乙肝病毒外膜大蛋白、前S1抗原、HBV-DNA与血清标志物之间相关性分析

目的通过对乙型肝炎患者HBV-LP、Pre-S1抗原、HBV-DNA载量和乙型肝炎血清标志物的检测,探讨反映不同血清学类型患者体内病毒复制及抗病毒疗效监测的最佳指标以及分析各指标之间的关系。方法对864例HBV感染者及100例健康体检者血清采用ELISA法定性检测HBV-M;ELISA双抗体夹心法检测HBV-LP、Pre-S1;荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性模式组(大三阳)HBV-LP、Pre-S1及HBVDNA阳性率显著高于其它HBV-M模式组(P<0.05);HBV-LP与HBV-DNA的阳性率无显著差异(P>0.05),PreS1的阳性率明显低于HBV-LP与HBV-DNA的阳性率(P<0.05);HBV-DNA拷贝数与HBV-LP、Pre-S1平均A值具有明显的相关性(相关系数r=0.926),而与HBsAg定量值无明显相关性。结论 HBV-LP比Pre-S1试剂效果大大提高,且大蛋白的检出率与血液中病毒DNA的检出高度符合,对于判断病毒复制具有重要意义,可作为HBeAg及HBV-DNA的补充检测指标。

HBeAg阴性的慢性乙肝患者血清中LHBs与HBV-DNA水平的关系

目的:探讨低水平HBV-DNA乙肝患者乙肝病毒外膜大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)的表达及其意义,从而探讨LHBs是否可以用作乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标。方法:对83例HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪检测HBeAg,实时荧光定量PCR方法检测HBV DNA。分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性。结果:在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.38%;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.25%,吸光度值与拷贝数对数值没有显著的相关性(r=0.25,P=0.36);高拷贝数组,阳性率为95%,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P<0.0001)。结论:检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨。

乙型肝炎病毒大蛋白在血清HBeAg阴性HBV感染者中的检测意义

目的探讨乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP)在血清HBeAg阴性HBV感染者中的检测意义。方法对162例HBV感染者血清采用酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒大蛋白及乙型肝炎病毒标志物,FQ-PCR定量检测HBV-DNA。结果162例HBV感染者血清中,HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg之间均关联显著(P均<0.01);HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg间阳性率均存在显著性差异(P均<0.05);HBV-LP阳性率为84.57%,较HBV-DNA、HBeAg高,分别为62.96%、38.89%(P均<0.05);血清HBV-LP浓度及其阳性率在HBeAg和HBV-DNA的阳性组与阴性组间均存在显著性差异(P均<0.05);HBeAg阳性组中HBV-LP与HBV-DNA间阳性率无显著性差异(P>0.05),检测符合率为96.83%;HBeAg阴性组中HBV-LP与HBV-DNA间阳性率存在显著性差异(P<0.05);HBV-LP阳性率为76.77%,较HBV-DNA高。在58例HBeAg和HBV-DNA共同阴性的HBV感染血清中,检出HBV-LP阳性42例。结论血清HBV-LP是监测血清HBeAg阴性HBV感染者体内病毒复制、疾病进程与疗效的敏感指标。

术前筛查HBeAg阴性HBV感染者检测乙肝大蛋白的意义

目的了解肝功能正常、HBeAg阴性HBV感染的术前筛查患者乙肝大蛋白(HBV-LP)阳性情况,评判血清HBV-LP检测在这类乙型肝炎患者中的意义。方法使用ELISA法检测180例HBeAg阴性HBV感染的术前筛查患者HBV-LP、乙肝前S1(HBVpreS1),同时采用实时定量PCR法做HBVDNA水平检测。结果 180份HBeAg阴性HBV感染血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBVDNA检测阳性率分别为21.1%、34.4%和32.7%,χ2检验显示三组检测阳性率差异有统计学意义(χ2=9.1457,P=0.0103),用Scheffe法做率的两两比较显示:PreS1-Ag检测阳性率明显低于HBV-LP和HBVDNA(P<0.05),而HBV-LP和HBVDNA检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。HBV-LP和HBVDNA配对检测显示结果差异无统计学意义(χ2=0.1739,P=0.6767),同时相关性分析示良好相关性(χ2=95.655,P=0.0000,r=0.7217)。49例HBVDNAcopies/ml常用对数值与HBV-LP定量OD值的散点图显示正相关(r=0.6192)。结论对术前筛查HBeAg阴性乙型肝炎携带者,HBV-LP在反应病毒复制方面是一个优于HBVpreS1检测的良好指标,与HBVDNA检测有良好的相关性,在不能开展HBVDNA检测的基层单位可作为评价乙型肝炎传染性的一种替代与补充。

