之间的血清学关系。本研究结合本室对BTV HbC株基因组图谱分析和蓝舌病毒群特异性抗原编码基因S7的RT PCR分析 ,进一步证实了BTV

乙型肝炎患者血清中抗HBc-IgM的临床意义

抗HBc-IgM在鉴别急性乙肝、慢性乙肝及慢性乙肝急性发作中的意义。应用亚培试剂盒检测抗HBc-IgM,追溯120例抗体阳性患者的临床诊断和各临床类型的抗体滴度水平分布,同时统计急性乙肝、慢性乙肝和慢性乙肝急性发作共240例患者的抗HBc-IgM检测结果,比较其抗体阳性率和滴度水平之间的差异。抗HBc-IgM阳性率,急乙肝组明显高于慢乙肝组和慢乙肝急性发作组。抗体滴度<2.0者,慢乙肝组和慢乙肝急性发作组的百分率明显高于急肝组。抗体滴度的检测对鉴别急乙肝和慢乙肝急性发作有较大的意义。

斑点金免疫渗滤法测定人全血中抗HBc抗体

目的：建立一种适合斑点金免疫渗滤法（Ｄｏｔ Ｉｍｍｕ ｎｏ ｇｏｌｄＦｉｌｔｒａｔｉｏｎＡｓｓａｙＤＩＧＦＡ）特点的快速全血诊断方法。方法：选择可瞬间分离血中细胞和血清的膜，依据ＤＩＧＦＡ的原理对３３份ＨＢｃＡｂ阳性血样和４８份阴性血样进行了全血抗ＨＢｃＡｇ抗体的检测。结果：测定阳性标本符合率为９６．７％，阴性标本符合率为１００％。结论：提供了一种简便、快速、可行的全血检测抗ＨＢｃＡｇ抗体的方法。

抗HBc-ScFv基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及其体外表达

目的:构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体,并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因. 方法:采用DNA重组技术将特异性人源性抗卜HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与5 型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染B15183细菌,经细菌内同源重组产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒载体pAd—ScFV,经脂质体法转染293细胞,包装产生携带抗HBc scFv基因的重组腺病毒Ad—scFv,体外转染HepG2细胞,PCR和ELISA法检测目的基因及其表达. 结果:构建了表达抗HBc ScFv基因的复制缺陷型腺病毒,病毒滴度达4×1015 PFU/L,并能在真核细胞中有效表达目的基因. 结论:成功构建表达抗HBc ScFv的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步开展抗HBc ScFv在抗HBV基因治疗中的作用研究提供实验基础.

患者的ELISA一步法检测乙型肝炎抗-HBc、抗-HBe存在假阳性

为证实酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法检测抗-HBc和抗-HBe之间的相互交叉反应，用国产试剂对166例临床标本及266例体检标本，采用一步法和两步法检测并与Abbott产品结果比较发现其相对特异性，抗-HBc依次为50％、67．7％和98．2％、97．5％。抗-HBe依次为89．3％、88．6％和98．8％、99．2％，一步法均明显低于两步法。将两法结果不符的再与Abbott产品结果比较，抗-HBc检测临床标本存在30％和体检标本存在16％的差异，抗-HBe也分别存在12．2％和11．9％的差异，这些差异主要是试剂特异性低引起的非特异性交叉反应。因此一步法检测抗-HBc和抗-HBe存在假阳性。

一种快速检测HbCS和HbQS点突变的PCR新方法

【目的】建立一种快速的PCR基因诊断方法,用以检测中国人常见的非缺失型α地中海贫血HbCS和HbQS。【方法】根据突变扩增系统(ARMS)的基本原理,自行设计了一套含4条等位特异性引物的PCR反应体系(4P-ASPCR法),分别用以检测中国人常见的HbCS和HbQS的点突变类型。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法和DNA序列分析对检测结果进行验证。【结果】该方法检测到的HbCS突变、HbQS突变,与PCR-酶解法和DNA序列分析得出的结果一致。【结论】该新型PCR法检测HbCS和HbQS点突变快速、准确,适于推广应用,该设计思路亦可用于检测其它点突变。

淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。

重组HBcAg直接包被固相的抗-HBc ELISA的研究

用高纯度酵母菌基因工程重组HBcAg直接包被聚氯乙烯微孔板建立了检测抗HBc的一步ELISA。与常用的先吸附抗HBc再结合HBcAg的二步包被法相比较,除操作步骤简省外,检测敏感度亦订所提高。在对120份血消标本与用Abbott试剂的对比测定中,一步法和二步法的相对敏感度分别为69.3%和36.0%。

HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞中的转染与表达

目的观察HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞株nepG2细胞内表达情况。方法将构建的HBc与HBV多表位复合基因真核表达质粒pHBcMep以Lipofectamine介导转染HepG2细胞,通过间接免疫荧光、Western-blot检测表达产物。结果经G418筛选的阳性转染细胞经间接免疫荧光染色后在紫外光激发时发出明显的荧光,而未转染质粒或转染pcDNA3.1的HepG2细胞则无明显荧光。Western-hot结果显示表达产物约为33kDa,并能与抗preS2多抗特异性结合。结论HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞内获得正确表达。

对携带HCC表位的HBc病毒样颗粒负载的DC疫苗的免疫评价

目的:探讨携带肝细胞癌(HCC)表位的嵌合蛋白颗粒HBc-VLPs负载小鼠BMDCs制备的DC疫苗,免疫小鼠后诱导抗原特异的细胞免疫应答和抗肿瘤效应。方法:制备HLA-A2转基因小鼠来源的BMDCs,将三种带有高表达于HCC的HLA-A2限制的CTL表位的HBc-VLPs、三种抗原表位肽和不含HCC表位野生HBc-VLPs分别负载HLA-A2转基因小鼠BMDCs制备成DC疫苗,阴性对照组用PBS替代。将HLA-A2转基因小鼠分为四组,分别免疫上述DC疫苗并对其免疫效果进行评价:体外检测抗原特异性淋巴细胞内IFN-γ的产生和CTL细胞活性并观察不同方法处理的DCs对肿瘤生长的抑制情况。结果:与其他组相比,HBc-VLPs负载的DCs免疫小鼠后第8天,流式细胞仪即可检测到分泌IFN-γ的CD8+T细胞存在;用LDH法检测到较强的抗原特异性CTL活性;在肿瘤接种后的20天之前均未见到明显的肿瘤块,具有显著抗肿瘤作用。结论:利用携带HCC抗原表位的HBc-VLPs负载DCs后得到可强烈诱导免疫活性和明显抗肿瘤作用的DC疫苗,为DC疫苗的优化和评价提供了实验方法,也为进一步深入研究新型肝细胞癌治疗性疫苗的功能和应用奠定了基础。

乙肝疫苗对单项抗-HBc、抗-HBe及抗-HBc均阳性者抗-HBs产生的探讨

[目的]探讨接种乙肝疫苗对促进乙肝抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者产生抗-HBs的作用。[方法]对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗HBc 2项同时阳性者,进行乙肝疫苗接种。接种全程结束后1个月,抽血作抗-HBs检查。[结果]接种乙肝疫苗后,抗-HBs总阳转率为92.59%,抗-HBc阳性者抗-HBs阳转率为94.74%,抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者阳转率为87.5%。男性抗-HBs阳转率为93.33%,女性为91.67%。[结论]接种乙肝疫苗对抗-HBc单项阳性及抗-HBe、抗-HBc 2项同时阳性者,有促进抗-HBs产生的作用。

四川盆地HBC地区飞仙关组三段储层特征研究

以四川盆地HBC地区飞仙关组三段储层为研究对象,在实测剖面和详细观察岩心的基础上,从储层岩石学特征、储集空间类型、孔隙结构特征及储集物性特征等方面对储层进行了研究。飞仙关组三段储集岩主要为鲕粒灰岩,主要形成于台内鲕粒滩沉积体系中,储集空间主要为铸模孔、粒内溶孔和晶间溶孔,孔隙度主要分布在2%～5%,渗透率主要分布小于0.02×10^(-3)μm^2,储层类型主要为裂缝-孔隙型。四川盆地HBC地区飞仙关组三段储层以Ⅱ、Ⅲ类储层为主。