乙型肝炎病毒大表面蛋白诱导内质网应激调控p27 IRES翻译活性的机制研究

目的探讨在乙型肝炎病毒大表面蛋白(LHB)诱导的内质网应激条件下,抑癌基因p275′UTR内部核糖体进入位点(IRES)的活性变化及其调控机制。方法构建双荧光素酶报告质粒,用双荧光素酶报告基因实验检测p275′UTR中IRES的活性;利用qRT-PCR和Western blotting检测LHB诱导的未折叠蛋白反应相关分子水平;RNA下拉、质谱技术和RNA免疫沉淀筛选并确认潜在的与p275′UTR结合的相关蛋白;siRNA转染建立PCBP2和ANXA2敲低细胞模型,用双荧光素酶报告基因检测在敲低PCBP2和ANXA2后p27 IRES翻译活性的变化。结果成功构建了检测p27 IRES活性的双荧光素酶报告质粒。LHB可以诱导内质网应激,同时显著提高p27的IRES翻译活性(P<0.01)。LHB过表达激活了PERK通路并提高了eIF2α的磷酸化水平,特异性PERK通路抑制剂GSK2606414使RERK和eIF2α的磷酸化水平降低,从而引起p275′UTR的IRES翻译活性显著降低(P<0.01,P<0.05)。同时,磷酸酶抑制剂Sal003能显著增加eIF2α磷酸化水平,使p27 IRES活性进一步增强(P<0.01,P<0.05)。最后,我们发现PCBP2和ANXA2作为潜在的反式作用因子可增强p27 IRES活性。结论LHB诱导的内质网应激通过eIF2α磷酸化增强p27 IRES翻译活性。反式作用因子PCBP2和ANXA2正向调控其IRES翻译活性。

乙型肝炎病毒感染者血清HBV-LP检测意义及其与PreS1抗原、HBV DNA之间关系的研究

目的初步探讨HBV感染者血清中的乙肝大蛋白（HBV—LP）检测的临床意义，并对其与PreS1抗原、HBVDNA之间的关系进行分析。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测192例HBV感染者血清中的HBV—LP，PreS1抗原及HBV分子标志物（HBV M），并用荧光定量PCR方法检测HBV DNA。结果192例HBV感染者血清HBV—LP．PreS1抗原、HBVDNA及HPeAg阳性率分别为67．18％、54．17％、52．60％和9．38％，HBV—LP阳性率高于PreS1抗原阳性率（χ^2=6．82，P〈0．05）、HBVDNA检测阳性率（χ^2=8．50，P〈0．05）及HBeAg阳性率（χ^2=135．80，P〈0．05）；HBV—LP含量（A值）与HBVDNA拷贝数的对数值呈正相关关系（r=0．798，P〈0．05）。结论血清中HBV—LP的含量与HBVDNA的拷贝数相关性较好，HBV—LP能准确的反映乙肝病毒复制情况，是HBeAg、PreS1抗原的重要补充。

血清乙型肝炎病毒大蛋白水平与病毒复制程度的关系

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清大蛋白(HBV-LP)水平与HBV复制程度的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对血清HBV-LP进行检测;乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)检测;HBV DNA利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测。结果293份HBsAg阳性血清中HBV-LP阳性检出率(75.1%)与HBV DNA阳性检出率(74.4%)差异无统计学意义(P>0.05)。血清HBV-LP与HBV DNA水平具有良好的正相关性(r=0.724),在HBeAg阳性患者中,HBeAg定量结果与HBV DNA水平具有一定的相关性(r=0.368)。结论HBV-LP较HBeAg能够更好地反映血清HBV DNA水平,HBeAg阳性患者HBeAg定量检测值也在一定程度上反映出血清HBV DNA水平。

HBeAg阴性慢性乙肝患者乙肝病毒大蛋白检测研究

目的通过检测HBe Ag阴性慢性乙型肝炎患者血清中乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)和HBV-DNA,探讨HBV-LP与HBV-DNA的关系,研究HBV-LP反映HBV复制情况的可靠性,揭示HBe Ag阴性慢性乙肝患者检测HBV-LP的临床意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)对HBV-LP和HBe Ag进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV-DNA进行检测。结果 106个HBe Ag阴性慢性乙肝患者HBVDNA、HBV-LP的检测结果显示:HBV-LP的检测结果与HBV-DNA的检出结果差异无统计学意义(p>0.05)。HBV-DNA拷贝数的对数值与HBV-LP含量具有正相关关系,相关系数r=0.901。结论 HBVLP能够反映出乙肝病毒的复制情况,血清中的HBV-LP与HBV-DNA具有较好的相关性,是反映HBe Ag阴性乙肝患者病毒复制情况的新的血清免疫学指标。

血清HBV-LP测定在乙型肝炎病毒活动性感染诊断中的意义

探讨血清乙型肝炎病毒大蛋白(Hepatitis B virus large surface protein,HBV-LP)检测在乙型肝炎病毒活动性感染诊断中的临床意义。选择慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者194例,其中HBV-DNA阳性患者144例,HBV-DNA阴性患者50例。采用化学发光法检测乙肝两对半及HBc Ab-Ig M,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-LP,采用实时荧光定量PCR技术检测HBV-DNA。194例慢性HBV感染者中,活动性感染者92例(47.4%),非活动性感染者102例(52.6%)。HBe Ag阳性患者107例(55.2%),阴性患者87例(44.8%)。HBe Ag阳性患者中,活动性感染者64例,非活动性感染者43例。HBe Ag阴性患者中,活动性患者28例,非活动性患者59例。活动性感染者与非活动性感染者之间HBV-LP水平存在统计学差异,(105.8±76.4)vs(59.0±60.3),P<0.001。受试者工作特征(ROC)曲线分析表明HBV-LP对HBV活动性感染诊断价值较低,曲线下面积(AUC)为0.689。进一步分层分析表明,HBV-LP对HBe Ag阴性活动性感染无诊断价值(AUC=0.547),但对HBe Ag阳性活动性感染具有一定的诊断价值(AUC=0.707)。乙型肝炎病毒慢性活动性感染患者HBV-LP显著升高,测定血清中的HBV-LP对HBe Ag阳性慢性活动性乙肝具有一定诊断价值。

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白水平检测意义探讨

目的：探讨慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清乙型肝炎病毒表面大蛋白（HBV-LP）水平差异及意义。方法选取2014年8月～2015年12月我院诊治的慢性乙型肝炎患者508例，乙型肝炎肝硬化患者74例，原发性肝癌患者29例，采用ELISA 法检测血清HBV-LP水平，采用FQ-PCR法检测血清HBV DNA水平。结果慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者血清HBV-LP阳性率分别为77.2%、82.4%和89.7%，血清HBV DNA阳性率分别为78.9%、83.8%和93.1%；3组血清HBV-LP水平分别为（9.78±4.25）μg/L、（17.24±8.63）μg/L和（38.65±19.38）μg/L，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 HBV-LP是乙型肝炎病毒感染者血清重要的标记物，与血清HBV DNA存在某种相关性，其检测的意义值得探讨。

乙型肝炎病毒pgRNA与不同血清学指标之间的相关性分析

本研究采用实时荧光定量PCR法,对保定传染病医院332例临床样本的测定以及临床数据的分析,发现HBV-DNA与HBV-pgRNA、HBV-LP以及HBV-pgRNA与HBV-LP具有相关性(r=0.7152,P<0.0001;r=0.3780,P<0.0001;r=0.3367,P<0.0001);按照HBeAg状态进行分析,当乙型肝炎病毒感染患者的HBeAg呈阳性时,其血清HBV-DNA以及HBV-pgRNA的平均含量均处于较高水平,而血清HBV-LP的含量相对较低,且血清HBV-pgRNA与HBsAg具有相关性;当乙型肝炎病毒感染患者的HBeAg呈阴性时,HBV-pgRNA的平均含量与HBV-DNA的平均含量接近,但其检出率高于HBV-DNA的检出率,而血清HBV-pgRNA与HBsAg的相关性较弱;血清HBcAb与HBV-pgRNA具有相对较弱的相关性。

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测对判断病毒复制的临床意义

目的:了解HBV外膜大蛋白(HBV-LP)对HBV感染、复制和乙肝患者诊断、治疗和预后评估的作用。方法:收集104例乙型肝炎患者血清(HBsAg阳性),同时检测血清HBV-M、HBV-LP、HBV DNA,HBV-LP检测采用ELISA法,HBV DNA由广州达安基因股份有限公司提供检测;测定采用FQ PCR。结果:不同HBV-M模式中,HBV DNA、HBV-LP阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05),HBV DNA含量(拷贝数对数)与HBV-LP浓度均值呈正相关关系。在72例血清HBV DNA阳性患者中,HBV-LP阳性65例,阳性率90.3%。结论:HBV-LP在不同HBV-M感染模式中,与HBV DNA的阳性率比较吻合,而且HBV-LP浓度能较好的反映体内HBV DNA的存在状态。

乙肝表面抗原大蛋白在基层医院的应用

目的:通过对我院337例乙肝表面抗原大蛋白(LHBS)阳性患者与HBV-DNA检测结果的比较,进一步证实LHBS在临床上的应用意义。方法:乙肝表面抗原阳性者385例,两对半中HBeAg阳性和两对半中HBeAb阳性的分别加做LHBS,同时送PCR实验室检测HBV-DNA。结果:①二者没有显著性差异。②HBV-DNA的拷贝数与LHBS的LOD值成正相关。结论:LHBS在基层医院应用与HBV-DNA意义基本相同。

乙型肝炎病毒外膜大蛋白对HBeAg阴性和低水平HBV-DNA乙型肝炎患者的检测意义

目的探讨HBV感染者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白(BHV-LP)与HBV-DNA、HBeAg、PreS1-Ag之间的关系及在判断病毒复制中的临床应用价值。方法对235例HBV感染及80例例健康对照血清采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测HBV-LP、HBeAg、PreS1-Ag,采用实时荧光定量PCR方法检测HBV-DNA。结果在235例HBV患者血清中,HBV-LP与HBV-DNA、PreS1-Ag、HBeAg关联显著(均P<0.05),HBV-LP阳性率85.11%,较HBV-DNA、PreS1-Ag、HBeAg敏感,差异有统计学意义(均P<0.01);HBeAg阴性组中,HBV-LP阳性率为75.20%,较HBV-DNA、PreS1-Ag敏感,差异有统计学意义(均P<0.01);HBV-LP水平与HBV-DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.9638,P<0.05);HBV-DNA阴性组中HBV-LP阳性率为71.43%,较PreS1-Ag、HBeAg敏感,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论HBV-LP能够反映HBV的复制情况,是反映HBeAg阴性和低水平HBV-DNA乙型肝炎患者体内病毒复制、疾病进程、疗效与预后判断的新的敏感指标。

血清HBV外膜大蛋白评估乙肝病毒感染的价值

目的检测慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBV外膜大蛋白(HBV-LP)含量,评估其在HBV感染中的临床价值。方法用新的ELISA方法检测处于不同HBV感染阶段患者血清中HBV-LP,同时测定HBV DNA及相关HBVM。对比HBV-LP和HBV DNA及其他HBVM在不同HBV感染阶段阳性率和血清含量。结果血清HBV-LP与HBV DNA及HBeAg含量呈正相关(r=0.743及r=0.542,P<0.01)。HBV-LP和HBV DNA的符合率最高(97.3%)。大部分HBsAg或(和)HBeAg阴性患者,血清HBV-LP均为阳性。结论 HBV-LP测定在HBV感染诊断、治疗及其预后判定方面均有重要的临床价值,尤其对于一些HBVM为阴性的CHB患者。

人T-bet和HBV-L共表达质粒的构建及体外表达

目的构建人转录因子T-bet基因与乙肝病毒表面抗原大蛋白全长基因(hepatitis B virus surface antigen large protein,HBV-L)的共表达载体,并检测其在体外的表达。方法利用PCR及基因重组技术,以人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的cDNA为模板,扩增获得人T-bet全长基因,以含有HBV-L的质粒pcDNA3.1-HBV-L为模板,扩增获得HBV-L基因,将上述2个基因克隆至真核表达质粒p IRES中,获得共表达质粒p IRES-T-bet-HBV-L。将该质粒转染293T细胞,经RT-PCR、ELISA和细胞免疫荧光试验检测其在真核细胞中的表达。结果限制性酶谱分析及测序证实重组质粒p IRES-T-bet-HBV-L构建成功;该质粒在体外转染293T细胞后,可表达T-bet与HBV-L两者的mRNA;细胞免疫荧光试验和ELISA检测结果证实,该质粒转染293T细胞后可表达T-bet和HBV-L蛋白。结论成功构建了共表达质粒pIRES-T-bet-HBV-L,该质粒能在293T细胞中表达。

HBV表面抗原大蛋白与人胰腺突触角蛋白6之间的相互作用

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺突触角蛋白6(STX6)在细胞内是否存在相互作用,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-STX6,采用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与STX6之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组相对荧光素酶活性值均存在差异,且均具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 LHBs与人胰腺STX6在胰腺细胞内存在相互作用。

e抗原阴性慢性乙肝患者血清表面抗原大蛋白、PreS1蛋白、PreS2蛋白与HBV-DNA检测分析

目的:通过检测HBeAg阴性慢性乙肝患者血清表面抗原大蛋白(HBV-LP)、PreS1蛋白、PreS2蛋白和HBV-DNA比较分析,以探讨血清乙肝大蛋白检测对于HBeAg阴性慢性乙肝患者在临床诊治中的价值和意义。方法:采用ELISA法检测247例HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV-LP、PreS1蛋白、PreS2蛋白,并应用实时荧光定量PCR技术平行检测HBV-DNA。结果:247例HBeAg阴性慢性乙肝患者HBV-DNA阳性率51.0%,血清HBV-LP阳性率66.4%,PreS1蛋白阳性率22.3%,PreS2蛋白阳性率34.0%,血清中HBV-LP阳性率明显高于PreS1蛋白和PreS2蛋白阳性率,差异均有显著性(P均<0.01)。结论:HBeAg阴性慢性乙肝患者检测其血清HBV-LP较PreS1蛋白和PreS2蛋白更敏感反映体内HBV感染和复制状态,HBV-LP更有利于HBeAg阴性慢性乙肝患者的疗效观察和预后判断。

血清乙肝病毒大蛋白与乙肝前S1抗原联合检测在HBeAg阴性乙肝患者诊断中的意义

目的探讨乙型肝炎e抗原阴性[HBeAg(-)]乙肝患者血清乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)和乙肝前S1抗原(PreS1-Ag)联合检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定300例慢性乙肝患者的血清HBV-LP和PreS1-Ag浓度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清HBV-DNA表达量;比较不同HBV-M模式下HBV-LP、PreS1-Ag与HBV-DNA的阳性检出率;分析以HBV-DNA表达量作为HBV感染及复制的金标准时,血清HBV-LP和PreS1-Ag单独检测及联合检测对HBeAg阴性乙肝患者的阳性预测值和阴性预测值。结果 (1)115例HBeAg(+)血清中,HBV-LP和PreS1-Ag的阳性率均与HBV-DNA阳性率差异无统计学意义(Ps>0.05);120例HBeAg(-)HBeAb(+)血清中,HBV-LP阳性率(64.2%)明显高于HBV-DNA阳性率(P<0.05),而PreS1-Ag阳性率与HBVDNA阳性率差异无统计学意义(P>0.05);65例HBeAg(-)HBeAb(-)血清中,HBV-LP阳性率(72.3%)和PreS1-Ag阳性率(67.7%)均明显高于HBV-DNA阳性率(Ps<0.05);(2)以185例HBeAg(-)乙肝患者的HBV-DNA表达量为参考标准,HBV-LP、PreS1-Ag的阳性预测值分别为72.6%、71.6%,阴性预测值分别为93.4%、84.1%;HBV-LP和PreS1-Ag联合检测,HBV-LP/PreS1-Ag双阳性中的HBV-DNA阳性率(66.0%)显著高于HBV-LP/PreS1-Ag双阴性(P<0.05)。结论血清HBV-LP和PreS1-Ag水平与HBV-DNA表达量有关,二者联合检测可灵敏地反映HBeAg(-)乙肝患者HBV的复制状态,预测HBV-DNA水平。

乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白LHBs的检测分析

目的探讨乙型肝炎病毒表面大蛋白(LHBs)检测对乙型肝炎诊断的实验价值。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和荧光定量PCR法对1 049例HBsAg阳性及694例HBeAg阴性慢性乙肝患者血清标本进行HBV DNA和LHBs检测。结果 HBsAg阳性患者中HBV DNA阳性率为66.12%(653/1 049),LHBs阳性率为68.18%(677/1 049),二者差异无统计学意义(χ2=1.18,P>0.05);LHBs含量与HBV DNA拷贝数对数值呈正相关性;HBeAg阴性慢性乙肝患者中HBV DNA与LHBs检出阳性率分别为43.80%(304/694)和51.73%(359/694),二者差异有统计学意义(χ2=8.74,P<0.01)。结论 LHBs能反映乙型肝炎病毒复制情况;对HBeAg阴性慢性乙肝患者而言,LHBs更能反映体内HBV感染和复制状态。